Гетеротопическая трансплантации сердца у мышей

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Мышь гетеротопической модель трансплантации сердца была доказана многими исследователями важным методом изучения механизмов отторжения и иммунного ответа. Тем не менее, методы участвуют все еще сложной. Изменяя стандартные методы, которые мы имели успех с более чем 1000 трансплантатов.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Liu, F., Kang, S. M. Heterotopic Heart Transplantation in Mice. J. Vis. Exp. (6), e238, doi:10.3791/238 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Мышь гетеротопической трансплантации сердца широко используется, поскольку она была введена доктором. Корри и Рассел в 1973 году. Это особенно ценно для изучения отторжения и иммунный ответ теперь, что новые трансгенные и мышей гена нокаутом доступны, и большое число иммунологических реагентов были разработаны. Модель пересадке сердца является менее строгим, чем модели пересадке кожи, хотя технически более сложным. Мы разработали модифицированную технику и выполнили более 1000 успешных случаев гетеротопической трансплантации сердца у мышей. При принятии анастомоз восходящей аорты и брюшной аорты, два швов пребывания помещены в проксимальных и дистальных вершины получателя брюшной аорты с восходящей аорты с донорами, то с помощью 11-0 шва для анастомоза по обе стороны от аорты с продолжением швов. Пребывание швов делают анастомоз проще и 11-0 имеет идеальный размер шва, чтобы избежать кровотечения и тромбоз.

При принятии анастомоз легочной артерии и нижней полой вены, два швов пребывания принимаются на вершине проксимальных и дистальных вершине нижней полой вены с получателем с легочной артерии с донорами. Левой стене нижнюю полую вену и легочную артерию донора с закрыта с продолжением швы с внутренней стороны нижней полой вены после того, один узел с проксимальных пребывания вершине шва правой стенки нижней полой вены и легочной артерии с донорами закрыты с продолжением швов снаружи нижней полой пещере с 10-0 швов. Этот метод проще, поскольку для выполнения анастомоза производится только на одной стороне нижней полой вены и 10-0 швов нужного размера, чтобы избежать кровотечения и тромбоз. В этой статье мы представить подробную информацию о технике в дополнение к видео.

Protocol

Подготовка донора и сердце Урожай:

  1. Мышь анестезией с внутрибрюшинного введения фенобарбитала и помещены на спине на операционном поле.
  2. Долго средней линии брюшной надрез. Брюшной содержание отказался марлей налево, чтобы разоблачить брюшной аорты и нижней полой вены.
  3. 1 мл гепарина (10u/ml) вводится в нижней полой вены для гепаринизация.
  4. Торакотомия производится: ребра делятся по обе стороны позвоночника и передней стенки груди заемными до подвергать сердце.
  5. Нижней полой вены, верхней полой вены и непарный вены лигировали с 6-0 шелка и разделен выше лигатуры.
  6. Восходящей аорты и легочной артерии разделяются и разделен насколько дистально насколько это возможно.
  7. Легочной вены перевязаны и разделить дистальнее связей.
  8. Сердце озарен 4 С о физиологический раствор.
  9. Сердце хранится в лед холодный раствор раствором.

Получатель Подготовка и трансплантации

  1. Мышь анестезией с внутрибрюшинного введения фенобарбитала и помещены на спине на операционном поле.
  2. Долго средней линии брюшной надрез. Брюшной содержимое убираются вне брюшной полости марлей, чтобы разоблачить брюшной аорты и нижней полой вены.
  3. Ветвей брюшной аорты и нижней полой вены подвергаются и лигировали с 10-0 швов.
  4. Проксимальной и дистальной лигатуры расположены вокруг аорты и нижней полой вены, соответственно.
  5. Венотомия выполнен в нижней полой вены реципиента с 30 иглы. Открытие затем распространяется на длину равную легочной аорты донора с микро-ножниц.
  6. Aortotomy выполнен в брюшной аорты получателя, 30 иглы.
  7. Открыл брюшной аорты и нижней полой вены орошаются с физиологическим раствором.
  8. Сердце донора помещается на левой стороне живота получателя и покрыт марлей.
  9. Пребывание швы располагаются на проксимальных и дистальных вершины получателя брюшной аорты с восходящей аорты донора.
  10. Анастомоз в правой части брюшной аорты реципиента и восходящей аорты донора комплектуются продолжает швов.
  11. Два швов пребывания производится сначала в проксимальных и дистальных вершине вершине нижней полой вены получателя с легочной артерии донора для анастомоза легочной артерии донора и нижней полой вены получателя.
  12. Левой стене нижнюю полую вену и легочную артерию донора закрыта с продолжением швов во внутренней нижней полой вены.
  13. После одного узла с проксимальных шва пребывания вершине, правой стенки нижней полой вены и легочной артерии донора закрыты продолжает швов снаружи нижней полой пещере.
  14. Сердце донора не переходит к правой стороне живота получателя. Правой стенки брюшной аорты реципиента и восходящей аорты анастомоза донора закрыты продолжать швов.
  15. После анастомоза сделан, дистальной лигатуры удаляется проверить кровотечение из анастомоза.
  16. Если есть немного ни к какому кровотечение из анастомоза, проксимальных лигатуры удаляется. Сердце донора наполняется кровью немедленно; цвет сердце становится красным и начинает биться снова.
  17. Кишечник возвращаются в животе, которая закрыта с 6-0 непрерывной нити.
  18. Получатель мыши помещается на теплое место. Через час получателя восстанавливается.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Результаты

Мы успешно провели более 1000 случаев гетеротопической трансплантации сердца у мышей и достигла более чем 90% успеха в разных линий мышей, в том числе дикого типа, трансгенные и мышей гена нокаутом.

