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Regulação da temperatura no laboratório
 
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Regulação da temperatura no laboratório: Aplicação do calor

Overview

Embora muitos ensaios experimentais sejam realizados à temperatura ambiente (RT; ~20-25°C), não é incomum que experimentos, ou partes de experimentos, exijam algum tipo de regulação de temperatura. Este vídeo discute as diferentes razões e temperaturas nas quais um cientista pode querer "manter as coisas aquecidas". Por exemplo, em algum momento, as células precisam ser cultivadas em um ambiente próximo à temperatura corporal (~37°C), a estrutura proteica precisa ser modificada (>56°C), ou reagentes e soluções precisam ser aquecidas (~100°C). Também é discutida, a maneira correta de manusear um termômetro e medir a temperatura em líquidos de agitação. Como nem sempre é óbvio como regular as temperaturas em laboratório, este vídeo também falará sobre quais tipos de equipamento alguém pode escolher em cada situação.

Procedure

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Há muitas maneiras de regular a temperatura no laboratório. Às vezes, os reagentes precisam ser aquecidos, as culturas celulares precisam ser mantidas a temperaturas específicas para um crescimento ideal, e a temperatura do corpo animal precisa ser regulada durante ou após os procedimentos cirúrgicos. Este vídeo vai dar uma olhada mais de perto em algumas das maneiras e razões pelas quais um cientista pode querer aquecer as coisas e as temperaturas específicas usadas para aquecer amostras e reagentes.

Primeiro, é importante notar que em procedimentos laboratoriais comuns, comumente falamos sobre temperatura em medições de graus Celsius, ou Centígrados. Como as outras unidades métricas de medição utilizadas na ciência, o grau Celsius é um dos padrões do Sistema Internacional de Unidades para medir a temperatura.

O termômetro, como você provavelmente já sabe, é o instrumento usado para medir a temperatura.

Para obter a leitura de temperatura mais precisa de um líquido que você está aquecendo ou resfriando, mergulhe o termômetro pelo menos 10-15 cm, ou cerca de 4-6 polegadas abaixo da superfície. Em seguida, fixar cuidadosamente ou fixar o termômetro no lugar, tomando cuidado para que o instrumento tenha pelo menos 5 cm, ou cerca de 2 polegadas, acima da parte inferior do recipiente e pelo menos um termômetro de largura do lado do recipiente.

Se você estiver mexendo o líquido, certifique-se de que o termômetro não será atingido pela barra de agitação, caso contrário, você pode ter uma bagunça perigosa em suas mãos.

Leia o indicador de temperatura líquida ao nível dos olhos. Ao ler um termômetro, tome cuidado para não tocá-lo ao longo do eixo. O calor do seu corpo pode afetar a precisão da medição.

Em seguida, vamos rever algumas temperaturas comuns em que muitos experimentos ocorrem.

Dependendo do tipo de trabalho realizado em seu laboratório e do tipo de equipamento alojado em seu laboratório, a temperatura ambiente da sala normalmente será entre 20-25 °C. Geralmente, pode-se supor que um experimento deve ser realizado à temperatura ambiente se nenhum requisito de temperatura for indicado de outra forma. A temperatura ambiente é frequentemente abreviada em protocolos como, você adivinhou: RT.

Quando você é confrontado com um procedimento "in vitro", o experimento geralmente tem que ser conduzido a 37°C. Processos que são realizados "in vitro" envolvem tecido, células ou extratos e tentam imitar as condições que existem dentro de um organismo. Experimentos in vivo, por outro lado, são realizados com o organismo intacto, e como os mamíferos têm uma temperatura corporal de 37 °C, experimentos de cultura celular "in vitro" são tipicamente realizados a esta temperatura.

A temperaturas acima de 56°C, as proteínas se desdobram, um processo chamado desnaturação. Isso pode ser útil por uma variedade de razões, incluindo a abertura mudando uma forma de proteínas para uma identificação mais fácil por um anticorpo de detecção.

