マウスにおける小腸移植

Biology

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Summary

マウス小腸移植モデルは、免疫拒絶反応や画面​​新しい免疫抑制剤のmechanismesを研究するための重要なツールとして認識されている。しかし、このモデルは、関係する技術は非常に技術的な課題であるため、使用に制限されています。今は修正されたテクニックを紹介。

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Liu, F., Kang, S. Small Bowel Transplantation In Mice. J. Vis. Exp. (7), e258, doi:10.3791/258 (2007).

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Abstract

1990年以来、タクロリムスベースの免疫抑制と改善された手術手技の開発は、強力な免疫抑制薬、感染症の予防、および適切な患者選択の増加配列は、小腸移植のすべてのタイプの保険数理上の移植と患者の生存率を改善した。非経口栄養の不可逆的な腸の障害と合併症の患者は現在、日常的に小腸の移植を考慮すべきである。しかし、小腸移植の生存率は、腎、肝臓、心臓や肺にますます好意的に比較して改善が遅れている。小腸移植は他の臓器に比べて、まだ不十分である。さらなる進歩は、移植片の免疫学と生理学のより良い理解に依存するかもしれませんし、大幅に動物モデルによって促進することができます。マウス小腸移植モデルの普及は、移植腸管の免疫学および生理学の研究だけでなく、早期の拒絶反応の診断に効果的な方法で必要とされる。しかし、このモデルは、関係する技術は非常に技術的に困難であるため、使用に制限されています。我々は、修正された技術を開発した。門脈と下大静脈の吻合を作るとき、2つの滞在の縫合糸は、ドナーの門脈との近心尖部と受信者の下大静脈の遠位頂点に作られています。下大静脈とドナーの門脈の左側壁には、近位頂点の滞在ワン結び目が下大静脈とドナーのポータルの右の壁を縫合した後、後に下大静脈の内部で継続的な縫合で閉じられます静脈は、10から0縫合糸と下大静脈の洞窟外で継続的な縫合で閉鎖されています。吻合がちょうど下大静脈の片側と10〜0縫合糸で作られているため、このメソッドは実行する方が簡単です出血と血栓症を避けるために右のサイズです。この記事では、我々はビデオを補うための手法の詳細を提供。

Protocol

ドナーの準備と小腸の収穫:

  1. マウスは、操作のフィールド上にペントバルビタールと置か仰臥位の腹腔内注射でansetheizedている。
  2. 長い正中腹部切開が行われます。空腸の近位が同定され、6から0縫合糸で結紮されています。空腸のタイへの遠位接続された腸間膜の血管が8から0縫合糸と連結されています。
  3. 回腸の遠位が同定され、6から0縫合糸で結紮されています。回腸遠位に添付された腸間膜の血管が8から0縫合糸と連結されています。
  4. ポータルは、周囲の脂肪および添付の組織から露出して連結し、膵と脾静脈が分かれています。
  5. 腹部大動脈を露出し、周囲の組織から上腸間膜動脈を露出している。
  6. ヘパリン(10u/ml)1 mlをヘパリン化のための下大静脈に注入される。
  7. 門脈は肝臓の門に分かれており、上腸間膜動脈は大動脈のカレルのパッチを含め、大動脈から分かれています。
  8. 空腸と回腸は、タイへの遠位分かれています。全体小腸が削除され、その後° C生理食塩水にて保存。

受信者の準備と移植:

