زرع الأمعاء الصغيرة في الفئران

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

وقد اعترف الماوس زرع الامعاء الصغيرة النموذج بوصفه أداة هامة لدراسة mechanismes الرفض المناعي والأدوية المثبطة للمناعة الشاشة الجديدة. ومع ذلك ، يقتصر هذا النموذج للاستخدام بسبب التقنيات المستخدمة يمثل تحديا تقنيا للغاية. الآن نقدم تقنية تعديلها.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Liu, F., Kang, S. Small Bowel Transplantation In Mice. J. Vis. Exp. (7), e258, doi:10.3791/258 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

منذ عام 1990 ، ساعد في تطوير تاكروليماس مقرها في كبت المناعة وتحسين التقنيات الجراحية ، وزيادة مجموعة الأدوية المثبطة للمناعة قوية ، واتقاء العدوى ، واختيار المريض المناسب تحسين طعم الاكتوارية ومعدلات بقاء المريض لجميع أنواع زرع الأمعاء. وينبغي الآن المرضى الذين يعانون من فشل معوي لا رجعة فيه ، ومضاعفات التغذية الوريدية تعتبر روتينية لزرع الأمعاء الدقيقة. ومع ذلك ، فإن معدلات البقاء على قيد الحياة لعملية زرع الامعاء الصغيرة كانت بطيئة لتحسين يقارن ايجابيا على نحو متزايد مع الكلى والكبد والقلب والرئة. زرع الأمعاء الدقيقة لا تزال غير مرضية بالمقارنة مع غيرها من الأجهزة. قد مزيد من التقدم يتوقف على فهم أفضل لعلم المناعة وعلم وظائف الأعضاء من الكسب غير المشروع ، ويمكن أن يسهل كثيرا من النماذج الحيوانية. وهناك حاجة إلى التوسع في استخدام الفأرة الصغيرة الامعاء نموذج زرع في دراسة علم المناعة وعلم وظائف الأعضاء لزرع الأمعاء وكذلك وسائل فعالة في تشخيص رفض في وقت مبكر. ومع ذلك ، يقتصر هذا النموذج للاستخدام بسبب التقنيات المستخدمة هي صعبة للغاية من الناحية التقنية. قمنا بتطوير تقنية تعديلها. عند اتخاذ مفاغرة من الوريد البابي والوريد الأجوف السفلي ، يتم إجراء الغرز اثنين في البقاء على قمة الدانية والقاصية من الوريد قمة المتلقي ليالي الوريد الأجوف السفلي مع الجهة المانحة ليالي المدخل. إغلاق الجدار الأيسر من الوريد الأجوف السفلي والوريد مع الجهات المانحة ليالي بوابة الخيوط المستمرة في داخل الوريد الأجوف السفلي بعد ، وبعد واحد مع بقاء عقدة قمة القريبة خياطة الجدار الأيمن من الوريد الأجوف السفلي وبوابة للمانحين ليالي يتم إغلاق الوريد مع استمرار الغرز خارج الكهف الوريد السفلي مع 10-0 الغرز. هذا الأسلوب الأسهل لتنفيذ لأن يتم مفاغرة فقط على جانب واحد من الوريد الأجوف السفلي والغرز 10-0 هو الحجم المناسب لتجنب النزيف والتجلط. في هذه المقالة ، ونحن نقدم تفاصيل هذه التقنية لاستكمال الفيديو.

Protocol

إعداد المانحة والأمعاء الصغيرة الحصاد :