A água e algumas soluções à base de água, ou aquosas, fervem a aproximadamente 100 °C. Também pode ser uma boa temperatura para dissolver reagentes que são difíceis de trazer para solução à temperatura ambiente.

Frequentemente, um protocolo experimental indicará que certas etapas precisam ocorrer a uma temperatura específica.

Os experimentos realizados no banco são realizados a cerca de 20-25°C, ou temperatura ambiente.

À temperatura ambiente, a maioria dos reagentes e culturas celulares são estáveis, embora alguns reagentes precisem ser protegidos contra a luz, alguns experimentos precisam ser realizados em um capô para manter a esterilidade, e alguns ensaios precisam ocorrer dentro de uma câmara úmida para evitar que os tecidos experimentais ou reagentes sequem.

Quando o protocolo diz, para "descongelar as células ou um reagente específico", use um banho de água definido a 37 °C para retardar e até mesmo aquecer. A menos que seu protocolo indique mais aquecimento, certifique-se de remover sua amostra do banho de água assim que o último fragmento de gelo derreter.

Se o protocolo indicar que "mídia pré-aquecida" ou outros reagentes pré-aquecidos devem ser usados, um banho de água de 37 °C também é útil para manter as soluções em uma temperatura constante, quente – mas não quente -- temperatura.

Para manter suas soluções livres de contaminação ou diluição da água circundante, use um rack flutuante de espuma para descongelar alíquotas congeladas de células ou para aquecer volumes de microliter de solução. Se um suporte de tubo mais seguro for preferido, um rack de metal também pode ser usado para este fim.

Para maiores volumes de líquido, racks plásticos ou grampos metálicos podem ser usados para segurar amostras eretas no banho de água.

Quando você é instruído a incubar culturas de células de mamíferos, geralmente significa colocar as células em uma incubadora de 37 °C, com uma atmosfera de 5% de dióxido de carbono, e uma bandeja de água para manter a incubadora com cerca de 95% de umidade.

As células bacterianas também são às vezes cultivadas a 37°C, em uma incubadora, uma sala quente. Uma incubadora de agitação pode ser usada quando você quer expandir rapidamente os números da cultura celular bacteriana, enquanto diminui o tempo de cultura Ao agitar culturas líquidas, você garante que as bactérias recebam nutrientes amplos porque eles não sedimentam na parte inferior do tubo.

Para aquecimento muito rápido ou ebulição, placas quentes têm sido tradicionalmente usadas. Agora que micro-ondas são comumente encontradas no laboratório, eles podem ser usados para ferver rapidamente soluções aquosas também.

Agora vamos dar uma olhada em algumas das razões que você pode querer aquecer as coisas no laboratório.

A fixação de calor é uma maneira simples e rápida de fixar certas amostras biológicas, como células bacterianas ou biomacromolecules, a um deslizamento de vidro antes de coloração. Aqui você pode ver alguns spreads cromossômicos que foram possíveis através da fixação de calor.

Agitação aquecida da solução líquida na qual você está tentando dissolver um reagente sólido pode ajudar a acelerar o processo, como o ágar em pó que está sendo dissolvido aqui.

Muitos experimentos com células vivas requerem pelo menos um período de incubação. A incubadora Incucyte permite imagens em tempo real do crescimento celular, sem a perturbação das células que podem ocorrer quando os recipientes de cultura são removidos da incubadora.

Imagens de células vivas também podem ser realizadas com microscópios de desktop. Aqui as células são mantidas em uma incubadora de imagens enquanto sua atividade antes e em resposta à adição de um estímulo experimental está sendo vista e registrada para análise posterior.

Você acabou de assistir a introdução do JoVE para regular temperaturas de laboratório a 23°C ou acima.

Neste vídeo revisamos: alguns dos equipamentos de laboratório mais comuns para células de aquecimento, animais e soluções, como decidir qual equipamento usar para aquecer células ou soluções, e algumas razões diferentes a temperatura pode precisar ser regulada durante um experimento. Obrigado por assistir e lembre-se de lidar com seu termômetro com cuidado!

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