Dissecção cardíaca: um método para observar o desenvolvimento cardíaco de zebrafish

- Um coração de zebrafish compreende quatro câmaras, sinus venosus, átrio, ventrículo e arteriose bulbosa. Está localizado anteriormente no lado ventral entre o operículo e a cintura peitoral, uma parte do sistema esquelético que suporta a barbatana peitoral.

Segure a cabeça do peixe com fórceps entre os olhos e brânquias. Usando um microscisor, corte através das brânquias, através da barriga anterior, e depois verticalmente, conectando as duas primeiras incisões. Com uma pinça afiada, remova a barbatana peitoral e a cinta peitoral subjacente para revelar o pericárdio de prata, a membrana que cobre o coração.

Em seguida, coloque fórceps sob o átrio e retire o coração da cavidade corporal. Segure o coração com as fórceps, e use outro fórceps para remover tecido indesejado presente fora do coração. No protocolo a seguir, dissecaremos o coração de diferentes peixes de tamanho para visualizar seu desenvolvimento sobre a vida útil do peixe.

- Atribuir a cada peixe uma combinação de letras numésias para permitir que um peixe individual e o coração dissecado resultante sejam rastreados para análise posterior. incluindo todas as medidas, em uma planilha e organize-se com base nesses rótulos. Antes da dissecção, rotule as tiras do tubo PCR com número de rastreamento atribuído e encha tubos com PBT ou outra solução apropriada para análise posterior. Oriente o lado ventral do peixe para cima em uma placa de Petri enquanto estabiliza o corpo com fórceps, segurando a cabeça entre os olhos e brânquias. Para peixes com menos de 12 milímetros no comprimento padrão, usando fórceps afiados ou um inegumentos afiados. um alfinete, remova os músculos peitorais e as barbatanas do corpo para revelar o coração.

- O movimento constante dos fórceps durante a dissecção pode causar correntes no PBT que movem o peixe. Isso é particularmente problemático para peixes menores.

- Use os fórceps para colher suavemente o coração da cavidade sob o átrio. Se o peixe contiver um marcador cardíaco fluorescente, use um escopo fluorescente para a dissecação e verifique a remoção do coração por fluorescência. Uma vez que o coração seja removido da cavidade, use os fórceps para segurar o coração e uma microaréce para remover tecido extra nãocardiaco e o revestimento epicoardial do lado de fora do coração.

Para peixes com mais de 12 milímetros de comprimento padrão, usando microscisores manuseados pela mola, faça três incisões. Primeiro, faça um corte transversal através das brânquias. Segundo, faça outro corte transverso na barriga anterior. E terceiro, faça um corte sagital no lado ventral conectando ambos os cortes transversais.

Remova este tecido pericárdico. E o coração ficará visível. Use a micro tesoura para cortar a artéria conectada à arteriose bulbosa localizada superior ao coração. Uma vez que esta artéria é cortada, coloque as pontas dos fórceps sob o átrio e use os fórceps para tirar o coração da cavidade. Se houver tecido extra que venha com o coração, tudo bem, pois pode ser removido mais tarde. Alternativamente, em alguns peixes, é possível remover o coração puxando suavemente o bulboso para fora, e o resto do coração seguirá.

- Tenha cuidado com a localização do átrio se usar a técnica alternativa, pois ela pode ser facilmente danificada. Se houver tecido extra que venha com o coração, este é bom e pode ser limpo depois.

- Uma vez que o coração seja removido da cavidade, use os dois fórceps para segurar o coração e remova o tecido extra ou um par de fórceps para segurar o coração e um microaceede para remover tecido extra nãocardíaco.