Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education
Biology II: Mouse, Zebrafish, and Chick

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

טיפוח ותחזוקה בסיסיים של אפרוחים
 
Click here for the English version

טיפוח ותחזוקה בסיסיים של אפרוחים

Overview

אפרוחים (Gallus gallus domesticus) הם כלי מחקרי רב ערך, לא רק לחקר מושגים חשובים בהתפתחות בעלי חוליות, במדעי המוח וביולוגיה של הגידול, אלא גם כמערכת יעילה להפצת וירוסים. למרות ביצים ניתן לרכוש מספקים חיצוניים ועבודה עם אפרוחים דורש מעט מאוד ציוד מיוחד, הבנה של נהלי טיפול נאות נדרש לפיתוח עובר נורמלי.

סרטון זה יספק סקירה של עקרונות הטיפול בביצים, כולל הסבר על פרמטרי הדגירה שיכולים להשפיע עמוקות על ההתפתחות: טמפרטורה, לחות וסיבוב ביצים. רוב הניסויים המשתמשים בביצי תרנגולות דורשים גישה לעובר בתוך הקליפה, אשר מושגת על ידי חיתוך חור קטן, ניתן לחיתוך מחדש, או "חלון". תהליך זה מתואר בפירוט שלב אחר שלב, יחד עם מספר טכניקות אחרות החיוניות לעבודה עם אפרוחים, כגון קישוט והזרקת דיו הודו. לבסוף, הסרטון יבחן כמה יישומים מעשיים של טכניקות בסיסיות אלה במחקר מדעי מתקדם.

Procedure

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

עוברי עוף הם מודל נהדר לחקר התפתחות חוליות מוקדמת, בין היתר משום שהם קלים וזולים לתחזוקה. שלא כמו רוב האורגניזמים המודל, אשר גדלים במעבדה, ביצי עוף מופרות נרכשים מספק חיצוני. בנוסף, תחזוקה ועבודה עם הביצים דורשת מעט מאוד ציוד מיוחד. וידאו זה יספק רקע כללי על רכישה ותחזוקה של ביצי אפרוח, טכניקות חיוניות לעבודה עם עוברים מתפתחים, וכמה יישומים מעשיים של שיטות אלה.

לפני שנדון בעבודה עם אפרוחים במעבדה, מאפשר לסקור כיצד תרנגולות מטפלות בביצים שלהן בבית. למרות ביצים כבר מופרות כאשר הם מוטלים, התפתחות אפרוח מפסיק כאשר הביצים חשופות לטמפרטורות חיצוניות קרות יותר. לאחר הנחת כ -12 ביצים התרנגולת יושבת על הקן כדי לחדש את התפתחות העובר. במהלך הדגירה שלהם, התרנגולת תסובב את הביצים כדי לחמם אותם באופן שווה ולמנוע מהעובר להידבק למעטפת. אם הכל ילך כשורה, 21 ימים לאחר מכן, לאמא יש חבורה של אפרוחים.

אז איך מדענים אוספים מספיק ביצים לניסויים שלהם? אום. זה יכול לקחת זמן. מכיוון שתרנגולות מבויתות באופן נרחב, ניתן להשיג בקלות ביצים מופרות מדגרה או מחוות גידול. ביצים ניתן אפילו להזמין בשלבים התפתחותיים ספציפיים.

לאחר ביצים הגיעו למעבדה, הם יכולים להיות מאוחסנים ב 13 - 16 °C (5 ימים). כאשר אתה מוכן להם לפתח, לאפשר את הביצים להתחמם לטמפרטורת החדר, ולאחר מכן להעביר אותם לחממה נדנדה ב 37 °C (60% לחות עד שהם הגיעו לשלב הרצוי.

רוב הניסויים שבוצעו על אפרוחים דורשים כמה צעדי הכנה, כמו לבדוק אם הביציות שקיבלת הופרו מלכתחילה. גישה קלה היא להשתמש במקור אור בהיר או בקופסת נרות כדי להאיר את הביצה. באמצעות טכניקה זו, המכונה candling, מבנים פנימיים כגון כלי דם ניתן לדמיין כדי לאשר כי העובר קיים.

