Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education
General Laboratory Techniques

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

ויסות הטמפרטורה במעבדה
 
Click here for the English version

ויסות הטמפרטורה במעבדה: החלת חום

Overview

למרות בדיקות ניסיוניות רבות מבוצעות בטמפרטורת החדר (RT; ~ 20-25 מעלות צלזיוס), זה לא נדיר עבור ניסויים, או חלקים של ניסויים, לדרוש סוג כלשהו של ויסות טמפרטורה. וידאו זה דן הסיבות השונות ואת הטמפרטורות שבהן מדען עשוי לרצות "לשמור על דברים חמים". לדוגמה, מתישהו, תאים צריכים להיות בתרבית בסביבה קרובה לטמפרטורת הגוף (~ 37 מעלות צלזיוס), מבנה החלבון צריך להיות שונה (>56 מעלות צלזיוס), או ריאגנטים ופתרונות צריך להיות מחומם (~ 100 מעלות צלזיוס). כמו כן נדון, היא הדרך הנכונה להתמודד עם מדחום ולמדוד את הטמפרטורה בנוזלים ערבוב. מאז זה לא תמיד ברור איך לווסת את הטמפרטורות במעבדה, וידאו זה ידבר גם על איזה סוגים של ציוד אפשר לבחור בכל מצב.

Procedure

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

ישנן דרכים רבות לווסת את הטמפרטורה במעבדה. לפעמים ריאגנטים צריכים להיות מחוממים, תרביות תאים צריך להישמר בטמפרטורות ספציפיות לצמיחה אופטימלית, וטמפרטורת הגוף של בעלי החיים צריך להיות מוסדר במהלך או אחרי הליכים כירורגיים. וידאו זה יבחן מקרוב כמה מהדרכים והסיבות שמדען עשוי לרצות לחמם דברים ואת הטמפרטורות הספציפיות המשמשות לחימום דגימות ותראגנטים.

ראשית, חשוב לציין כי בהליכי מעבדה נפוצים, אנו בדרך כלל מדברים על טמפרטורה במדידות של מעלות צלזיוס, או Centigrade. כמו יחידות המדידה המטריות האחרות המשמשות במדע, התואר צלזיוס הוא אחד הסטנדרטים של מערכת היחידות הבינלאומית למדידת טמפרטורה.

המדחום, כפי שאתם בוודאי כבר יודעים, הוא המכשיר המשמש למדידת טמפרטורה.

כדי לקבל את קריאת הטמפרטורה המדויקת ביותר של נוזל אתה מתחמם או מצמרר, לטבול את המדחום לפחות 10-15 ס"מ, או על 4-6 אינץ 'מתחת לפני השטח. לאחר מכן להדק בזהירות או אחרת לאבטח את המדחום במקום, תוך הקפדה כי המכשיר הוא לפחות 5 ס"מ, או כ 2 אינץ ', מעל החלק התחתון של המיכל ולפחות רוחב מדחום אחד מצד המיכל.

אם אתה מערבב את הנוזל, ודא כי המדחום לא הולך להיות נתקל על ידי בר stir, אחרת, אתה יכול להיות בלגן מסוכן על הידיים שלך.

קרא את מחוון הטמפרטורה הנוזלית בגובה העיניים. בעת קריאת מדחום, יש להקפיד לא לגעת בו לאורך הפיר. חום הגוף שלך יכול להשפיע על הדיוק של המדידה.

לאחר מכן, בואו לסקור כמה טמפרטורות נפוצות שבו ניסויים רבים מתרחשים.

בהתאם לסוג העבודה המבוצעת במעבדה שלך ולסוג הציוד השוכן במעבדה שלך, טמפרטורת הסביבה של החדר תהיה בדרך כלל בין 20-25 מעלות צלזיוס. בדרך כלל ניתן להניח כי ניסוי הוא להתבצע בטמפרטורת החדר אם אין דרישת טמפרטורה מצוין אחרת. טמפרטורת החדר מקוצרת לעתים קרובות בפרוטוקולים כמו, ניחשתם נכון: RT.

כאשר אתה מתמודד עם הליך "במבחנה", הניסוי בדרך כלל צריך להתבצע ב 37 מעלות צלזיוס. תהליכים המתבצעים "במבחנה" כרוכים ברקמה, תאים או תמציות ומנסים לחקות את התנאים הקיימים בתוך אורגניזם. ניסויי ויוו, לעומת זאת, מבוצעים עם האורגניזם השלם, ומכיוון שליונקים יש טמפרטורת גוף של 37 מעלות צלזיוס, ניסויים בתרבית תאים "במבחנה" מתבצעים בדרך כלל בטמפרטורה זו.

בטמפרטורות מעל 56 מעלות צלזיוס, חלבונים מתפתחים, תהליך שנקרא denaturation. זה יכול להיות שימושי ממגוון סיבות, כולל פתיחת שינוי צורת חלבונים לזיהוי קל יותר על ידי נוגדן זיהוי.

