基于荧光测定活细胞中的钙进入商店经营:从培养的肿瘤细胞,骨骼肌纤维

Biology
 

Summary

店经营CA的程度

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Pan, Z., Zhao, X., Brotto, M. Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber. J. Vis. Exp. (60), e3415, doi:10.3791/3415 (2012).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

商店经营的Ca 2 +进入(SOCE),早期称为库容的Ca 2 +进入,是一个涌入细胞外Ca 2 +进入细胞,以补充枯竭的内质网(ER)或肌浆网(SR)的Ca 2 +商店严格监管机制1,2。由于离子是一种普遍存在的第二信使,它是不奇怪,SOCE多种细胞过程中起着重要的作用,包括增殖,凋亡,基因转录和运动。由于其广泛发生在几乎所有类型的细胞,包括上皮细胞和骨骼肌,这一途径已得到极大的兴趣3,4。然而,在不同类型的细胞和生理功能的SOCE特征的异质性仍然不明确5-7。

SOCE功能的通道特性可以发现,而大量的知识约氏体膜片钳研究基于荧光的细胞内离子的测量,因为它的方便和高通量筛选的可行性已经获得人生道路。本报告的目的是总结了一些基于荧光的方法来衡量SOCE在单层细胞,悬浮细胞和肌纤维5,8-10激活。最常使用这些荧光的方法是直接动态监测胞内Ca 2 +使用的F 340nm的发射波长(510 nm)的比例的Ca 2 +荧光浓度指示剂fura-2和F 380nm的比例。隔离开来单向SOCE活性细胞内Ca 2 +释放和Ca 2 +挤压,常用的Mn 2 +淬火法。锰2 +被称为是能够渗透到细胞通过SOCE,而这是防渗膜表面的挤压过程,或雌激素受体 ​​摄取钙+泵由于其非常高的亲和力机智ĤFURA-2。因此,外锰2 +进入细胞诱导的Fura-2荧光猝灭SOCE 9测量的活动。可以进行比率测量和Mn +2淬火检测细胞的人口模式,或在显微镜为基础的系统,以可视化的单细胞在试管基于分光光度计。单细胞测量的优点是可以选择使用GFP或RFP的记者,让转基因或突变的细胞研究,基因操作的单个细胞。 SOCE结构专门骨骼肌中的时空特征,可以实现皮肤的肌纤维,同时监测两个低亲和力荧光FLUO-5N,如肌纤维中的SR和具体的车厢有针对性地+指标Rhod 5N在横管9,11,12。

Protocol

1。细胞内Ca 2 +测量单个细胞

  1. KYSE-150,一个人食管鳞状细胞癌(ECSS)细胞株培养在5%CO 2的气氛,在37°C的混合的RPMI 1640/Ham的F-12培养基(1:1),含5%胎牛血清。
  2. KYSE-150细胞转染质粒或者含有shRNA的专门针对Orai1或炒序列。质粒基因编码作为记者,这是由一个独立的启动子驱动的红色荧光蛋白(RFP),还包括。
  3. 细胞生长在玻璃底菜(第1.5玻璃盖,MatTek,马)48小时。
  4. 取出介质和冲洗细胞,用平衡盐溶液(BSS)(140毫米氯化钠,氯化钾2.8毫米,2毫米氯化钙2,MgCl 2的 2毫米,10毫米肝素钠,pH值7.2)。
  5. 加入1毫升的BSS解决方案,包含2微米的Fura-2乙酰酯(分子探针)入菜,并用铝箔纸包裹,整道菜蛋白酶CT光。
  6. 在37°C孵育40分钟的细胞,然后离开他们在室温下为一个额外的15分钟内让酯水解完成。与BSS洗涤细胞两次。
  7. 装入菜尼康TE200倒置显微镜,它是连接公共交通交汇处分光光度计激发波长,在350和390 nm和510 nm处的发射阶段。要使用的确切的激发波长可以略有不同取决于各个系统的光学。确定最佳比例动态两个波长激发频谱扫描的Fura-2盐中含有的Ca 2 +从0到39.8μM(或更高浓度的Fura-2荧光饱和)的解决方案。
  8. 成立了4个不同的解决方案在BSS重力灌注系统的Ca 2 +(2毫米),EGTA(0.5毫米),EGTA-TG(毒胡萝卜素,5μM)的Ca 2 +-2-建业(SOCE抑制剂“,75 μM)计算机控制的自动化perfusi系统上也可以使用。
  9. 选择细胞表达RFP的可视化模式。
  10. 定位在10倍放大倍率的灌注系统启用提示,直到针尖以上地区的利益是在45度角。
  11. 同时记录的F 为350nm和F 390nm荧光信号。比(F 为350nm / F 390nm)显示,在第三个窗口。更改灌注以下顺序的解决方案的Ca 2 +; EGTA的Ca 2 + EGTA-TG的Ca 2 +的Ca 2 +-2-建业。

上述协议可以修改为测量细胞内Ca 2 +在细胞悬液系统。

  1. 文化KYSE-150细胞在与上述相同的培养条件下的T25瓶。
  2. 当细胞达到90%汇合,除去介质和冲洗细胞与BSS解决方案。
  3. 添加2.5毫升含2微米的Fura-2 AM和孵化的BSS解决方案细胞40分钟,在37°C间跟着脱酯化。
  4. 删除的BSS,添加2.5毫升胰蛋白酶在37°C,直到细胞分离到烧瓶,并培育。再加入2.5毫升培养基停止胰蛋白酶和收获的细胞,在800转离心5分钟。
  5. 离心洗更多的时间与培养基中的细胞重新悬浮颗粒细胞的BSS解决方案(不加2毫米氯化钙2,含有μm范围内的Ca 2 +)和计数细胞使用hematometer数。
  6. 加入到石英比色皿(10毫米,Starna细胞)〜10 6细胞和填充量高达2毫升与BSS。
  7. 放入分光光度计试管(与磁棒搅拌)。
  8. 同时记录与发射波长在510 nm处的F 340nm的和F 380nm的荧光信号。正在运行的协议是:BSS的,除了0.5μLEGTA(0.25M股票),另外1μL毒胡萝卜素(甘油三酯(TG),10毫米股票),另外4μL的Ca 2 +(1米股票)。

2。培养细胞中的锰淬火法

  1. 执行的Fura-2激发波长扫描解决方案,包含不同的Ca 2 +浓度范围从0到39.8微米,以确定钙离子浓度等色点的独立波长。通常情况下,等色点或360纳米左右。
  2. KYSE-150细胞培养在玻璃底部的菜肴和加载的Fura-2 AM。
  3. 成立灌注系统:与5个不同的BSS解决方案的Ca 2 +(2毫米),EGTA /易性癖(0.5毫米和5μm,分别),锰2 +(0.5毫米,不加EGTA或离子含有游离的Ca 2 +在μm范围内),锰2 + / 2-APB(75μM),EGTA /剂Triton X-100(0.1%)。
  4. 装载显微镜阶段的菜,然后选择“激励比”模式,激发波长为360 nm和390 nm,发射,在510纳米。
  5. 同时记录的F比390nm360nm处和F(F 360nm处 / F 390nm)在第三个窗口显示的荧光信号。正在运行的协议是:1分钟的Ca 2 +稳定的荧光, 锰+ 30秒,10分钟,锰EGTA /易性癖2 + 2分钟,EGTA海卫X-100的(0.1%),持续1分钟获得的背景读数。可用于锰2 + / 2,建业解决方案,而不是对Mn 2 +检查取消的荧光猝灭,这表明了Mn 2 +入门SOCE途径是通过。

3。在肌肉细胞中的锰淬火法

  1. C2C12细胞,小鼠肌细胞线,是在37°C的DMEM含10%胎牛血清,10%马血清的培养基培养玻璃底菜在5%CO 2气氛。
  2. 细胞达到汇合后,改变培养基分化培养基(除去胎牛血清和减少é马血清2.5%)。后4天,C2C12细胞分化成肌管。
  3. 加载C2C12肌管与5μM终浓度的Fura-2上午在1.4-1.6。
  4. 添加终浓度为20μM的N-苄基-P-甲苯磺酰胺(BTS),来抑制肌肉收缩和运动造成的工件,并允许在开始实验前15分钟。
  5. 交汇处的设备连接到显微镜的舞台上安装盘和灌注系统装入以下BSS解决方案:2的Ca 2 +(2毫米),0的Ca 2 +,2 +(0.5毫米);锰2 + / TG(0.5毫米,20μM,分别)。
  6. 成立如上所述灌注系统。
  7. 在第三个窗口中显示的比率(F 360nm处 / F 390nm),同时记录的F 360nm处和F 390nm荧光信号。正在运行的协议是:2的Ca 2 + 1分,0的Ca 2 + 1分钟FLUSH距离的Ca 2 +,2 +为0.5分钟,锰2 + / 10分钟,和Mn 2 TG + / EGTA的Triton X-100(0.1%)。