Обсуждение

С докторами. Корри и Рассел ввел гетеротопической трансплантации сердца у мышей, в 1973 году, эта модель доказала, что особенно ценно для изучения иммунной реакции отторжения и разработки новых иммуносупрессивных стратегий. Эта модель может быть более широко используются сейчас, потому что появление многочисленных трансгенных мышей и гена нокаутом предоставила новые возможности для исследования механизмов отторжения / толерантности. Пересадка сердца васкуляризированной модель может быть более актуальными для клинических твердых трансплантации органов. Хотя кожи трансплантатов или подкожной трансплантации сердца у новорожденных, технически проще, неоваскуляризации, что требуется для получения взяток выживания в этих трансплантаций особенно чувствительны к аллогенного ответа. Таким образом, кожи и подкожной услышать трансплантации может быть полезно для строгого теста толерантности, но не для развития или оптимизации иммуносупрессивной или терпимости протоколов вызывающие.

Мы изменили сосудистой технику пересадки сердца в нескольких направлениях для повышения эффективности и показатели эффективности:

  1. Сердце донора должны быть орошаемых с физиологическим раствором из восходящей аорты, пока сердце станет светлым цветом после уборки урожая.
  2. Ветвей брюшной аорты и нижней полой вены реципиента должны быть лигировали с 10-0 швов, предотвращая кровотечение во время операции и тромбоза после операции.
  3. Просвет брюшной аорты и нижней полой вены реципиента должны быть орошаемых с солевым раствором, пока кровь не осталось. Это может предотвратить тромбоз после операции.
  4. Пузырьки воздуха внутри сосудов следует избегать при создании анастомозов.
  5. Артерии анастомозов должны использовать 11-0 швов, чтобы помочь предотвратить кровотечение из анастомоза.
  6. Разрез брюшной аорты и нижней полой вены реципиента должна быть равна открытие легочной артерии и восходящей аорты сердца донора.
  7. Важно иметь четкую и экспансивный рабочее поле, поэтому используйте 6-0 шва вместо зажимов временно закрывают аорты и нижней полой вены.

Заключение

Хотя техника гетеротопической трансплантации сердца у мышей является технически сложной задачей, это важный метод для изучения alloresponses. Практика и технические изменения привели к успешному составляет более 90% в нашей лаборатории. Мы считаем, что видео-и сопровождающие рукописи поможет уменьшить обучения для лабораторий, которые хотели бы использовать эту технику.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

References

  1. Corry, R. obert J., Winn, H. enry J., Russell, P. aul S. Primarily vascularized allografts of heart in mice. Transplantation. 16, 343-350 (1973).

Comments

23 Comments

  1. Hello Mr.Kang, My name is Vered Gigi and i am a graduste student in Israel for transplanted immunology. I am volunteering in a program (The NIR School of the Heart)  that expose young teenage student to the world of science, focusing on the cardiology field. As such i would love to show them this movie which is very nicely done. However, u was unable to download the movie. Is there a way that i can get the movie? Is it possible for you to e-mial me a copy for teaching porposes only? Thank you very much for your attention, Vered Gigi  my e-mail: vered.gigi@gmail.com

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 22, 2008 - 4:12 AM
  2. Hi, The video was produced by JOVE. We don’t have any copies. Sorry about that. Thank you very much for your interests.   Fengchun Liu

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 18, 2009 - 12:45 AM
  3. Dear Mr Kang, your video and technique is very interesting. I'm really interesting in getting also a copy of this video because I would like to perform this surgery. Please, could you please send me a copy of this video by email? if it is not possible, you can maybe send me it by normal mail. My email address is svielc07@gmail.com. Thanks a lot.   Maria

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2009 - 8:22 AM
  4. Hi there. Thank you for posting this video. Do you ever see paralysis of the hind end after this surgery? How about swelling of the hind feet? What is the maximum time for the vessels to be clamped or tied off?   Thank you for your time. Sheri

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 4, 2009 - 4:14 PM
  5. The maximum time for the vessels to be clamped is 40 minutes, the paralysis or swelling of the hind end may appear if the vessels are clamped over 40 minutes. Fengchun Liu

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 19, 2009 - 2:59 PM
  6. What a wonderful job well done!!! Highly admired your technique Dr. Liu!!!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 18, 2009 - 9:34 PM
  7. Thank you very much! This vedio is useful for me. I'm Li Zhoubin from Ruijin hospital, shanghai, China. jove.com is wonderful!!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 7, 2009 - 5:21 AM
  8. &#²1016;²769;&#²407²;: &#²4744;&#²²909;A²81;&#²5105;&#²9616;&#²²31²;&#²7491;&#²²31²;&#²0570;腹腔²²7;&#²6893;的&#²7169;&#²²411;A²9²;&#²59²8;&#²65²4;不&#²6159;&#²4456;&#²²909;A²9²;&#²1487;不&#²1487;&#²0197;&#²5²²6;&#²4744;的video&#²1457;²473;&#²5105;一&#²0²²1;&#²1834;A²9²;非&#²41²0;&#²4863;谢A²81; 谢艾&#²²958;  

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 5, 2009 - 8:27 AM
  9. Great job! Could you tell me the applicable mouse body weight in this transplant surgery? In the video, the mouse looked like 50 g big.
    Thank you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 30, 2009 - 12:16 PM
  10. Mice weights are ²5-30g. Thanks.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 30, 2009 - 1:22 PM
  11. Dear Dr. Kang,
    I enjoyed the procedure and watched it several times. My qyestion is regarding the instrument you were using as the needle holder. Can I know what that is, the brand and specifications?

    thanks,
    A. E. Nia

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 17, 2009 - 5:21 PM
  12. Thanks for the great procedure...My question for you is, what is the type of needle holder you are using? can I get the brand and specifications please...

    thanks
    A.E. Nia

    Reply
    Posted by: Abbas E.
    August 18, 2009 - 2:05 PM
  13. assi needle holder B-13-8. Thanks.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 18, 2009 - 7:41 PM
  14. Hello,
    Do you heparinize the recepient?
    In my experiments, teh transplanted heart dŒs not start beating...I am suspecting clot formation at the anastomosis site. I heparinize the donor with 0.1 hep plus 0.9 saline... Any thoughts?

    thanks
    Abb

    Reply
    Posted by: Reza N.
    September 18, 2009 - 7:22 PM
  15. We do not heparinize the recepient.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 20, 2010 - 12:31 PM
  16. Dr. Liu; Great job! I have two more question for you. Firstly, in the step 8 of your Donor Preparation and Heart Harvest, where do you perfuse heart using 4 Co saline solution? Secondly, is the 10-0 suture the nylon suture?
    Thanks a lot!
    Guangming
    gcheng@kumc.edu


    G

    Reply
    Posted by: Guangming C.
    May 19, 2010 - 1:08 AM
  17. Saline solution is injected into the aorta. The 10-0 sutures is nylon suture.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 20, 2010 - 12:29 PM
  18. Congratulations to this nice video. However I have a question.
    Can you explain why the heart is still beating quite normal at the end of the explant, if you performed a perfusion over the aorta.
    One would think that after a perfusion with cold saline a heart should stop beating.
    Cheers Werner

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 24, 2011 - 4:04 PM
  19. &#²1016;²769;&#²407²;:

    &#²4744;&#²²909;A²81;&#²4744;精&#²8²51;的&#²5²16;ഌ²;&#²0196;&#²0154;&#²5²40;&#²6381;A²9²;不知&#²6159;&#²154²;Ŋ²1;&#²4471;&#²1040;该#²70;频的邮&#²0²14;&#²6469;Ű²7;一&#²7493;&#²3398;&#²0064;?
    谢谢
    &#²647²;

    Reply
    Posted by: arthur y.
    December 22, 2012 - 12:27 AM
  20. Dr. Liu,

    Very decent surgical technique, great job! Just curious how long it will normally take to complete the whole surgical procedure for professional level guys like you? I haven't tried it, but I was informed that it is very time consuming.

    Jian Wu (B.M., M.S.)
    Ph.D Candidate in Biomedical Science (Cardiovascular & Metabolic Diseases Track)
    University of Toledo, College of Medicine and Life Sciences

    Reply
    Posted by: JIAN W.
    May 16, 2013 - 12:00 AM
  21. Impressive idea . but i found couple of things here:
    1- A narration would be very useful!
    2- Apparently sterility is not a goal of this surgery as i saw multiple violations
    3- Harvesting the donor heart takes long , Isn't it better to intubate the donor and have it ventilated during harvest?

    Reply
    Posted by: hadi j.
    March 20, 2014 - 5:47 PM
  22. thanks for your video, could you please tell what micro potts scissors you use for aortotomy and venotomy? as i need to get suitable scissors for my experiments. thanks

    Reply
    Posted by: Anne S.
    June 6, 2015 - 11:36 AM
  23. Dr. Liu,
    Your superb skill is very impressive! Amazing! Thank you for your video!
    But why should we post comment using in English? Would you please email me, we can communicate in Chinese, that would be wonderful! zzh24085@creighton.edu

    Reply
    Posted by: zefu z.
    June 10, 2016 - 4:32 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics