न्यूजीलैंड व्हाइट रैबिट्स(ओरेक्टोलागस क्यूनिकुलस)में मातृ प्रतिरक्षण के अध्ययन में इंट्रानासल प्रतिरक्षण और दुग्ध संग्रह

मातृ प्रतिरक्षण और एंटीबॉडी हस्तांतरण के अध्ययन कई कारणों से अमूल्य हैं क्योंकि यह प्रतिरक्षा हस्तांतरण का प्रारंभिक मार्ग है और नवजात शिशुओं और शिशुओं में रोगजनकों और रोग से बाद में सुरक्षा है। मनुष्यों के साथ अपरा और एंटीबॉडी हस्तांतरण में समानताओं के कारण, खरगोश मातृ प्रतिरक्षण का एक उत्कृष्ट मॉडल हैं। इस वीडियो लेख में हम उन तकनीकों को प्रदर्शित करते हैं जो हमारी प्रयोगशाला ने न्यूजीलैंड व्हाइट रैबिट्स में मातृ प्रतिरक्षण के अध्ययन में उपयोग किया है, जिसमें इंट्रानासाल प्रतिरक्षण और दूध संग्रह शामिल है।

हम पहले न्यूजीलैंड व्हाइट खरगोशों में एक म्यूकोसल मातृ प्रतिरक्षण अध्ययन के लिए एक उदाहरण समय रेखा और घटनाओं की श्रृंखला का वर्णन करेंगे। महिला खरगोशों इंट्रानासल मार्ग के माध्यम से प्रतिरक्षित कर रहे हैं, के रूप में इस वीडियो में प्रदर्शन किया । अध्ययन के आधार पर, टीके को बढ़ावा देने की आवश्यकता हो सकती है या एक अतिरिक्त मार्ग के माध्यम से दिया जा सकता है, जैसे कि इंट्रामस्क्युलर प्रतिरक्षण।

हालांकि चित्रित नहीं किया गया है, आधारभूत मापन के लिए प्रारंभिक प्रतिरक्षण से पहले रक्त एकत्र किया जाना चाहिए, और नियमित अंतराल पर अध्ययन के शेष भर में। हल्के से खिलने और एक सामयिक एनाल्जेसिक एजेंट के साथ केंद्रीय कान धमनी द्वारा रक्त आसानी से प्राप्त किया जाता है। इन नमूनों में एंटीजन-विशिष्ट आईजीजी स्तरों की उपस्थिति को मापा जा सकता है।

खरगोश तो पैदा कर रहे हैं । हम इन अध्ययनों के लिए एक उच्च गर्भावस्था दर सुनिश्चित करने के लिए उपयोग करने के लिए विक्रेताओं से सिद्ध प्रजनक खरीदना पसंद करते हैं। प्रतिरक्षण समय रेखा के आधार पर, खरगोशों को गर्भावस्था के दौरान अतिरिक्त प्रतिरक्षण प्राप्त हो सकता है।

एंटीजन-विशिष्ट आईजीजी को किट में स्थानांतरित कर दिया जाता है। लगभग 30 से 32 दिनों के बाद प्रजनन गर्भवती जलाना होगा । हम पहले कई दिनों के लिए किट की हैंडलिंग सीमित करने के लिए करता है से अस्वीकृति को कम करने की सलाह देते हैं ।

एंटीजन विशिष्ट आईजीजी स्तरों का आकलन करने के लिए किट से रक्त नमूने एकत्र किए जा सकते हैं जिन्हें ट्रांसप्लेस्ट रूप से स्थानांतरित किया गया था। प्रारंभिक एंटीजन विशिष्ट एंटीबॉडी स्तर का आकलन करने के लिए जन्म के समय या उसके पास थोड़ी संख्या में किट से रक्त एकत्र किया जा सकता है। पोषक तत्वों की एक विस्तृत विविधता के अलावा, किट स्तनपान कराने वाले डो से एंटीजन विशिष्ट आईजीए प्राप्त करते हैं, जबकि नर्सिंग।

किट आम तौर पर उम्र के चार से आठ सप्ताह में छुड़ाना कर रहे हैं । दूध प्रात: बधाने से पहले आसानी से स्तनपान से एकत्र किया जा सकता है के रूप में इस वीडियो में प्रदर्शन किया है । इसके बाद एकत्र किए गए दूध के नमूनों को एंटीजन विशिष्ट आईजीए का पता लगाने के लिए कार्रवाई की जाती है ।