4。空间和时间上解决皮肤肌纤维SOCE

  1. 准备以下的解决方案。
    等渗缓冲台氏:140毫米氯化钠,氯化钾5毫米,10毫米的肝素钠,MgCl 2的 2毫米,2.5毫米氯化钙2,pH值7.2,290 mosm
    培养基:2%和1%的马血清青霉素,链霉素的DMEM培养液
    解决方案#1:109.6毫米的K-谷氨酸, 洗净 2毫米EGTA氢氧化钾,6.7毫米MgCl 2的三磷酸腺苷,2毫米,6毫米的磷酸肌酸(CP)20毫米列印,N-二(2 -羟乙基)-2 -氨基乙酸(BES),氢氧化钾,pH值7.0
    清洗解决方案#2:140毫米的K-谷氨酸EGTA-KOH毫米,6.5毫米MgCl 2的 ,2毫米的三磷酸腺苷,CP的6毫米,20毫米的BES,氢氧化钾,pH值7.0,5
    剥皮的解决方案:140毫米的K-谷氨酸,MgCl 2的 6.5毫米,2毫米的三磷酸腺苷,CP的6毫米,20毫米的BES,氢氧化钾,pH值7.0
    TT加载解决方案:90.6毫米,18毫米谷氨酸钠, 氯化钙 0.55毫米,2毫米EGTA-KOH,MgCl 2的 6.7毫米,5.4毫米ATP,15毫米的CP,0.0025毫克/毫升肌酸激酶(CK),20毫米的K-谷氨酸百世氢氧化钾,5微米羰基氰化物P-trifluoromethoxyphenylhydrazone(FCCP),PCA,pH值7.0 7.0
    SR装载解决方案:107.8毫米,0.98毫米氯化钙2,EGTA-KOH 2毫米,6.6毫米MgCl 2的 ATP的5.4毫米,15毫米的CP,0.0025毫克/毫升对照,20毫米的BES-氢氧化钾,5微米FCCP的K-谷氨酸, pH值7.0,6.6前列腺癌
    简消耗的解决方案:K -谷氨酸,100毫米40毫米10毫米谷氨酸钠,EGTA-KOH,10毫米1,2 -双(邻氨基苯氧基)乙烷-N,N,N',N'-四乙酸(BAPTA ),0.35毫米MgCl 2的 ATP的0.5毫米,1毫米,20毫米的BES-氢氧化钾的CP,5微米FCCP,pH值7.0。 25毫米caffeine/20μM的毒胡萝卜素(TG),实验前加入。
  2. 解剖的趾长伸肌(EDL)的肌肉,先放下老鼠,并安排在腿侧卧位,然后从脚踝到膝盖皮肤,切浅表肌肉层组织揭露了EDL,并断绝上下肌腱释放完整的EDL肌;重要的是保持尽可能长的肌腱。 EDL是转移到台氏液,含0的Ca 2 +和EGTA 0.1毫米,以防止任何收缩。
  3. 立体显微镜下,用两个镊子保持较低的插入肌腱,并分成两束的EDL肌。重复的过程,以获得4年,然后8束。肌腱保持在该进程的结束,8束,这是关键。如果他们失去了一些捆绑,抛弃他们。
  4. 立体显微镜下,每个EDL捆绑带是抱怨道,两筋和仔细拉长,直到3〜4分离的单个肌纤维都留下完整与肌腱两侧。
  5. 将1滴的Ca 2 +在中间的玻璃底菜免费台氏缓冲直线上的菜,放下了EDL带,尽可能的快速清除解决方案,然后都用防水胶带,确保磁带的筋向下的磁带是严密的。先洗纤维0的Ca 2 +溶液中,然后用2.5毫米的Ca 2 +溶液的2倍。如果纤维超合同和损害注意到,丢弃的纤维。
  6. 如果需要,可以培养的光纤长达96小时,使遗传操作。完整的培养基洗纤维的3倍,并加入2毫升入菜的介质,在5%CO 2和37°C间孵化器的地方。每次实验前,检查肌肉纤维和丢弃那些没有明确的条纹或污染的迹象,或如细胞膜膜挛缩损伤的迹象。良好的纤维回应,氯化钾,电刺激,刺激和咖啡因。
  7. 单肌纤维的洗涤与洗涤液#1的3倍和沐浴Rhod-5N 500微米和0.5毫米的Ca 2 + 5分钟内像剥皮的解决方案。
  8. <李>使用钨针连接到针座,机械立体显微镜下皮肤的纤维,使横小管(TT),自动重新密封,并捕获与Ca 2 Rhod-5N共轭+在TT,两次洗皮肤纤维洗涤液#2。在蒙皮过程中删除单元格的宽度小于25%时是最佳的机械剥皮过程。
  9. 加载SR,皮肤纤维孵育20μM的FLUO-5N 1小时,在室温下,广泛使用一个额外的30分钟洗涤液#2,孵育清洗,让皮肤含有的解决方案,完整的去酯化染料。
  10. 30分钟后,皮肤纤维60X客观的共聚焦显微镜下可视化。获得相应的染料(激发波长为543 nm和发射时间比570纳米Rhod-5N;激发在488 nm和排放量在530-560纳米荧光5N)波长的荧光图像。 regi每个染料装领域选择感兴趣的组件(投资回报)​​。
  11. 实验的协议如下:TT -负荷为120秒,装载的SR-120,SR消耗400-750以消耗的SR的Ca 2 +存储的解决方案解决方案解决方案。在此过程中,Rhod-5N强度的变化(电汇的Ca 2 +)和5N荧光强度(简的Ca 2 +)的记录,创造一个相对荧光的变化,在TT和SR的时间当然决心。荧光强度的平均值,从多种纤维作进一步分析。在TT /简式结束时的最大负荷强度正常化至100%。

