Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
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Un'iniezione intraduttale è una tecnica per fornire un mix di iniezione che può contenere cellule tumorali, vettori di espressione o un agente terapeutico integrato con un colorante tracciante nei dotti della ghiandola mammaria.
Per questa procedura, caricare una siringa con la miscela di iniezione. Quindi, posizionare un lato ventrale del mouse anestetizzato su un letto chirurgico. Fai un'incisione sulla pelle tra la ghiandola inguinale o la quinta coppia di ghiandole mammarie. Separare accuratamente il lembo della pelle dal peritoneo parietale per visualizzare l'albero duttale.
Utilizzando le pinza, sollevare il capezzolo e tagliare con cura la parte esterna per vedere l'apertura del condotto. Utilizzare una pinzetta per sollevare il bordo del lembo della pelle e inserire delicatamente l'ago della siringa nel capezzolo per fornire la miscela di iniezione. Monitorare il movimento del colorante tracciante nell'albero duttale mammario. Il colorante si diffonde nell'albero duttale senza perdere nello stroma, indicando un'iniezione riuscita.
Attendere alcuni secondi per evitare fuoriuscite, quindi rimuovere lentamente l'ago dal sito di iniezione. Chiudere l'incisione con la clip della ferita. Nel seguente protocollo, eseguiremo l'iniezione intraduttale per fornire Cre esprimendo adenovirus nella ghiandola mammaria del topo.
Utilizzare tecniche asettiche durante la procedura chirurgica. Fai un sito di incisione sulla pelle a una lunghezza di circa un centimetro tra le due quattro ghiandole mammarie inguinali. Separare accuratamente il lembo della pelle dal peritoneo parietale, in modo da visualizzare l'albero duttale mammario.
Tenere con cura il capezzolo con pinza orologiaio per rimuovere il capezzolo esterno senza tagliare la pelle vicina utilizzando una forbice a microsezione. Caricare da tre a cinque microlitri della miscela di iniezione di adenovirus Cre in una siringa Hamilton da 25 microlitri con un ago del mozzo metallico calibro 33 apposto.
Stimare il volume della miscela di iniezione nella siringa in base al colorante blu incluso nella miscela. Tenere delicatamente il bordo del lembo cutaneo con una pinzetta curva fine e iniettare lentamente la miscela di iniezione di adenovirus Cre nel capezzolo mentre si monitora la diffusione del colorante blu nell'albero duttale mammario. Mantenere la velocità di iniezione il più lentamente possibile per evitare danni al lume duttale.
Un'iniezione intraduttale riuscita è indicata da fluidi iniettati che si diffondono in tutto l'albero duttale senza perdite nel compartimento stromale. Ritirare delicatamente l'ago dal capezzolo per evitare perdite del fluido iniettato. Esaminare il lato distale della ghiandola mammaria o l'area circostante del capezzolo iniettato.
La tintura che si diffonde nello stroma vicino, come mostrato qui, indica un'iniezione di cuscinetto grasso mammario piuttosto che un'iniezione intraduttale di successo. Chiudere le ferite chirurgiche e la pelle con clip per ferite.
Rimuovere il mouse dall'anestesia e posizionarlo su una pastiglia di riscaldamento all'interno di una gabbia pulita per il recupero. Monitorare lo sviluppo del tumore mammario come descritto nel protocollo di testo.
