Journal
/
/
Intranasal immunisering og melkesamling i studier av mors immunisering i New Zealand hvite kaniner (Oryctolagus cuniculus)
JoVE Journal
Immunology and Infection
Author Produced
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Immunology and Infection
Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits (Oryctolagus cuniculus)

Intranasal immunisering og melkesamling i studier av mors immunisering i New Zealand hvite kaniner (Oryctolagus cuniculus)

3,420 Views

13:00 min

July 31, 2021

DOI:

13:00 min
July 31, 2021

1 Views
, , ,

Transcript

Automatically generated

Studier av mors immunisering og antistoffoverføring er uvurderlige av mange grunner, da dette er den første ruten for immunitetsoverføring og etterfølgende beskyttelse mot patogener og sykdom hos nyfødte og spedbarn. På grunn av likheter i placentation og antistoffoverføring med mennesker, er kaniner en utmerket modell for mors immunisering. I denne videoartikkelen demonstrerer vi teknikker laboratoriet vårt har brukt i studier av mors immunisering i New Zealand White Rabbits, inkludert intranasal immunisering og melkesamling.

Vi vil først beskrive et eksempel tidslinje og serier av hendelser for en mucosal mors immunisering studie i New Zealand White Rabbits. Kvinnelige kaniner immuniseres via intranasalruten, som vist i denne videoen. Avhengig av studien kan vaksinen kreve et løft eller må kanskje gis gjennom en ekstra rute, for eksempel intramuskulær immunisering.

Selv om det ikke er avbildet, bør blod samles inn før den første immuniseringen for baselinemålinger, og gjennom resten av studien med jevne mellomrom. Blod oppnås lett av den sentrale ørearterien med mild sedasjon og et aktuelt smertestillende middel. Tilstedeværelsen av antigenspesifikke IgG-nivåer kan måles i disse prøvene.

Kaniner blir deretter avlet. Vi foretrekker å kjøpe påviste oppdrettere fra leverandører å bruke for å sikre en høyere graviditetsrate for disse studiene. Avhengig av immuniseringstidslinjen kan kaniner få ytterligere immuniseringer gjennom hele svangerskapet.

Antigenspesifikk IgG overføres transplacent til settene. På ca 30 til 32 dager etter avl gravid vil kindle. Vi anbefaler å begrense håndteringen av settene de første dagene for å minimere avvisning fra gjør.

Blodprøver kan samles inn fra settene for å vurdere antigenspesifikke IgG-nivåer som ble overført transplacentalt. Blod kan samles fra et lite antall sett på eller i nærheten av fødselstidspunktet for å vurdere tidlige antigenspesifikke antistoffnivåer. I tillegg til et bredt utvalg av næringsstoffer, får sett antigenspesifikk IgA fra lakterende doe mens de ammer.

Settene avvennes vanligvis ved fire til åtte ukers alder. Før avvenning av melk kan lett samles fra lakterende gjør som demonstrert i denne videoen. De innsamlede melkeprøvene behandles deretter for påvisning av antigenspesifikk IgA.

Avhengig av studien kan vaksiner og et løft administreres til settene, og serielle blodprøver kan samles inn fra settene i en svært tidlig alder ved hjelp av lateral saphenous vene. Vi vil nå demonstrere intranasal immunisering og melk samling i New Zealand White Rabbits.Protocol. Alle prosedyrer ble godkjent og utført i samsvar med Duke University Institutional Animal Care And Use Committee retningslinjer.

Intranasal immunisering. Nødvendige materialer:Acepromazin, sprøyte og nål, oftalmisk smøremiddel, Isofluran, nesekjegle, pipette og pipettespisser, slimhinnevaksine. Forbered immuniseringsløsningen før dyrehåndtering.

