A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
En 3D Tail Explant Culture för att studera ryggradsdjur segmentering i zebrafisk
Chapters
Summary June 30th, 2021
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Här presenterar vi protokollet för 3D-vävnadskulturen i zebrafiskens bakre kroppsaxel, vilket möjliggör levande studier av ryggradsdjur segmentering. Denna explant modell ger kontroll över axeln förlängning, förändring av morfogen källor och subcellulära upplösning vävnad nivå levande imaging.
Transcript
3D zebrafisk svans explanter låt oss utnyttja transparens av zebrafisk embryon i sin fulla utsträckning under somit utveckling och ryggradsdjur segmentering. Fyll en tom parningstank med fisksystemvatten. Rengör silen med systemvatten.
Höj barriärerna mellan parningsparen. Flytta selektivt fiskparet i färskvattentanken. Samla embryon i silen genom vattenöverföringar med en tom tank.
Skölj uppsamlade embryon med fisksystemvatten och vänd på en petriskål. Avsektionsverktyg för etanolglasyr. Gör två lager band på bilder.
Skär de horisontella sidorna av djupa kammare. Kompletta kammarsnitt med vertikala sidor. Skala av tejpen från kammarens yta.
Häll cellkulturmedia i ett rör. Blanda kalciumklorid 2,8 millimolär slutlig koncentration. Tillsätt antibiotikalösning.
Aliquot dissekeringsmedia i ett separat rör. Komplimang fetala nötkreatur serum att göra vävnad kultur medium. Dekorrelera embryon med nålar.
Skölj embryona i en sötvattensskål och samla dem för explantering. Stabilisera embryot med nålen och börja av-yoking. Trimma av de överblivna vävnaderna.
Överför explanterna till täckglaset. Platta ut vävnaden och sug ut överflödiga medier med pipett. Sätt täcket på tillväxtmediet som innehåller glidkammare.
Sätt explantvävnaden på en vävnadsservett. Applicera nedsänkningsolja på målet. Montera skjutkammaren på mikroskopet.
Justera laserkanaler för bildförvärv. Kontrollera z-lagergränserna för provet. Ställ in tidsavbildning och z-lager.
3D svans explant system håller cellintegration till svansknopp och överskott av förlängning intakt som hela embryon. Det är också möjligt att stoppa överskott av förlängning genom att kemiskt aktivera ytan med typ ett kollagen. 3D zebrafish tail explants system gör det möjligt för oss att utnyttja transparensen hos zebrafiskembryon genom att låta oss ta högupplösta och nästan objektiva mikroskopibilder.
Dessutom tillåter det oss att frikoppla överskottet av förlängning från morfogssignalering och även kontrollera morfogensignaleringskällorna med enkla dissekeringsmetoder.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