  1. هو ansetheized الماوس مع حقن داخل الصفاق من مستلق بنتوباربيتال ووضعها في الحقل العملية.
  2. يتم إجراء شق البطن طويلة خط الوسط. يتم التعرف على القريب من الصائم وligated 6-0 مع الغرز. و تربط الأوعية المساريقي المرفقة القاصي إلى التعادل 8-0 مع الصائم الغرز.
  3. يتم التعرف على القاصي والدقاق وligated 6-0 مع الغرز. و تربط الأوعية المساريقي المرفقة القاصي إلى الدقاق 8-0 مع الغرز.
  4. ما يتعرض له بوابة من الدهون والأنسجة المحيطة المرفقة ، وقسمت ligated الأوردة البنكرياسية والطحال.
  5. يتعرض الشريان الأورطي في البطن وتعرض الشريان المساريقي العلوي من الأنسجة المحيطة بها.
  6. يتم حقن 1 مل من الهيبارين (10u/ml) في الوريد الأجوف السفلي للheparinization.
  7. ينقسم الوريد البابي في الكبد نقير ، وينقسم الشريان المساريقي العلوي من الشريان الأورطي ، بما في ذلك تصحيحا كاريل الأبهر.
  8. وتنقسم الصائم واللفائفي القاصي إلى العلاقات بين البلدين. تتم إزالة الأمعاء الصغيرة بأكملها ، ثم تخزينها في 4 درجات مئوية في محلول ملحي.

إعداد المتلقي وزرع :

  1. هو ansetheized الماوس مع حقن داخل الصفاق من مستلق بنتوباربيتال ووضعها في الحقل العملية.
  2. يتم إجراء شق البطن طويلة خط الوسط. وتراجع محتويات البطن خارج البطن بشاش لفضح الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي.
  3. يتعرض لها فروع الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي وligated مع 10-0 الغرز.
  4. يتم وضع رباط القريبة والبعيدة حول الأبهر والوريد الأجوف السفلي على التوالي.
  5. يتم إجراء فصد في الوريد الأجوف السفلي من المتلقي مع إبرة قياس 30. ثم تم تمديده لافتتاح بطول يساوي الوريد المتبرع المدخل الصغير مع المقص.
  6. يتم إجراء بضع الأبهر في الشريان الأورطي البطني للمتلقي مع إبرة قياس 30. ثم تم تمديده لافتتاح بطول يساوي التصحيح المتبرع المساريقي العلوي كاريل الشريان مع المقص الصغير
  7. وperfused الشقوق في الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي بمحلول ملحي.
  8. يتم وضع الامعاء المتبرع صغيرة على الجانب الأيسر من البطن المستلم تغطي بشاش.
  9. يتم وضع الغرز البقاء في ذروة الدانية والقاصية قمة الأبهر البطني مع المتلقي التصحيح المانحين المساريقي العلوي كاريل الشريان.
  10. الانتهاء من مفاغرة من الجانب الأيسر من الشريان الأورطي البطني المستلم والشريان المساريقي المانحين متفوقة التصحيح كاريل الأول مع استمرار الغرز.
  11. تصنع الخيوط البقاء الأولين في ذروة الدانية والقاصية من الوريد قمة المستلم الأجوف السفلي مع بوابة الجهة المانحة للمفاغرة من الوريد البابي والمانحين المستلم الوريد الأجوف السفلي.
  12. إغلاق الجدار الأيسر من الوريد الأجوف السفلي والوريد مع المانحين بوابة الخيوط المستمرة في داخل الوريد الأجوف السفلي.
  13. بعد أغلقت أحد عقدة مع خياطة قمة البقاء الداني ، والجدار الأيمن من الوريد الأجوف السفلي والوريد مع المانحين بوابة الغرز استمرار خارج الكهف الوريد السفلي.
  14. يتم تشغيل الأمعاء المانحة الصغيرة عبر إلى الجانب الأيمن من البطن المستلم. إغلاق جدار الشريان الأورطي حق المتلقي في البطن والجهة المانحة الشريان المساريقي العلوي مفاغرة مع الغرز متابعة.
  15. بعد بذل كل مفاغرة ، تتم إزالة ربطة القاصي أول من تحقق من نزيف من مفاغرة.
  16. إذا كان هناك نزيف ضئيلة أو معدومة من مفاغرة إزالة ربطة القريبة. يملأ المتبرع الامعاء الصغيرة مع دم على الفور ، واللون من الامعاء الصغيرة تصبح حمراء.
  17. هو anastomosed نهاية اللفائفي القاصي من الكسب غير المشروع نهاية إلى جانب إلى الجزء القريب من الصائم المستلم مع خياطة الغرز المستمر 8-0.
  18. هو exteriorized الصائم القريبة من المانحين كملف. ستوما والمضمون على الجلد في الجانب الأيسر من جدار البطن مع أربعة خيوط كل جانب من الغرز 8-0
  19. يتم إرجاع الأمعاء إلى تجويف البطن ومغلقة مع الغرز مواصلة 6-0.
  20. يتم وضع الماوس المتلقي على مساحة دافئة. بعد ساعة واحدة ، والمستلم للشفاء.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