Kaniner er bedøvet med Acepromazin ett milligram per kilo intramuskulært, og bedøvet med Isofluran ved hjelp av en nesekegle. Når det er fullstendig bedøvet som vurdert av øyelokk refleks, tilsettes et oftalmisk smøremiddel til hvert øye for å forhindre tørking av øynene og påfølgende hornhinnen sårdannelse. Når labmedlemmet er klar til å administrere vaksinen og kaninen er i et tilstrekkelig plan av anestesi, slå av isofluran og oksygen og fjern nesekjeglen.

Plasser kaninen i dorsal recumbency og prop nakke og hode i en omtrent 45 graders vinkel som gir enkel tilgang og visualisering av begge alars av labmedlemmet som administrerer vaksinen. Last pipetten med ikke mer enn 100 mikroliter av vaksineløsningen og administrer løsningen raskt til ett nesebor og gjenta prosedyren for det andre neseboret. Pipetten skal holdes i en omtrentlig 45 graders vinkel.

Vinkel mot mediale aspektet av nesepassasjen. Målet med immunisering er at løsningen skal komme i kontakt med slimhinnene i nares. Så tipset bør ikke plasseres i nares, da dette kan føre til slitasje eller irritasjon av slimhinnen vev og potensielt påvirke immunogenisiteten til den nasalt administrerte vaksinen.

Vaksinen skal administreres raskt og gjøres på samme måte i det andre neseboret. Etter administrering i begge nesepassasjene opprettholdes kaninen i dorsal recumbency i 30 sekunder for å minimere lekkasje av vaksineløsningen. Laboratoriet vil vanligvis ikke administrere mer enn 100 mikroliter per nesebor om gangen.

Hvis et større volum skal administreres med et maksimalt totalt volum på 500 mikroliter, kan vaksinen gis i 100 mikroliter aliquots med en 30 sekunders hvileperiode mellom immuniseringer. Og ytterligere administrasjoner av vaksine gjentatt med 30 sekunder hvile mellom hver administrasjon til det totale vaksinevolumet er levert. Etter immunisering, plasser kaninen på ventrum for utvinning og overvåk dyret nøye til det er i stand til å opprettholde sternal heftelse.

I noen tilfeller kan vaksineformuleringen ikke leveres helt til nesehulen, og en del av vaksineformuleringen kan forbli på den ytre delen av nares. I dette tilfellet, fordi det ikke er klart for det nøyaktige volumet av vaksinen som ble riktig levert til nesehulen, anbefaler ikke å bruke ekstra vaksinemateriale på nytt, da dette vil legge til en udefinert variabel til eksperimentet. Det er viktig å bruke en vaksineleveringsteknikk som gir fullstendig og konsistent levering av vaksineformuleringen til nares.

Melk samling. Materialer som trengs:Acepromazin, sprøyter og nåler, alkoholpinne, gasbind, oftalmisk smøremiddel, Isofluran, nesekjegle, oksytocin og et oppsamlingsvæske. Kaniner er bedøvet med Acepromazin ett milligram per kilo intramuskulært, og bedøvet med Isofluran ved hjelp av en nesekegle.

Når det er fullstendig bedøvet som vurdert av øyelokk refleks, påføres et oftalmisk smøremiddel på hvert øye for å forhindre tørking av øynene og påfølgende hornhinnen sårdannelse. Rengjør huden over den marginale ørevenen med alkoholpinnen. Bruk en en mil sprøyte og 25 gauge nål, administrere omtrent en til to internasjonale enheter av oksytocin intravenøst av marginal øret venen for å indusere melk sviktet.

På grunn av den glatte muskelavslapningen er det vanlig at kaninen urinerer eller avfeirer etter administrering av oksytocin. Etter oksytocin administrering, bruk trykk på injeksjonsstedet med et stykke gasbind for å gi hemostase. Mens du opprettholder anestesimasken eller nesekjeglen over kaninens nese, kan du støtte kaninen opp på bakkvarteret.

Som et sidenotat kan melkekolleksjon også utføres med dyret i lateral recumbency, men laboratoriet finner at samlingen er lettere når kaninen er proppet opp på dens rumpe med en assistent som holder kaninen oppreist med anestesimasken. Åpne det sterile røret for å forberede melkeoppsamling og lokalisere pattedyrvevet og tilhørende teats. Kaniner har vanligvis fire til fem par brystkjertler.

Smokkene er vanligvis omgitt av våt pels fra nyere sykepleie, og pattedyrvevet er lett håndgripelig når det er fullt av melk. Grip på brystvevet forbundet med smokken mellom tommelen og pekefingeren og påfør et forsiktig massasjetrykk på kjertelen vev i retning av smokken. Plasser oppsamlingsrøret over smokken for å samle den uttrykte melken.

Det kan noen ganger ta flere minutter før oksytocinet er effektivt, og melkeproduksjonen ser ut til å variere mellom brystkjertlene. Hvis melkeuttrykket ikke lykkes, vent flere minutter eller roter rundt til en ekstra brystkjertel. Melk fra alle teats kan samles i samme sjofel.

Vanligvis kan flere milliliter melk lett samles fra en lakterende doe. Etter at ønsket volum melk er samlet inn, slå av Isofluran og oksygen og fjern nesekjeglen fra kaninen, og la kaninen komme seg mens den overvåkes nøye til dyret er i stand til å opprettholde sternal heftelse. Representative resultater.

Figur én. For mors studier er det nyttig å bestemme graviditet så tidlig som mulig for å bekrefte at doe ikke trenger å bli oppdrettet på nytt. Alternativer for graviditet deteksjon inkluderer palpasjon, ultralyd, radiografer, vektøkning, og molekylære teknikker som målinger av insulin vekstfaktorer og progesteron.

Tilstrekkelig progesteronnivåer er nødvendige for vedlikehold av graviditet hos kaniner. Derfor har flere studier også vurdert progesteronnivåer hos gravide kaniner og vist forhøyede nivåer i forhold til ikke-gravide kaniner, spesielt under organogenese rundt midten av svangerskapet. Som vist i figur en, kan forhøyede progesteronnivåer oppdages hos gravide kaniner sammenlignet med ikke-gravide kaniner, selv etter at parringer med en dollar ble bekreftet for alle gjør det.

Serum progesteron nivåer ble målt ved hjelp av en automatisert chemiluminescent analyse. Figur to. Antigenspesifikk IgG som ble overført transplacent under svangerskapet, kan måles i serumet på settene av Elisa.

Blod kan samles fra et lite antall sett på eller i nærheten av fødselstidspunktet for å vurdere tidlige antigenspesifikke antistoffnivåer. Seriell blodoppsamling er teknisk mye enklere ettersom settene eldes og øker i størrelse. Som avbildet i figur to, kan serumnivåer av antigenspesifikk IgG i settene måles og sammenlignes med mors nivåer.

Maternalt overførtE IgG-nivåer er høyere ved fødselen og reduseres over tid. Figur tre. Kaninmelk kan samles som vist i denne videoen, og behandles for å måle totale og antigenspesifikke antistoffnivåer av Elisa.

Som vist i denne figuren utgjør IgA en betydelig del av de totale antistoffene i morsmelken som er tilgjengelige for passiv overføring til settene. Både IgA- og IgG-nivåene er betydelig høyere enn IgM.Summary. Denne videoartikkelen beskriver og demonstrerer administrering av intranasale vaksiner og innsamling av melk fra lakterende kaniner som et middel til å vurdere slimhinneimmunitet i en oversettelsesmessig passende modell for mors immunisering.

Avbildet er et sammendragsbilde for en typisk mors intranasal immuniseringsstudiedesign som omfatter immuniseringer, avl, opptenning, amming og antistoffoverføring.

Summary

Automatically generated

Denne artikkelen beskriver og demonstrerer administrering av intranasale vaksiner og innsamling av melk fra lakterende kaniner (Oryctolagus cuniculus) som et middel til å vurdere mukosal immunitet i en oversettingsmessig passende modell for mors immunisering.

Read Article