Un'introduzione alla trasfezione

La trasfezione è il processo di inserimento di materiale genetico, come il DNA e l’RNA a doppio filamento, nelle cellule di mammifero. L’inserimento di DNA in una cellula consente l’espressione, o la produzione, di proteine utilizzando il macchinario delle cellule, mentre l’inserimento di RNA in una cellula viene utilizzato per down-regolare la produzione di una proteina specifica interrompendo la traduzione. Mentre il sito di azione per l’RNA trasfettato è il citoplasma, il DNA deve essere trasportato al nucleo per una trasfezione efficace. Lì, il DNA può essere espresso transitoriamente per un breve periodo di tempo, o essere incorporato nel DNA genomico, dove il cambiamento viene trasmesso da cellula a cellula mentre si divide.

Questo video descrive le basi alla base delle trasfezioni mediate da sostanze chimiche e introduce alcuni dei reagenti più comunemente usati, tra cui lipidi carichi, polimeri e fosfato di calcio. Ogni fase è descritta dalla preparazione delle cellule per la trasfezione attraverso l’analisi dell’efficienza della trasfezione. Inoltre, la sezione applicazioni di questo video-articolo descrive l’uso dell’elettroporazione e di una trasfezione biolistica come metodi alternativi per introdurre l’acido nucleico nelle cellule di mammifero. Descrive anche un uso avanzato della trasfezione in cui la co-trasfezione di RNA e DNA interferenti viene introdotta come un modo per down-regolare una proteina naturale mentre allo stesso tempo produce una variante mutante di essa all’interno della stessa cellula.