השארת הביצה שלמה משפרת את הישרדות האפרוחים, אך הקליפה מונעת גישה לעובר. כדי לפצח בעיה זו, החוקרים משתמשים בטכניקה הנקראת חלונות.

התחל על ידי הטלת הביצים על הצד שלהם וסימון החלק העליון כדי לזהות את הצד שאליו העובר יעלה. כדי למנוע נזק לחלמון בעת חיתוך חלון, כמות קטנה של אלבומין, או לבן ביצה, מוסר כדי להוריד את העובר מן הקליפה. כדי לעשות זאת, ראשית לחטא את הקליפה על ידי ניגוב אותו עם 70% אתנול. לאחר הקליפה התייבשה, להחליק חתיכת קלטת על הקצה הקהה של הביצה. לאחר מכן, השתמש במחט סטרילית כדי לנקב את הסרט והפגז. הכנס את המחט כלפי מטה כדי למנוע נזק לחלמון ולהסיר 5 מ"ל של אלבומין. לבסוף, כדי למנוע דליפה של אלבומין, לאטום את החור עם חתיכה אחרת של קלטת.

כדי לחתוך את הקליפה, הנח חתיכת קלטת מעל האזור שאתה מתכנן לחלון. באמצעות זוג מספריים, לעשות חור קטן בקליפה ולהתחיל לחתוך פתח עגול. במהלך תהליך זה, הקלטת תמנע מרסיסי קליפה ליפול על העובר.

גם לאחר חלון, עוברים בשלב מוקדם יכול להיות קשה לדמיין בשל גודלם הקטן ואת השקיפות. כדי לשפר את הניגודיות בין העובר לחלמון, ניתן להשתמש בדיו הודו מדולל ולא רעיל. הדיו מוזרק לתוך החלמון מתחת לעובר ומותר לו לפזר. כעת ניתן לראות את העובר בניגוד גבוה יותר לרקע הכהה. לאחר מניפולציות ניסיוניות, החלון צריך להיות יסתם מחדש עם סרט הדבקה ואת הביצה להציב בחזרה לתוך האינקובטור.

כעת, כאשר אתם מכירים טכניקות בסיסיות לעבודה עם ביצים, בואו נראה כיצד שיטות אלה משמשות לעריכת ניסויים על עוברי עוף.

כדי להתחיל, ניתן להשתמש בפתית כדי לזהות את המיקום של מבנים עובריים בביצים שלמות. לדוגמה, הממברנות החוץ-מבירוניות של עובר העוף משמשות בדרך כלל להפצת וירוסים. כדי להדביק את הממברנה, קשירת הממברנה מבוצעת כדי לאתר את הממשק בין חלל אלנטואי לבין שק האוויר, על מנת להזריק וירוס ישירות לתוך החלל אלנטואי מבלי לפגוע בעובר. לאחר מספר ימים של דגירה, מספר גדול של חלקיקים ויראליים ניתן לקצור מן הנוזל האלנטואי.

חלון ביצים הוא פרקטיקה שימושית ביותר שכן היא מאפשרת גישה לעובר לניסויים. ניסויים רבים מתחילים בהעברת דנ"א לרקמות ספציפיות באמצעות מיקרו-ערך. אלקטרודות ממוקמות לאחר מכן סביב רקמת העניין ושדה חשמלי מוחל כדי חלחל באופן זמני קרום התא ולהניע את חומצות הגרעין לתוך התא.

בעת ביצוע ניסויים על עוברים מוקדמים, הזרקת דיו הודו שימושית במיוחד להדמיית רקמות שקופות. כאן, הניגודיות המשופרת מאפשרת לחוקרים למיקרו-תזרים תמיסת דנ"א לתחומי רקמות מעודנים. בסופו של דבר, טכניקה זו יכולה לייצר תאים בעלי תווית אינדיבידואלית, אשר ניתן לפקח לאורך זמן כדי לעקוב אחר חלוקות תאים.

הרגע צפית בסרטון של ג'וב על תחזוקת בחורות. מצגת זו כיסתה טיפול ותחזוקה בסיסיים של ביצי תרנגולות, טכניקות נפוצות לעבודה עם אפרוחים וכמה דוגמאות לאופן יישום שיטות אלה במחקר ביולוגי. תודה שצפיתם!

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

לא הוכרזו ניגודי אינטרסים.

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter