चूहों में लघु आंत्र ट्रांसप्लांटेशन

Biology

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Summary

माउस छोटी आंत प्रत्यारोपण मॉडल प्रतिरक्षा अस्वीकृति और स्क्रीन नए immunosuppressive दवाओं के mechanismes अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण के रूप में पहचाना गया है. हालांकि, इस मॉडल का उपयोग करने के लिए सीमित है क्योंकि शामिल तकनीकों एक अत्यंत तकनीकी चुनौती है. अब हम संशोधित तकनीक परिचय.

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Liu, F., Kang, S. Small Bowel Transplantation In Mice. J. Vis. Exp. (7), e258, doi:10.3791/258 (2007).

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Abstract

1990 के बाद से, tacrolimus आधारित प्रतिरक्षादमन और सुधार शल्य चिकित्सा तकनीक, शक्तिशाली immunosuppressive दवाओं की वृद्धि हुई सरणी, संक्रमण प्रोफिलैक्सिस, और उपयुक्त रोगी चयन के विकास में मदद बीमांकिक और आंत प्रत्यारोपण के सभी प्रकार के लिए भ्रष्टाचार रोगी जीवित रहने की दरों में सुधार. अपरिवर्तनीय आंतों और parenteral पोषण की विफलता जटिलताओं के साथ मरीजों को अब नियमित रूप से छोटी आंत प्रत्यारोपण के लिए विचार किया जाना चाहिए. हालांकि, छोटे से आंत्र प्रत्यारोपण के लिए जीवित रहने की दर में सुधार करने के लिए धीमी गति से किया गया है, गुर्दे, जिगर, दिल और फेफड़ों के साथ तेजी से कृपापूर्वक तुलना. छोटी आंत प्रत्यारोपण अभी भी असंतोषजनक अन्य अंगों के साथ तुलना में. आगे की प्रगति इम्यूनोलॉजी और भ्रष्टाचार के शरीर क्रिया विज्ञान की बेहतर समझ पर निर्भर करती है और बहुत से पशु मॉडल द्वारा सुविधा कर सकते हैं हो सकता है. माउस छोटी आंत प्रत्यारोपण मॉडल की एक व्यापक उपयोग के प्रत्यारोपण पेट की इम्यूनोलॉजी और शरीर विज्ञान के अध्ययन के रूप में अच्छी तरह के रूप में जल्दी अस्वीकृति निदान में कुशल तरीके में की जरूरत है. हालांकि, इस मॉडल का उपयोग करने के लिए सीमित है क्योंकि शामिल तकनीकों एक अत्यंत तकनीकी चुनौतीपूर्ण है. हम एक संशोधित तकनीक विकसित की है. जब पोर्टल शिरा और अवर रग Cava के सम्मिलन बनाने, दो प्रवास sutures के प्रॉक्सिमल और दाता पोर्टल शिरा के साथ प्राप्तकर्ता अवर रग Cava के बाहर सुप्रीम शीर्ष पर बना रहे हैं. अवर रग Cava और दाता पोर्टल शिरा के बाईं दीवार अवर रग Cava के अंदर में जारी sutures के साथ बंद कर दिया है के बाद, प्रॉक्सिमल सुप्रीम प्रवास के साथ एक गाँठ के बाद अवर रग Cava की सही दीवार और दाता पोर्टल की सीवन है नस 10-0 sutures के साथ अवर रग गुफा के बाहर जारी sutures के साथ बंद हो जाती हैं. इस विधि प्रदर्शन करने में आसान है क्योंकि सम्मिलन अवर रग Cava और 10-0 sutures के एक तरफ बस किया जाता है सही करने के लिए खून बह रहा है और घनास्त्रता से बचने के आकार है. इस अनुच्छेद में, हम वीडियो पूरक करने के लिए तकनीक का विवरण प्रदान करते हैं.

Protocol

दाता तैयारी और छोटी आंत फसल:

  1. माउस आपरेशन मैदान पर एक pentobarbital और रखा ढालुआं की intraperitoneal इंजेक्शन के साथ ansetheized है.
  2. एक लंबे midline पेट चीरा किया जाता है. सूखेपन की प्रॉक्सिमल पहचान है और 6-0 sutures के साथ ligated. संलग्न mesenteric सूखेपन टाई करने के लिए बाहर का बर्तन 8-0 sutures के साथ ligated हैं.
  3. ileum के बाहर की पहचान की और 6-0 sutures के साथ ligated. 8-0 sutures के साथ संलग्न mesenteric ileum के लिए बाहर का वाहिकाओं ligated हैं.
  4. पोर्टल के आसपास वसा और संलग्न ऊतकों से अवगत कराया है, ligated और pancreaticoduodenal और प्लीहा - संबंधी नसों विभाजित.
  5. पेट महाधमनी अवगत कराया है और आसपास के ऊतकों से बेहतर mesenteric धमनी उजागर.
  6. हेपरिन (10u/ml) के 1 मिलीलीटर heparinization के लिए अवर रग Cava में अंतःक्षिप्त है.
  7. पोर्टल शिरा जिगर की hilum में विभाजित है, और बेहतर mesenteric धमनी महाधमनी के एक Carrel पैच सहित महाधमनी, से विभाजित है.
  8. सूखेपन और ileum संबंधों को बाहर का विभाजित हैं. पूरे छोटी आंत निकाल दिया जाता है, तो 4 डिग्री सेल्सियस नमकीन घोल में संग्रहीत.

प्राप्तकर्ता तैयारी और प्रत्यारोपण:

  1. माउस आपरेशन मैदान पर एक pentobarbital और रखा ढालुआं की intraperitoneal इंजेक्शन के साथ ansetheized है.
  2. एक लंबे midline पेट चीरा किया जाता है. पेट सामग्री पेट महाधमनी और अवर रग Cava का पर्दाफाश करने के लिए धुंध के साथ पेट के बाहर से मुकर रहे हैं.
  3. पेट महाधमनी और अवर रग Cava की शाखाओं को उजागर कर रहे हैं और 10-0 sutures के साथ ligated.
  4. प्रॉक्सिमल और डिस्टल संयुक्ताक्षर महाधमनी और अवर रग Cava क्रमशः के आसपास रखा गया है.
  5. venotomy एक 30 गेज सुई के साथ प्राप्तकर्ता के अवर रग Cava में किया जाता है. खोलने तब के एक दाता सूक्ष्म कैंची के साथ पोर्टल शिरा के बराबर लंबाई के लिए बढ़ाया है.
  6. aortotomy एक 30 गेज सुई के साथ प्राप्तकर्ता के उदर महाधमनी में किया जाता है. खोलने तब की लंबाई दाता बेहतर mesenteric धमनी Carrel सूक्ष्म कैंची के साथ पैच करने के लिए बराबर के लिए बढ़ाया है
  7. पेट महाधमनी और अवर रग Cava के चीरों नमकीन घोल के साथ perfused हैं.
  8. दाता की छोटी आंत प्राप्तकर्ता धुंध के साथ कवर पेट के बाईं ओर पर रखा गया है.
  9. प्रवास sutures के प्रॉक्सिमल सर्वोच्च और प्राप्तकर्ता दाता बेहतर mesenteric धमनी Carrel पैच के साथ पेट महाधमनी के बाहर सुप्रीम पर रखा जाता है.
  10. प्राप्तकर्ता पेट महाधमनी और दाता बेहतर mesenteric धमनी Carrel पैच के दाईं ओर के सम्मिलन पहले जारी sutures के साथ पूरा कर रहे हैं.
  11. पहले दो प्रवास sutures के प्रॉक्सिमल और दाता पोर्टल शिरा और प्राप्तकर्ता के अवर रग Cava के सम्मिलन के लिए दाता पोर्टल के साथ प्राप्तकर्ता अवर रग Cava के बाहर सुप्रीम शीर्ष पर बना रहे हैं.
  12. अवर रग Cava और दाता पोर्टल शिरा के बाईं दीवार अवर रग Cava के अंदर जारी sutures के साथ बंद कर दिया है.
  13. बाद प्रॉक्सिमल सुप्रीम प्रवास सीवन, अवर रग Cava की सही दीवार और दाता के पोर्टल शिरा के साथ एक गाँठ अवर रग गुफा के बाहर जारी sutures के साथ बंद कर दिया है.
  14. दाता की छोटी आंत से अधिक प्राप्तकर्ता के पेट के दाईं ओर के लिए चालू है. प्राप्तकर्ता पेट महाधमनी और दाता बेहतर mesenteric धमनी सम्मिलन का सही दीवार जारी रखने के sutures के साथ बंद कर दिया है.
  15. आखिर सम्मिलन किया जाता है, बाहर का संयुक्ताक्षर के सम्मिलन से खून बह रहा की जांच पहले हटा दिया जाता है.
  16. अगर वहाँ सम्मिलन से कम या कोई खून बह रहा है प्रॉक्सिमल संयुक्ताक्षर निकाल दिया जाता है. दाता की छोटी आंत खून से भर जाता है तुरंत, छोटी आंत का रंग लाल हो जाता है.
  17. भ्रष्टाचार ileum के बाहर का अंत 8-0 sutures के सतत सीवन के साथ अंत करने के लिए साइड प्राप्तकर्ता सूखेपन के प्रॉक्सिमल भाग anastomosed है.
  18. दाता के प्रॉक्सिमल सूखेपन के रूप exteriorized है एक stoma और चार 8-0 sutures के प्रत्येक पक्ष sutures के साथ पेट की दीवार के सही पक्ष पर त्वचा के लिए सुरक्षित है.
  19. आँतों को उदर गुहा के लिए लौट रहे हैं और 6-0 जारी रखने के sutures के साथ बंद.
  20. प्राप्तकर्ता माउस गर्म क्षेत्र पर रखा गया है. एक घंटे के बाद, प्राप्तकर्ता ठीक हो जाए.

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Discussion

छोटी आंत प्रत्यारोपण के बाद अद्वितीय प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया व्यापक चूहों में छोटी आंत प्रत्यारोपण मॉडल का उपयोग कर अनुसंधान का विषय किया गया है. बुनियादी प्रतिरक्षाविज्ञानी प्रतिक्रियाओं, जैसे भ्रष्टाचार बनाम प्रतिक्रियाओं, मेजबान बनाम भ्रष्टाचार प्रतिक्रिया, दोनों प्रतिक्रियाओं, पुरानी अस्वीकृति और सहिष्णुता का एक संयोजन शामिल किया गया है. सिद्ध या संभावित नैदानिक ​​प्रासंगिकता के लगभग सभी immunosuppressive एजेंटों छोटी आंत प्रत्यारोपण मॉडल में उनकी प्रभावकारिता के लिए परीक्षण किया गया है.

हम दक्षता और सफलता दर को बेहतर बनाने के कई तरीके में माउस छोटी आंत प्रत्यारोपण तकनीक संशोधित:

  1. दाता की छोटी आंत के अंदर साफ है और कोई भी किसी भी छोड़ दिया मल रखते हुए किया जाना चाहिए.
  2. बेहतर mesenteric धमनी की महाधमनी के Carrel पैच के किनारे प्राप्तकर्ता के उदर महाधमनी के उद्घाटन के साथ चिकनी और बराबर आकार विभाजित करना चाहिए.
  3. बेहतर mesenteric धमनी के साथ पोर्टल शिरा जब प्राप्तकर्ता के अवर रग Cava साथ पोर्टल नस anastomoses मोड़ मत करो. क्योंकि पोर्टल शिरा बेहतर mesenteric धमनी की तुलना में अब है.
  4. छोटी आंत पेट के बीच रखा जाना चाहिए और उचित तनाव में बेहतर mesenteric धमनी और पोर्टल शिरा रखना जब रक्त परिसंचरण के पुनर्निर्माण के लिए घनास्त्रता से बचने.
  5. बेहतर mesenteric धमनी उचित तनाव रखने के लिए किया जाना चाहिए जब मेजबान छोटी आंत पेट गुहा में लौटे पेट समापन के बाद घनास्त्रता से बचने.
  6. 0.1 मिलीलीटर cefuroxine (20mg/kg) उदर गुहा में छोड़ दिया जाता है पेट को बंद करने से पहले संक्रमण से बचने के लिए.
  7. सुनिश्चित हो पेट गतिविधि में मल प्रवाह नहीं जब छोटी आंत सम्मिलन प्रदर्शन के ऑपरेशन के बाद संक्रमण से बचने के.
  8. जब छोटे से आपरेशन के बाद छोटी आंत परिगलन से बचने आंत्र कटाई mesenteric वाहिकाओं को नुकसान मत करो.

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Sutures 10-0 and 11-0 MONOSOF
Microscope Unversal S3 Carl Zeiss, Inc.

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References

  1. SJ, M. iddleleton Is intestinal transplantation now an alternative to home parenteral nutrition. Proc Nutr Soc. 66, (3), 316-320 (2007).
  2. Lopez Santamaria, M., Hernadez Oliveros, F. Indications, techniques, and outcomes of small bowel transplant. Nutr Hosp. 22, Suppl 2. 113-123 (2007).
  3. Grant, D. Current results of intestinal transplantation. The International Intestinal Transplant Registry. Lancet. 347, (9018), 1801-1803 (1996).
  4. Timmermann, W., Gasser, M., Meyer, D., Kellersmann, R., Gassel, H. J., Otto, C., Thiede, A. Progress in experimental intestinal transplantation in small animal models. Acta Gastroenterol Belg. 62, (2), 216-220 (1999).

Comments

1 Comment

  1. Hi
    Dr Fengchun Liu
    Congratulations for excellent video.
    I am from Brazil and I fellow in University in São Paulo.
    I started my trainning small bowell transplantation in mice. Now it is third transplantation, your video it is much important for trainining.
    Thank´s

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 14, 2010 - 9:23 PM

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