अध्ययन के आधार पर, टीके और एक बढ़ावा किट के लिए प्रशासित किया जा सकता है और धारावाहिक रक्त के नमूनों को पार्श्व saphenous नस का उपयोग कर एक बहुत ही कम उंर में किट से एकत्र किया जा सकता है । अब हम न्यूजीलैंड व्हाइट रैबिट्स में इंट्रानासाल प्रतिरक्षण और दुग्ध संग्रह का प्रदर्शन करेंगे । प्रोटोकॉल । सभी प्रक्रियाओं को मंजूरी दे दी और ड्यूक विश्वविद्यालय संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति की नीतियों के अनुसार प्रदर्शन किया गया ।

इंट्रानसल इम्यूनाइजेशन। आवश्यक सामग्री: एकेप्रोमाज़ीन, सिरिंज और सुई, नेत्र स्नेहक, आइसोफलुरेन, नाक शंकु, पिपेट, और पिपेट टिप्स, म्यूकोसल वैक्सीन। पशु हैंडलिंग से पहले प्रतिरक्षण समाधान तैयार करें।

खरगोशों को एक मिलीग्राम प्रति किलोग्राम इंट्रामस्कुलरली के साथ बेहोश किया जाता है, और नाक शंकु का उपयोग करके आइसोफ्लुनान के साथ एनेस्थेटाइज्ड किया जाता है। पलक पलटा द्वारा मूल्यांकन के रूप में पूरी तरह से एनेस्थेटाइज्ड होने के बाद, आंखों के सूखने और बाद में कॉर्नियल अल्सर को रोकने के लिए प्रत्येक आंख में एक नेत्र स्नेहक जोड़ा जाता है। एक बार जब प्रयोगशाला सदस्य वैक्सीन को प्रशासित करने के लिए तैयार हो जाता है और खरगोश संज्ञाहरण के पर्याप्त विमान में होता है, तो आइसोफ्लुन और ऑक्सीजन बंद कर दें और नाक शंकु को हटा दें।

खरगोश को पृष्ठीय प्रतिनवता में रखें और लगभग 45 डिग्री कोण पर गर्दन और सिर को सहारा दें जो वैक्सीन का प्रशासन करने वाले प्रयोगशाला सदस्य द्वारा दोनों अलार के आसान पहुंच और दृश्य की अनुमति देता है। वैक्सीन समाधान के 100 से अधिक माइक्रोलीटर के साथ पिपेट लोड करें और जल्दी से एक नथुने के समाधान को प्रशासित करें और दूसरे नथुने के लिए प्रक्रिया दोहराएं। पिपेट को लगभग 45 डिग्री कोण में आयोजित किया जाना चाहिए।

नाक मार्ग के मध्यीय पहलू की ओर कोण। प्रतिरक्षण का लक्ष्य नार्स की म्यूकोसल झिल्ली से संपर्क करने के लिए समाधान के लिए है। इसलिए टिप को नार्स के भीतर नहीं रखा जाना चाहिए क्योंकि इसके परिणामस्वरूप म्यूकोसल ऊतकों का घर्षण या जलन हो सकती है और संभावित रूप से नासली प्रशासित वैक्सीन की इम्यूनोजेनिसिटी को प्रभावित किया जा सकता है।

टीका जल्दी से प्रशासित किया जाना चाहिए और अन्य नथुने में एक ही तरीके से किया जाना चाहिए। दोनों नाक मार्ग में प्रशासन के बाद, खरगोश को वैक्सीन समाधान के रिसाव को कम करने के लिए 30 सेकंड के लिए पृष्ठीय प्रतिनंदन में बनाए रखा जाता है। प्रयोगशाला आम तौर पर एक समय में नथुने प्रति १०० माइक्रोलीटर से अधिक नहीं प्रशासन होगा ।

यदि 500 माइक्रोलीटर की अधिकतम कुल मात्रा के साथ एक बड़ी मात्रा दिलाई जानी है, तो टीका प्रतिरक्षण के बीच 30 सेकंड की आराम अवधि के साथ 100 माइक्रोलीटर एलिकोट्स में दिया जा सकता है। और वैक्सीन के अतिरिक्त प्रशासन प्रत्येक प्रशासन के बीच आराम के 30 सेकंड के साथ दोहराया जब तक कुल वैक्सीन की मात्रा दिया जाता है । प्रतिरक्षण के बाद, खरगोश को वसूली के लिए वेंड्रम पर रखें और जानवर की बारीकी से निगरानी करें जब तक कि यह स्टर्नल रेक्यूबेंसी बनाए रखने में सक्षम न हो।

कुछ उदाहरणों में, टीका निर्माण पूरी तरह से नाक गुहा को नहीं दिया जा सकता है और वैक्सीन निर्माण का एक हिस्सा नार्स के बाहरी हिस्से पर रह सकता है। इस उदाहरण में, क्योंकि यह टीके की सही मात्रा से स्पष्ट नहीं है जो ठीक से नाक गुहा को दिया गया था, अतिरिक्त वैक्सीन सामग्री के पुनर्application की सिफारिश न करें क्योंकि यह प्रयोग में एक अपरिभाषित चर जोड़ देगा। वैक्सीन वितरण तकनीक का उपयोग करना महत्वपूर्ण है जो नार्स को वैक्सीन फॉर्मूलेशन की पूर्ण और लगातार डिलीवरी प्रदान करती है।

दुग्ध संग्रह। सामग्री की जरूरत: Acepromazine, सीरिंज और सुई, शराब झाड़ू, धुंध, नेत्र स्नेहक, Isoflurane, नाक शंकु, ऑक्सीटोसिन, और एक संग्रह शीशी । खरगोशों को एक मिलीग्राम प्रति किलोग्राम इंट्रामस्कुलरली के साथ बेहोश किया जाता है, और नाक शंकु का उपयोग करके आइसोफ्लुनान के साथ एनेस्थेटाइज्ड किया जाता है।

पलक पलटा द्वारा मूल्यांकन के रूप में पूरी तरह से एनेस्थेटाइज्ड होने के बाद, आंखों के सूखने और बाद में कॉर्नियल अल्सर को रोकने के लिए प्रत्येक आंख पर एक नेत्र स्नेहक लागू किया जाता है। शराब झाड़ू के साथ सीमांत कान नस पर त्वचा को साफ करें। एक लाख सिरिंज और 25 गेज सुई का उपयोग करना, दूध को प्रेरित करने के लिए सीमांत कान नस द्वारा नसों के द्वारा ऑक्सीटोसिन की लगभग एक से दो अंतरराष्ट्रीय इकाइयों को प्रशासित करें।

चिकनी मांसपेशियों में छूट के कारण, खरगोश के लिए ऑक्सीटोसिन के प्रशासन के बाद पेशाब करना या शौच करना आम बात है। ऑक्सीटोसिन प्रशासन के बाद, इंजेक्शन साइट पर हेमोसेसिस प्रदान करने के लिए धुंध के टुकड़े के साथ दबाव लागू करें। खरगोश की नाक पर संज्ञाहरण मुखौटा या नाक शंकु को बनाए रखते हुए, खरगोश को अपने पिछले क्वार्टर पर सहारा दें।

एक साइड नोट के रूप में, दूध संग्रह भी पार्श्व recumbency में जानवर के साथ किया जा सकता है, लेकिन प्रयोगशाला पाता है कि संग्रह आसान है जब खरगोश पर खड़ा है यह एक सहायक संज्ञाहरण मुखौटा के साथ सीधे खरगोश पकड़े के साथ दुम है । दूध संग्रह के लिए तैयार करने और स्तन ऊतक और संबद्ध टीट्स का पता लगाने के लिए बाँझ ट्यूब खोलें। खरगोशों में आम तौर पर चार से पांच जोड़े स्तन ग्रंथियां होती हैं।

टीट्स आम तौर पर हाल ही में नर्सिंग से गीले फर से घिरे होते हैं और दूध से भरे होने पर स्तन ऊतक आसानी से स्पष्ट हो जाता है। अंगूठे और तर्जनी के बीच टीट से जुड़े स्तन ऊतक पर पकड़ें और टीट की दिशा में ग्रंथि ऊतक पर एक सौम्य मालिश दबाव लागू करें। व्यक्त दूध इकट्ठा करने के लिए सागौन के ऊपर संग्रह ट्यूब रखें।

कभी-कभी ऑक्सीटोसिन प्रभावी होने में कई मिनट लग सकते हैं, और दूध उत्पादन स्तन ग्रंथियों के बीच भिन्न होता है। यदि दूध की अभिव्यक्ति सफल नहीं होती है, तो कई मिनट प्रतीक्षा करें या एक अतिरिक्त स्तन ग्रंथि के चारों ओर घूमें। सभी टीट्स से दूध एक ही नीच में एकत्र किया जा सकता है।