מים וכמה פתרונות על בסיס מים, או מימית, לרתיחה בסביבות 100 °C (50 °F). זה יכול להיות גם טמפרטורה טובה שבה להמיס ריאגנטים שקשה להביא לפתרון בטמפרטורת החדר.

לעתים קרובות, פרוטוקול ניסיוני יציין כי צעדים מסוימים צריכים להתרחש בטמפרטורה מסוימת.

ניסויים לרוץ על הספסל מתבצעים על 20-25 מעלות צלזיוס, או טמפרטורת החדר.

בטמפרטורת החדר, רוב ריאגנטים ותרביות התאים יציבים למרות שיש צורך להגן על ריאגנטים מסוימים מפני אור, יש לבצע ניסויים מסוימים במכסה המנוע כדי לשמור על סטריליות, וכמה בדיקות צריכות להתקיים בתוך תא לח כדי למנוע את הרקמות הניסיוניות או ריאגנטים מלהתייבש.

כאשר הפרוטוקול שלך אומר, כדי "להפשיר לתאים או ריאגנט מסוים", להשתמש באמבט מים להגדיר 37 °C (75 °F) עבור איטי ואפילו התחממות. אלא אם הפרוטוקול שלך מציין חימום נוסף, הקפד להסיר את הדגימה שלך מאמבט המים ברגע שרסיס הקרח האחרון נמס.

אם הפרוטוקול מציין כי יש להשתמש ב"מדיה מחוממת מראש" או ריאגנטים אחרים שחוממו מראש, אמבט מים של 37 מעלות צלזיוס שימושי גם לשמירה על פתרונות בטמפרטורה קבועה, חמה - אך לא חמה .

על מנת לשמור על הפתרונות שלך ללא זיהום או דילול מהמים שמסביב, השתמש במתלה צף קצף כדי להפשיר עליקוטים קפואים של תאים או כדי לחמם נפחי מיקרוליטרים של פתרון. אם מחזיק צינור מאובטח יותר מועדף, מתלה מתכת יכול לשמש למטרה זו גם כן.

עבור כמויות גדולות יותר של נוזל, מתלים מפלסטיק או מלחצי מתכת יכולים לשמש להחזקת דגימות זקופות באמבט המים.

כאשר אתה מונחה לדגור על תרביות תאים יונקים, זה בדרך כלל אומר למקם את התאים באינקובטור 37 °C, עם 5% פחמן דו חמצני אטמוספרה, ומגש מים כדי לשמור על האינקובטור על 95% לחות.

תאים חיידקיים הם גם לפעמים תרבית ב 37°C, באינקובטור, חדר חם. אינקובטור רועד יכול לשמש כאשר אתה רוצה להרחיב במהירות את מספרי תרבית התא החיידקים, תוך הפחתת זמן התרבות על ידי ניעור תרביות נוזליות, אתה מבטיח כי חיידקים מקבלים חומרים מזינים בשפע כי הם לא משקעים בתחתית הצינור.

עבור חימום מהיר מאוד או רותח, צלחות חמות שימשו באופן מסורתי. עכשיו כי מיקרוגלים נמצאים בדרך כלל במעבדה, הם יכולים לשמש במהירות להרתיח פתרונות מימיים גם כן.

עכשיו בואו נסתכל על כמה מהסיבות שאולי תרצו לחמם דברים במעבדה.

תיקון חום הוא דרך פשוטה ומהירה להצמיד דגימות ביולוגיות מסוימות, כמו תאים חיידקיים או ביומקרומולקולים, למגלשת זכוכית לפני הכתמים. כאן אתה יכול לראות כמה ממרחים כרומוזומליים שהתאפשרו באמצעות קיבוע חום.

ערבוב מחומם של התמיסה הנוזלית שלתוך כך אתה מנסה להמיס ריאגנט מוצק יכול לעזור להאיץ את התהליך, כמו אגר אבקת כי הוא מומס כאן.

ניסויים רבים בתאים חיים דורשים לפחות תקופת דגירה אחת. החממה Incucyte מאפשר הדמיה בזמן אמת של צמיחת התא, ללא perturbation של התאים שיכולים להתרחש כאשר מיכלי תרבות מוסרים מן האינקובטור.

הדמיית תאים חיים יכולה להתבצע גם עם מיקרוסקופים שולחניים. כאן תאים נשמרים באינקובטור הדמיה בעוד פעילותם לפני ובתגובה לתוספת של גירוי ניסיוני נצפית ומתועדת לניתוח מאוחר יותר.

הרגע צפיתם בהקדמה של JoVE לוויסות טמפרטורות המעבדה ב-23 מעלות צלזיוס ומעלה.

בסרטון זה סקרנו: כמה מהפיסות הנפוצות ביותר של ציוד מעבדה לחימום תאים, בעלי חיים ופתרונות, כיצד להחליט באיזה ציוד להשתמש לחימום תאים או פתרונות, וכמה סיבות שונות ייתכן שיהיה צורך להסדיר את הטמפרטורה במהלך ניסוי. תודה שצפיתם וזכרו לטפל במדחום שלכם בזהירות!

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

לא הוכרזו ניגודי אינטרסים.

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter