Hjerte dissektion: En metode til at observere zebrafisk hjerte udvikling

- Et zebrafiskhjerte består af fire kamre, sinus venosus atrium, hjertekammer og pærepulsåre. Det er placeret forreste på ventralsiden mellem operculum og brystbæltet, en del af skeletsystemet, der understøtter brystfinnen.

Hold fiskehovedet med pincet mellem øjne og gæller. Brug en mikroscissor, skåret over gællerne, på tværs af den forreste mave, og derefter lodret, der forbinder de to første indsnit. Med en skarp pincet, fjern brystfinnen og den underliggende brystbælte for at afsløre sølvpericardium, membranen, der dækker hjertet. Fjern pericardium med pincet for at gøre hjertet synligt.

Dernæst placere tang under atrium og scoop hjertet ud af kroppen hulrum. Hold hjertet med pincet, og bruge en anden pincet til at fjerne uønsket væv til stede uden for hjertet. I den følgende protokol, vil vi dissekere hjertet fra forskellige størrelser fisk til at billedet sin udvikling i løbet af fiskens levetid.

- Tildel hver fisk en kombination af talbogstaver, så en enkelt fisk og det resulterende dissekerede hjerte kan spores til senere analyse. Indtast alle data, herunder alle målinger, i et regneark og organiser baseret på disse etiketter. Før dissektion skal du mærke PCR-rørstrimler med tildelt sporingsnummer og fyldrør med PBT eller anden opløsning, der er passende til yderligere analyse. en pinholder, fjerne brystmuskler og finner fra kroppen for at afsløre hjertet.

- Den konstante bevægelse af pincet under dissektion kan forårsage strømme i PBT, der flytter fisken. Dette er især problematisk for mindre fisk. Dette, mikronædlen skal bruges til at fjerne brystmuskler og fin og åbne kropshulen.

- Brug pincet til forsigtigt scoop hjertet ud af hulrummet fra under atriet. Hvis fisken indeholder en fluorescerende hjerte markør, skal du bruge en fluorescerende mulighed for dissektion og kontrollere fjernelse af hjertet ved fluorescens. Når hjertet er fjernet fra hulrummet, skal du bruge pincet til at holde hjertet og en microneedle at fjerne ekstra noncardiac væv og epicardial foring fra ydersiden af hjertet.

For fisk længere end 12 millimeter i standard længde, ved hjælp af fjeder-håndteres mikroscissorer, gøre tre indsnit. For det første, foretage en tværgående snit gennem gællerne. For det andet, gøre en anden tværgående snit på den forreste mave. Og for det tredje, lave en sagittal snit på ventral side forbinder både tværgående nedskæringer. Ved hjælp af skarpe pincet, fjerne brystmuskler og finner fra kroppen for at åbne kroppen hulrum og afsløre sølvfarvet væv af pericardium.

Fjern denne perikardial væv. Og hjertet vil blive synlig. Brug mikro saks til at skære arterien forbundet til pæreformet arteriose placeret overlegen i hjertet. Når denne arterie er skåret, skal du placere spidsen af tangen under atriet og bruge tangen til at skovle hjertet ud af hulrummet. Hvis der er ekstra væv, der følger med hjertet, er det fint, da det kan fjernes senere. Alternativt er det i nogle fisk muligt at fjerne hjertet ved forsigtigt at trække pæren ud, og resten af hjertet vil følge.

- Vær forsigtig med placeringen af atriet, hvis du bruger den alternative teknik, da det let kan blive beskadiget. Hvis der er ekstra væv, der følger med hjertet, er det fint og kan ryddes efter.

- Når hjertet er fjernet fra hulrummet, skal du bruge de to pincet til at holde hjertet og fjerne det ekstra væv eller et par pincet til at holde hjertet og en microneedle at fjerne ekstra noncardiac væv.