आमतौर पर दूध के कई मिलीलीटर आसानी से एक स्तनपान कराने वाले डो से एकत्र किया जा सकता है। दूध की वांछित मात्रा एकत्र होने के बाद, आइसोफ्लाणे और ऑक्सीजन को बंद कर दें और खरगोश से नाक शंकु को हटा दें, और खरगोश को तब तक ठीक होने की अनुमति दें जब तक कि जानवर कठोर संवर्ण को बनाए रखने में सक्षम न हो जाए। प्रतिनिधि परिणाम।

एक चित्रा। मातृ अध्ययन के लिए, जितनी जल्दी हो सके गर्भावस्था का निर्धारण इस बात की पुष्टि करने में सहायक है कि डो को फिर से पैदा करने की आवश्यकता नहीं है। गर्भावस्था का पता लगाने के विकल्पों में टटोलना, अल्ट्रासाउंड, रेडियोग्राफ, वजन बढ़ जाना, और आणविक तकनीक जैसे इंसुलिन विकास कारकों और प्रोजेस्टेरोन के माप शामिल हैं।

खरगोशों में गर्भावस्था के रखरखाव के लिए पर्याप्त प्रोजेस्टेरोन स्तर आवश्यक हैं। इसलिए कई अध्ययनों ने गर्भवती खरगोशों में प्रोजेस्टेरोन के स्तर का भी आकलन किया है और गैर-गर्भवती खरगोशों के सापेक्ष ऊंचा स्तर प्रदर्शित किया है, विशेष रूप से मध्य गर्भ के आसपास ऑर्गेनोजेनेसिस के दौरान। जैसा कि आंकड़ा एक में दिखाया गया है, एक हिरन द्वारा संभोग के बाद भी गैर-गर्भवती खरगोशों की तुलना में गर्भवती खरगोशों में ऊंचा प्रोजेस्टेरोन का स्तर पाया जा सकता है।

सीरम प्रोजेस्टेरोन के स्तर को एक स्वचालित रसायनिने चढ़ाई परख का उपयोग करके मापा गया था। चित्रा दो। एंटीजन विशिष्ट आईजीजी जिसे गर्भाधान के दौरान ट्रांसप्लेस्ट रूप से स्थानांतरित किया गया था, एलिसा द्वारा किट के सीरम में मापा जा सकता है।

प्रारंभिक एंटीजन विशिष्ट एंटीबॉडी स्तर का आकलन करने के लिए जन्म के समय या उसके पास थोड़ी संख्या में किट से रक्त एकत्र किया जा सकता है। सीरियल रक्त संग्रह तकनीकी रूप से बहुत आसान है क्योंकि किट उम्र और आकार में वृद्धि होती है। जैसा कि चित्रा दो में दर्शाया गया है, किट में एंटीजन विशिष्ट आईजीजी के सीरम स्तर को मापा जा सकता है और मातृ स्तरों की तुलना में।

मातृ स्थानांतरित आईजीजी स्तर जन्म के समय अधिक होते हैं और समय के साथ घटते हैं। चित्रा तीन। खरगोश के दूध के रूप में इस वीडियो में दिखाया गया है, एकत्र किया जा सकता है, और एलिसा द्वारा कुल और एंटीजन विशिष्ट एंटीबॉडी के स्तर को मापने के लिए संसाधित ।

जैसा कि इस आंकड़े में दिखाया गया है, आईजीए स्तन के दूध के भीतर कुल एंटीबॉडी का एक महत्वपूर्ण हिस्सा बनाता है जो किट में निष्क्रिय हस्तांतरण के लिए उपलब्ध हैं। आईजीए और आईजीजी दोनों का स्तर आईजीएम सारांश की तुलना में काफी अधिक है। इस वीडियो लेख का वर्णन करता है और इंट्रानासल टीकों के प्रशासन और स्तनपान कराने वाले खरगोशों से दूध के संग्रह को मातृ प्रतिरक्षण के एक अनुवादीय उपयुक्त मॉडल में म्यूकोसल प्रतिरक्षा का आकलन करने के साधन के रूप में दर्शाता है ।

चित्रित प्रतिरक्षण, प्रजनन, जलाने, स्तनपान, और एंटीबॉडी हस्तांतरण को शामिल करते हुए एक ठेठ मातृ इंट्रानासाल प्रतिरक्षण अध्ययन डिजाइन के लिए एक सारांश छवि है।