Biology
This content is Free Access.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Трансекция спинного мозга у головастиков Xenopus laevis
Chapters
Summary
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Xenopus laevis tadpole перетекания спинного мозга является соответствующим методом травмирования для изучения повреждения и регенерации спинного мозга путем поперечного разреза, который полностью разрывает спинной мозг на грудном уровне.
Transcript
Этот протокол позволяет изучать регенерацию спинного мозга у лягушек. Полученные знания могут дать новое понимание, чтобы понять, как люди реагируют на травму спинного мозга. Основным преимуществом этого протокола является легкость в выполнении травмы, а также то, что по сравнению с парадигмой ампутации хвоста, эта техника лучше имитирует то, что происходит у людей.
Этот метод позволяет бросить вызов регенеративному процессу, чтобы лучше понять участие различных генов, белков, молекул и сигнальных путей, тем самым идентифицируя новые терапевтические мишени, найти правильное место для генерации травмы, а также ее расширения, сложно. Возможность видеть эти шаги имеет решающее значение для того, чтобы сделать эту процедуру простой и воспроизводимой. Через три-четыре недели после оплодотворения поместите головастиков в чашку Петри и проверьте морфологию и внешний вид передних и задних конечностей.
Ищите следующие анатомические характеристики животных стадии-50, передние конечности, которые только появляются и являются сферическими, и задние конечности, которые являются выступающими и сферическими. Перед операцией обезбольте головастиков, поместив их в 0,02% трицин мезилат в 0,1 раза больше раствора Барта, и проверьте, что животные не реагируют, перевернув их вверх дном. Чтобы выполнить операцию по трансекции спинного мозга, используйте столовую ложку и щипцы, чтобы поместить обезболенную спинную сторону головастика стадии 50 вверх на влажный кусок марли в верхней половине стеклянной чашки Петри.
Затем, используя микродиссекционные пружинные ножницы, делают разрез кожи и спинных мышц на среднегрудном уровне. Для контроля фиктивных животных убедитесь, что размер разреза составляет всего 0,2 миллиметра и не повреждает спинной мозг. У трансецированных животных делают второй разрез в 0,2 миллиметра, чтобы полностью трансецировать спинной мозг.
После операции переведите головастиков в резервуар, содержащий 500 миллилитров в 0,1 раза раствор Барта с однократным введением пенициллина и стрептомицина при плотности от 10 до 12 головастиков на резервуар. Поддерживайте трансективных и управляйте фиктивными головастиками в отдельных танках. Поддерживают головастиков с аэрацией при температуре от 20 до 21 градуса Цельсия.
Меняйте раствор Барта антибиотиками через день до конца эксперимента. Начните кормить головастиков через день после операции и устраните мертвых животных. Для анализа плавания приобретите коробку со светодиодной подсветкой изнутри, покрытую прозрачным полистирольным листом, пропускающим свет, и установите камеру над светодиодным ящиком.
Затем поместите чашку Петри диаметром 15 сантиметров поверх коробки, заполненной 100 миллилитрами 0,1-кратного раствора Барта. Однажды после трансекции поместите головастика в чашку Петри и оставьте ее на пятиминутный адаптационный период. После адаптации запустите видео, отслеживающее поведение свободного плавания с помощью эталонного программного обеспечения в течение пяти минут.
После того, как видео будет завершено, перенесите головастика обратно в его резервуар. Этот репрезентативный точечный график показывает восстановление двигательной функции во времени. Через пять дней после трансекции головастики проплыли в среднем 0,7 метра за пять минут, показав снижение плавательной способности.
Эта емкость увеличивалась с переходными днями, показывая в среднем 2,1 метра за пять минут через 10 дней и 3,1 метра за пять минут после 15 дней после трансекции. Полное восстановление плавательных способностей наблюдалось через 20 дней после трансекции, в среднем 5,7 метра за пять минут. Средний показатель плавания может варьироваться в зависимости от каждой партии животных.
Таким образом, экспериментальную группу всегда следует сравнивать с соответствующими контрольными группами, а не с ранее полученными данными. После операции животные могут быть использованы для глобального анализа, включая транскриптомику, протеомику и метаболомику, а также для скрининга соединений, которые ингибируют или способствуют регенерации спинного мозга, с целью разработки новых терапевтических подходов.
Tags
Биология выпуск 178Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