وقد كانت استجابة مناعية فريدة من نوعها بعد زرع الامعاء الصغيرة موضوع بحث واسعة النطاق باستخدام نموذج صغير زرع الأمعاء في الفئران. ردود الفعل المناعية الأساسية ، مثل الطعم ضد ردود فعل المعنيين ، المضيف مقابل الكسب غير المشروع للرد ، وهو مزيج من الرفض وردود الفعل على حد سواء المزمنة والتسامح كان لديك. وقد تم اختبار جميع وكلاء تقريبا مناعة السريرية ذات الصلة ثبت أو المحتملة لفعاليتها في الامعاء الصغيرة نموذج الزرع.

تعديل نحن الماوس تقنية زرع الأمعاء الدقيقة في عدة طرق لتحسين الكفاءة ومعدلات النجاح :

  1. ينبغي على الجهات المانحة داخل الامعاء الصغيرة يمكن حفظ واضحة وليس أي براز اليسار.
  2. ينبغي تقسيم حافة التصحيح كاريل الشريان الأبهر من المساريقي العلوي حجم السلس وعلى قدم المساواة مع فتح الشريان الأورطي البطني المستلم.
  3. لا يلوي الوريد البابي مع الشريان المساريقي العلوي عندما anastomoses في الوريد البابي والوريد الأجوف السفلي المستلم. لأن المدخل هو أطول من الوريد الشريان المساريقي العلوي.
  4. ينبغي أن توضع في الأمعاء الصغيرة في منتصف البطن وإبقاء الشريان المساريقي العلوي والوريد البابي في التوتر المناسب عند إعادة الدورة الدموية لتجنب تجلط الدم.
  5. ينبغي أن يكون الشريان المساريقي العلوي إبقاء التوتر السليم عندما الامعاء الصغيرة المضيف عاد الى تجويف البطن لتجنب تجلط الدم بعد إغلاق البطن.
  6. يتم ترك 0.1 مل cefuroxine (20mg/kg) في تجويف البطن لتجنب العدوى قبل أن يغلق في البطن.
  7. للتأكد من عدم السماح للتدفق البراز في النشاط البطن عند تنفيذ مفاغرة الأمعاء الدقيقة لتجنب العدوى بعد العملية.
  8. لا ضرر في الأوعية المساريقي عند الحصاد الأمعاء الدقيقة لتجنب نخر الامعاء الصغيرة بعد العملية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Sutures 10-0 and 11-0 MONOSOF
Microscope Unversal S3 Carl Zeiss, Inc.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. SJ, M. iddleleton Is intestinal transplantation now an alternative to home parenteral nutrition. Proc Nutr Soc. 66, (3), 316-320 (2007).
  2. Lopez Santamaria, M., Hernadez Oliveros, F. Indications, techniques, and outcomes of small bowel transplant. Nutr Hosp. 22, Suppl 2. 113-123 (2007).
  3. Grant, D. Current results of intestinal transplantation. The International Intestinal Transplant Registry. Lancet. 347, (9018), 1801-1803 (1996).
  4. Timmermann, W., Gasser, M., Meyer, D., Kellersmann, R., Gassel, H. J., Otto, C., Thiede, A. Progress in experimental intestinal transplantation in small animal models. Acta Gastroenterol Belg. 62, (2), 216-220 (1999).

Comments

1 Comment

  1. Hi
    Dr Fengchun Liu
    Congratulations for excellent video.
    I am from Brazil and I fellow in University in São Paulo.
    I started my trainning small bowell transplantation in mice. Now it is third transplantation, your video it is much important for trainining.
    Thank´s

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 14, 2010 - 9:23 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics