דרוסופילים אחזקה

מחקר מוצלח של Drosophila melanogaster תלוי בתחזוקה נכונה וחזקה של אורגניזם מודל יקר ערך זה. הסרטון הבא ידון בצעדים הדרושים כדי לספק תזונה נכונה, דיור וטיפול בזבוב.

למרות הידוע בכינויו זבוב הפירות, Drosophila melanogaster למעשה subsing על מיקרואורגניזמים, כגון שמרים, שגדלים על פירות תסיסה. במעבדה, הדיאטה של הזבוב משתנה למטרות מעשיות. מספר מתכונים זמינים, וכולם מכילים את המרכיבים החיוניים: סוכר ושמרים. המתכון הבא הוא מאוניברסיטת אינדיאנה בבלומינגטון, המפורסם במגוון העצום של מלאי זבובים. הוא מורכב מ: מים סטריליים, שמרים, קמח סויה, קמח תירס צהוב, אגר למרקם, סירופ תירס וחומצה פרופיונית כדי לעכב עובש וצמיחה חיידקית. מרכיבים אלה משולבים, מחוממים, מעורבבים, ולאחר מכן מופצים לבקבוקוני דיור מפלסטיק באמצעות משאבה. לאחר שהם מלאים, הבקבוקונים מחוברים עם צמר גפן, עטוף, מקורר ב 4 °C (70 °F). לאחר התגבשות, מזון מעוקר באמצעות autoclaving.

עכשיו כשלמדנו קצת על מה זבובים אוכלים, בואו נסתכל איפה הם גרים ואיך הם מטופלים.

מגוון מכולות משמשים לזבובי דיור. בקבוקונים משמשים לתחזוקת זבובים ומכילים באופן אופטימלי 50-100 מבוגרים. בקבוקים משמשים לתרבויות גדולות יותר ובית 300-600 זבובים בוגרים. החממות שולטות בסביבה ומסוגלות להחזיק מאות בקבוקונים ובקבוקים. תנאי האחסון הרגילים לזבובים הם 25 °C (60°F) ולחות יחסית של 60-65%.

בעת עבודה עם זבובים, חשוב לתרגל תיוג ותיעוד נכונים, ולשמור על סביבה נקייה כדי לשמור על שלמות קווי זבובים וניסויים. יש להחליף מיכל כאשר כמחצית מהגלום ישeclosed, או עזב את מעטפת הגולם. התרמילים ייראו נקיים.

לידיעתך, שלב הגומיות מתרחש בין השלבים הזחליים למבוגרים, והוא הזמן שבו הזחלים מדגירים ומתפתחים למבוגר. כדי לזהות תרמילים כמו ברור, להחזיק את המיכל עד למקור אור ולבדוק את הגולם.

זבובים מועברים לבקבוקונים עם מדיה טרייה — שם מפואר למזון זבובים — בתהליך המכונה "זבובים הפוכים". לפני היפוך זבובים, בדוק את התקשורת עבור יושרה. זבובים אינם יכולים לשרוד על מזון סדוק ביובש או מזוהם בעובש או בחיידקים.

כדי להפוך זבובים, ראשית, הקש על מקטורון הזבוב בעדינות על הדלפק כדי לדפוק זבובים את הצדדים של המשחקון. לאחר מכן להסיר במהירות את פקק, ולהפוך את הזבובים מן המיכל הישן במהירות לתוך אחד חדש. תהליך זה נעשה במהירות, כדי למנוע זבובים לברוח או להימחץ על ידי פקק, ולמנוע זבובים רופפים מלהיכנס לפוע במהלך היפוך.

בעוד היפוך זבובים היא השיטה המועדפת עבור העברה בתפזורת של Drosophila, יראת חסד נדרשת למיון זבובים. שתי שיטות של ריתונום יידונו כאן: צינון ושימוש בפחמן דו חמצני. כדי לצנן זבובים מניחים את התרבות במקפיא של -20 מעלות צלזיוס במשך 8-12 דקות. לאחר מכן הניחו זבובים על סביבת עבודה שטוחה ומצוננת לבחירה. זבובים יכולים גם להיות מרדים באמצעות קור על ידי צינון אותם ישירות על משטח קפוא.

פחמן דו חמצני הוא שיטה מועדפת למרדים כי זה לא גורם תמותה חריפה בזבובים או סכנה לחוקר. מערכת משלוח CO2 מורכבת: של מיכל CO2; צינור המחובר למחט, כדי להחיש זבובים בבקבוקונים ובקבוקים; וצינור המחובר ללוח CO2 לניתוח מתחת למיקרוסקופ.

כדי להחיש זבובים, הכנס את מחט CO2 דרך פקק. לחלופין, הקש על המיכל על משטח, להסיר את העצירה, במהירות הפוך את הזבובים על צלחת CO2, שמירה על חותם סגור עד הזבובים הם חסרי תנועה. בעזרת מברשת או מלקחיים, הזיזו בעדינות את הזבובים לתוך המיכל החדש.

כדי להשליך זבובים לא רצויים, לזרוק אותם לחדר מתים זבובים, אשר מורכב בקבוק גדול מלא איזופרופנול או אתנול ושמן מינרלי ומעליו משפך.

כעת, לאחר שראינו כיצד זבובים מתוחזקים ומטופלים במעבדה, בואו נבחן כיצד תנאי הדיור וההאכלה משתנים לניסויים שונים.

ניסויים מסוימים דורשים דיור חלופי כדי להכיל כמות גדולה יותר של זבובים.

בניסוי זה, החוקר משתמש בכלוב אוכלוסיית זבובים כדי לאסוף כמות גדולה של עוברים. כלוב אוכלוסיית זבובים הוא ברור, קופסת פלסטיק המסוגלת להחזיק אלפי זבובים. החוקר משחרר את הזבובים הרצויים ממספר בקבוקים לכלוב אוכלוסיית הזבובים, ואז מכניס צלחות אגר לכלוב כדי לאסוף עוברים.

ניסויים מסוימים דורשים את המניפולציה של דיאטת הזבוב.

בניסוי זה, החוקר רוצה לראות את תגובת הבריחה של זבובים מהונדסים המבטאים ערוץ יונים המופעל באור בנוירונים המווסתים את תגובת הבריחה של הזבובים. הדיאטה Drosophila הוא בתוספת "כל-טרנס-רשתית", שהוא קופקטור עבור ערוץ זה ומאפשר לו לתפקד. זה נעשה על ידי המסת המזון והוספת ריאגנט. לאחר מכן הזבוב נחשף לאור כחול שמפעיל את הערוץ ודורך את תגובת הבריחה, ואת הזמן שנדרש לטוס נמדד.

ניתן לתמרן מגוון של תנאי דיור וטיפול לניסויים.

בניסוי זה, "מגדל כוח" משוכלל נוצר כדי לחקור את ההשפעות של פעילות גופנית על Drosophila. מגדל הכוח הוא מכונה שעולה ויורדת ללא הרף, ומנצלת את התגובה הטבעית של הזבוב כדי לנוע כלפי מעלה, נגד כוח המשיכה, המכונה "גיאוטקסיס שלילי".

הביצועים של הזבובים המופעלים במגדל הכוח נמדדים באמצעות בדיקת גיאוטקסיס שלילית איטרטיבית מהירה, או בדיקת RING בקיצור. זבובים בבקבוקונים ריקים ממוקמים מול מצלמה. הבקבוקונים מצותתים, והמרחקים שטיפסו נרשמים. ניסוי זה מראה כי בהשוואה לתרגיל קבוצת ביקורת הייתה השפעה חיובית על הפעילות לאורך זמן.

סרטון זה של JoVE כיסה את התחזוקה והבעלות של Drosophila melanogaster. לאחר צפייה בסרטון זה אתה אמור להיות מסוגל להכין מדיה מזון זבובים, לזהות כראוי דיור מתאים, להעיף זבובים, ולבצע ניסויים פשוטים. תודה שצפיתם!