Hartdissectie: een methode om zebravis hartontwikkeling te observeren

- Een zebravishart bestaat uit vier kamers, sinus venosus, atrium, ventrikel en bolvormige arteriose. Het bevindt zich vooraan aan de ventrale kant tussen het operculum en de borstgordel, een deel van het skeletsysteem dat de borstvin ondersteunt. Om het hart te ontleden, plaatst u een geëuthanaseerde vaste vis in een Petrischaal met fosfaatgebufferde zoutoplossing om een constante pH van de vis te behouden.

Houd de viskop met een tang tussen de ogen en kieuwen. Snijd met behulp van een microscissor over de kieuwen, over de voorbuik en vervolgens verticaal, waarbij de eerste twee incisies met elkaar worden verbonden. Verwijder met een scherp pincet de borstvin en de onderliggende borstgordel om het zilveren pericard te onthullen, het membraan dat het hart bedekt. Verwijder het pericard met een tang om het hart zichtbaar te maken. Snijd nu de slagader die verbonden is met de bol.

Plaats vervolgens de tang onder het atrium en schep het hart uit de lichaamsholte. Houd het hart vast met de tang en gebruik een andere tang om ongewenst weefsel buiten het hart te verwijderen. In het volgende protocol zullen we het hart van vissen van verschillende grootte ontleden om de ontwikkeling ervan gedurende de levensduur van de vis in beeld te brengen.

- Wijs elke vis een cijferlettercombinatie toe om een individuele vis en het resulterende ontlede hart te kunnen volgen voor latere analyse. Voer alle gegevens, inclusief alle metingen, in een spreadsheet in en organiseer op basis van deze labels. Label vóór dissectie PCR-buisstrips met toegewezen volgnummer en vul buizen met PBT of een andere oplossing die geschikt is voor verdere analyse. Oriënteer de visventrale kant omhoog in een Petrischaal terwijl u het lichaam stabiliseert met een tang, waarbij het hoofd tussen de ogen en kieuwen wordt gehouden. een pinholder, verwijder de borstspieren en vinnen uit het lichaam om het hart te onthullen.

- De constante beweging van de tang tijdens dissectie kan stromingen in de PBT veroorzaken die de vis bewegen. Dit is vooral problematisch voor kleinere vissen. Dit, de microneedle moet worden gebruikt om borstspieren en vin te verwijderen en de lichaamsholte te openen.

- Gebruik de tang om het hart voorzichtig onder het atrium uit de holte te scheppen. Als de vis een fluorescerende hartmarker bevat, gebruik dan een fluorescerende scope voor de dissectie en controleer de verwijdering van het hart door fluorescentie. Zodra het hart uit de holte is verwijderd, gebruikt u de tang om het hart vast te houden en een microneedle om extra noncardiac weefsel en de epicardiale voering van de buitenkant van het hart te verwijderen.

Voor vissen langer dan 12 millimeter in standaard lengte, met behulp van veer-handled microscissors, maak drie incisies. Ten eerste, maak een dwarse snede door de kieuwen. Ten tweede, maak een andere dwarse snede op de voorste buik. En ten derde, maak een sagittale snede aan de ventrale kant die beide dwarse sneden verbindt. Verwijder met behulp van scherpe tangen de borstspieren en vinnen uit het lichaam om de lichaamsholte te openen en het zilverachtige weefsel te onthullen.

Verwijder dit pericardweefsel. En het hart zal zichtbaar worden. Gebruik de microschaar om de slagader te snijden die is verbonden met de bolvormige arteriose die zich superieur aan het hart bevindt. Zodra deze slagader is doorgesneden, plaatst u de uiteinden van de tang onder het atrium en gebruikt u de tang om het hart uit de holte te scheppen. Als er extra weefsel bij het hart hoort, is dat prima, omdat het later kan worden verwijderd. Als alternatief is het bij sommige vissen mogelijk om het hart te verwijderen door voorzichtig de bol eruit te trekken.

- Wees voorzichtig met de locatie van het atrium als u de alternatieve techniek gebruikt, omdat deze gemakkelijk kan worden beschadigd. Als er extra weefsel bij het hart komt, is dit prima en kan het daarna worden gewist.

- Zodra het hart uit de holte is verwijderd, gebruikt u de twee tangen om het hart vast te houden en verwijdert u het extra weefsel of een paar tangen om het hart vast te houden en een microneedle om extra niet-cardisch weefsel te verwijderen.