  1. マウスは、操作のフィールド上にペントバルビタールと置か仰臥位の腹腔内注射でansetheizedている。
  2. 長い正中腹部切開が行われます。腹部の内容が腹部大動脈と下大静脈を露出してガーゼで腹部の外に退避されています。
  3. 腹部大動脈と下大静脈の枝を露出し、10から0縫合糸で結紮されています。
  4. 近位および遠合字は、それぞれ大動脈と下大静脈の周囲に配置されます。
  5. 静脈切開術は、30ゲージの針を持つ受信者の下大静脈に行われます。開口部はその後、マイクロはさみとドナーの門脈に等しいの長さに拡張されます。
  6. 大動脈切開は、30ゲージの針を持つ受信者の腹部大動脈で作られています。開口部はその後、マイクロはさみでドナーの上腸間膜動脈のカレルのパッチと同等の長さに拡張されます
  7. 腹部大動脈と下大静脈の切開を食塩水で灌流されています。
  8. ドナーの小腸は、ガーゼで覆い、受信者の腹部の左側に配置されます。
  9. 滞在の縫合糸は、近位頂点とドナーの腸間膜動脈のカレルのパッチと受信者腹部大動脈の遠位頂点に配置されます。
  10. 受信者の腹部大動脈とドナーの腸間膜動脈のカレルのパッチの右側の吻合は、継続的な縫合糸を最初に完了されています。
  11. 二つの滞在の縫合糸は、ドナーの門脈とレシピエントの下大静脈の吻合のためのドナーのポータルとの近心尖部と受信者の下大静脈の遠位頂点で最初に作られています。
  12. 下大静脈とドナーの門脈の左側壁には、下大静脈の内部で継続的な縫合で閉じられます。
  13. 後に近位頂点の滞在の縫合糸、下大静脈の右側の壁とドナーの門脈ワン結び目は、下大静脈の洞窟外で継続的な縫合で閉じられます。
  14. ドナーの小腸は、受信者の腹部の右側に引き渡される。受信者の腹部大動脈とドナーの腸間膜動脈の吻合の右側の壁は、継続の縫合で閉じられます。
  15. すべての吻合が行われた後、遠合字は、吻合からの出血を確認するために最初に削除されます。
  16. 吻合からほとんど、あるいは全く出血がある場合は近位の合字は削除されます。ドナーの小腸は、すぐに血液で満たされて、小腸の色が赤になります。
  17. 移植回腸の遠位端は、8から0縫合糸の連続縫合で、受信者の空腸の近位部に端側に吻合される。
  18. ドナーの近位空腸は、4つの縫合糸8から0縫合糸の両側と腹壁の右側にストーマと皮膚に固定として体外れる。
  19. 腸が腹腔内に戻り、6から0までのcontinue縫合で閉鎖されています。
  20. レシピエントマウスは、暖かい地域に配置されます。一時間後に、受信者が回復します。

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Discussion

小腸移植後のユニークな免疫応答は、マウスでは小腸移植モデルを用いた大規模な調査の対象とされている。このような移植片対反応、宿主対移植片反応、反応、慢性拒絶反応と耐性の両方の組み合わせが関与しているなどの基本的な免疫反応、。実績のある又は潜在的な臨床的関連性のほとんどすべての免疫抑制剤は、小腸移植モデルにおけるそれらの有効性について試験されている。

我々は、効率と成功率を向上させるためにいくつかの方法でマウスの小腸移植の手法を変更:

  1. ドナーの小腸の内側には、左にはっきりとせず、任意の糞を保持する必要があります。
  2. 上腸間膜動脈の大動脈のカレルのパッチのエッジは、受信者の腹部大動脈の開口部にスムーズと同じサイズを分割する必要があります。
  3. 受信者の下大静脈と門脈を吻合上腸間膜動脈と門脈をねじってはいけません。ポータルは、上腸間膜動脈よりも静脈長くなりますので。
  4. 小腸は、腹部の真ん中に配置され、血栓症を避けるために、血液の循環を構築するときに適切な張力で上腸間膜動脈と門脈を維​​持する必要があります。
  5. 上腸間膜動脈は、ホスト小腸が腹部を閉じた後に血栓症を避けるために、腹部の空洞に戻されたときに適切なテンションを維持する必要があります。
  6. 0.1ミリリットルcefuroxine(20mg/kg)は腹部を閉じる前に感染を避けるために、腹部の空洞内に残されます。
  7. 手術後感染を避けるために、小腸の吻合を行う際に確認するためには、腹部の活動への糞便の流れをさせてください。
  8. 操作の後に小腸壊死を回避するために小腸を収穫するときに腸間膜血管を損傷しないでください。

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Sutures 10-0 and 11-0 MONOSOF
Microscope Unversal S3 Carl Zeiss, Inc.

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References

  1. SJ, M. iddleleton Is intestinal transplantation now an alternative to home parenteral nutrition. Proc Nutr Soc. 66, (3), 316-320 (2007).
  2. Lopez Santamaria, M., Hernadez Oliveros, F. Indications, techniques, and outcomes of small bowel transplant. Nutr Hosp. 22, Suppl 2. 113-123 (2007).
  3. Grant, D. Current results of intestinal transplantation. The International Intestinal Transplant Registry. Lancet. 347, (9018), 1801-1803 (1996).
  4. Timmermann, W., Gasser, M., Meyer, D., Kellersmann, R., Gassel, H. J., Otto, C., Thiede, A. Progress in experimental intestinal transplantation in small animal models. Acta Gastroenterol Belg. 62, (2), 216-220 (1999).

Comments

1 Comment

  1. Hi
    Dr Fengchun Liu
    Congratulations for excellent video.
    I am from Brazil and I fellow in University in São Paulo.
    I started my trainning small bowell transplantation in mice. Now it is third transplantation, your video it is much important for trainining.
    Thank´s

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 14, 2010 - 9:23 PM

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