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Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
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JoVE Science Education Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
Bacterial Transformation: Electroporation
  • 00:00Overview
  • 00:47The Plasmid
  • 02:17Electroporation Basic Principles
  • 03:26Electroporating Bacteria
  • 07:07Preparing Electrocompetent Cells
  • 09:36Applications
  • 11:43Summary

Transformation von Bakterien: Elektroporation

English

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Overview

Das Wort Elektroporation bezieht sich auf die Aufnahme von Fremd-DNA von Zellen. Transformationen können ganz natürlich in Bakterien vorkommen. In der molekularen Biologie kann die Transformation jedoch künstlich erzeugt werden, indem man kleine Poren in die bakterielle Zellwand einführt. Bakterien, die DNA aus ihrer Umgebung aufnehmen können, nennt man kompetente Bakterien. Elektrokompetente Zellen können im Labor produziert werden. Die Transformation dieser Zellen kann mit Hilfe eines elektrischen Feldes, das Poren in die Zellwand einführt durch welche die DNA eingeschleust wird, durchgeführt werden.

Dieses Video erklärt die Geräte, die für die Elektroporation notwendig sind, wie zum Beispiel den Elektroporator und die Küvette. Dieses Video zeigt auch eine Schritt-für-Schritt Anleitung wie man elektrokompetente Bakterien herstellt und wie man diese elektroporiert. Wir erwähnen außerdem wie man den Erfolg der Elektroporation durch das Messen der Zeitkonstante einschätzen kann und wir sprechen darüber, dass es wichtig ist Salz aus allen Lösung vor der Elektroporation zu eliminieren.

Procedure

Die Transformation von Bakterien ist ein natürlich auftretender Prozess, bei dem Bakterien Fremd-DNA aufnehmen und dann amplifizieren oder klonieren. Dieser Prozess kann im Labor künstlich durch die Anwendung eines elektrischen Feldes erzeugt werden. Durch einen Hochspannungs-Puls werden Poren in der bakteriellen Zellmembran erzeugt, durch welche die Plasmid-DNA eingeschleust wird. Diese Methode wird Elektroporation genannt. Das folgende Video beschreibt die Grundlagen der Elektroporation, und führt sowohl eine Schritt-…

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JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. Bacterial Transformation: Electroporation. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

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