Kalp Diseksiyonu: Zebra Balığı Kardiyak Gelişimini Gözlemleme Yöntemi

- Zebra balığı kalbi dört odadan oluşur, sinüs venosus, atriyum, ventrikül, ve soğanlı arteriosis. Operkülum ve pektoral korse arasındaki ventral tarafta, pektoral yüzgeci destekleyen iskelet sisteminin bir parçası olarak ön tarafta bulunur. Kalbi parçalamak için, balık dokularının sabit bir pH'ını korumak ve ventral tarafı yukarı yönlendirmek için fosfat tamponlu salin içeren bir Petri kabına ötenazili sabit bir balık yerleştirin.

Balık kafasını gözler ve solungaçlar arasında kümespsleri ile tutun. solungaçlar boyunca, ön göbek boyunca ve sonra dikey olarak, ilk iki kesiyi birbirine bağlayarak. Keskin bir cımbızla, kalbi kaplayan zar olan gümüş perikardiyumu ortaya çıkarmak için pektoral yüzgeci ve alttaki pektoral korseyi çıkarın. Kalbi görünür hale getirmek için perikardlarıpsla çıkarın. Şimdi ampul atardamarı bağlı arteri kesin.

Daha sonra, kulakçıkların altına forseps yerleştirin ve kalbi vücut boşluğundan çıkarın. Kalbi forsepsle tutun ve kalbin dışında bulunan istenmeyen dokuyu çıkarmak için başka bir forseps kullanın. Aşağıdaki protokolde, kalbi farklı büyüklükteki balıklardan ayırarak balığın ömrü boyunca gelişimini görüntüleyeceğiz.

- Tek bir balığın ve ortaya çıkan parçalanmış kalbin daha sonra analiz için izlenmesine izin vermek için her balığa bir sayı harfi kombinasyonu atayın. tüm ölçümler dahil, bir elektronik tabloya yerleştirin ve bu etiketlere göre düzenleyin. Diseksiyondan önce, PCR tüp şeritlerini atanmış takip numarasıyla etiketleyin ve tüpleri PBT veya daha fazla analiz için uygun başka bir çözelti ile doldurun. Vücudu forsepsle sabitlerken, başı gözler ve solungaçlar arasında tutarak bir Petri kabında balık ventral tarafını yönlendirin. Standart uzunlukta 12 milimetreden kısa balıklar için keskin forseps veya mikroneedle kullanın bir pinholder, kalbi ortaya çıkarmak için pektoral kasları ve yüzgeçleri vücuttan çıkarın.

- Diseksiyon sırasında forsepslerin sabit hareketi PBT'de balığı hareket ettiren akımlara neden olabilir. Bu özellikle daha küçük balıklar için sorunludur. Bu, mikroneedlenin pektoral kasları ve yüzgeci çıkarmak ve vücut boşluğunu açmak için kullanılması gerekir.

- Atriyumun altından kalbi yavaşça çıkarmak için forseps kullanın. Balık floresan bir kardiyak belirteç içeriyorsa, diseksiyon için floresan bir kapsam kullanın ve kalbin floresan yoluyla çıkarıldığını doğrulayın. Kalp boşluktan çıkarıldıktan sonra, kalp dışı dokuyu ve epikardiyal astarı kalbi tutmak için forsepsleri ve kalbin dışından epikardiyal astarı çıkarmak için bir mikroneedle kullanın.

Standart uzunlukta 12 milimetreden uzun balıklar için, yay saplı mikrosirbürler kullanarak, üç kesi yapın.. Birincisi, solungaçlardan enine bir kesik yapın. İkinci olarak, ön göbekte başka bir enine kesim yapın. Ve üçüncüsü, her iki enine kesimi birbirine bağlayan ventral tarafta bir yay kesimi yapın. Keskin tokmaklar kullanarak, göğüs kaslarını ve yüzgeçlerini vücuttan çıkararak vücut boşluğunu açın ve perikardın gümüşi dokusunu ortaya çıkarın.

Bu perikardiyal dokuyu çıkarın. Ve kalp görünür hale gelecektir.. Mikro makası kullanarak kalpte üstün bulunan soğanlı arteriosise bağlı atardamarı kesin. Bu arter kesildikten sonra, kulakçık uçlarını atriyumun altına yerleştirin ve kalbi boşluktan çıkarmak için tostikleri kullanın. Kalple birlikte gelen ekstra doku varsa, daha sonra çıkarabileceği için sorun yok. Alternatif olarak, bazı balıklarda, ampulü hafifçe çekerek kalbi çıkarmak mümkündür ve kalbin geri kalanı takip edecektir.

- Alternatif tekniği kullanıyorsanız atriyumun konumuna dikkat edin, çünkü kolayca zarar verebilir. Kalple birlikte gelen ekstra doku varsa, bu iyidir ve daha sonra temizlenebilir.

- Kalp boşluktan çıkarıldıktan sonra, kalbi tutmak için iki asayı kullanın ve ekstra dokuyu veya kalbi tutmak için bir çift tostu ve ekstra kardiyak olmayan dokuyu çıkarmak için bir mikroneedle çıkarın.