5。代表结果

我们审查KYSE-150细胞的SOCE活动,利用细胞内Ca 2 +测量( 图2)。使用利福平作为记者,我们可以选择orai1含有特定的shRNA质粒转染对单个细胞的基因编码SOCEÇhannel。与转染质粒与含有争夺的shRNA( 黑色线 ),敲Orai1减少的SOCE活动( 红色曲线 )的蛋白质结果。

SOCE KYSE-150细胞中也证实了Mn 2 +淬火法( 图3)。激发波长为360 nm报告等色点的Fura-2,荧光是独立的Ca 2 +浓度。后甘油三酯完全耗尽的ER的Ca 2 +店,灌注的Mn 2 +导致在一个显着的荧光减少。整体SOCE活动可以衡量的Fura-2荧光强度显示出更积极的SOCE一个陡峭的斜坡下降速率,而浅的斜坡意义不太积极的SOCE。 2建业细胞荧光下降的斜率要浅得多,这表明,这种化合物被阻断SOCE活动。锰2 +淬火率进行了测定,从最初的10秒,淬火仍然没有饱和的线性范围的记录。

类似的锰2 +淬火法进行肌肉( 图4)。在这种情况下,锰2 +与TG。而甘油三酯消耗的SR的Ca 2 +商店,荧光猝灭坡逐渐改变,直至达到其最大速率。 S形曲线,表明这些实验条件下的分级SOCE激活。

健康完好的文化单肌纤维表现出明确和统一的条纹,没有污染的迹象,没有收缩损伤的迹象。这些纤维能够响应电刺激或去极化的解决方案合同。在共聚焦成像,Rhod-5N染料剥皮纤维在TT车厢诱捕表明哺乳动物的特征双峰模式(visu就是靠在红色通道)。在加载SR FLUO-5N上午,穿插典型的SR模式是可见的(绿色通道)。 TT /简装载解决方案的皮肤纤维灌注后,Rhod-5N和Fluo-5N荧光强度增加;灌注SR枯竭的解决方案后,在SR车厢和TT的车厢荧光水平开始下降,表明紧耦合之间的SR的Ca 2 +商店枯竭和SOCE激活,分别为( 图5)。

图1
图1。激活存储操作的Ca 2 +进入(SOCE)。Orai1,孔隙通道形成单位,位于质膜(PM)和STIM1的, 一种 Ca2 +传感器,位于质或肌质网(ER / SR)的膜。时,ER / SR的Ca 2 +门店减少,由于封锁,ER / SR的Ca 2 +泵(电监会A)或通过IP 3受体或ryanodine受体的Ca 2 +释放,STIM1的被激活。激活STIM1的分子形成的补丁和诱导的聚集Orai1,从而进一步导致SOCE激活。

图2
图2。测量KYSE-150细胞内Ca 2 +细胞外液的外汇。0的Ca 2 +(0.5毫米EGTA)到2毫米的Ca 2 +并没有引起任何细胞内离子的变化。 5μM的甘油三酯在0的Ca 2 +沐浴液引起的被动的ER的Ca 2 +释放。耗尽后雌激素受体 ​​的Ca 2 +商店(10分钟),持续内Ca 2 +海拔SOCE,可以通过阻断SOCE抑制剂通过激活胞外Ca 2 +(2毫米)此外,如SKF-96365和2 -建业(数据未显示)。含有专门针对的shRNA质粒转染细胞orai1(红色)显示SOCE争夺序列(黑色)转染细胞相比,显着降低。

图3
图3。锰2 +的SOCE淬火法在KYSE-150细胞的Ca 2 +独立的Fura-2(360 nm)的激发波长测定锰2 +(0.5毫米)的Fura-2荧光猝灭。细胞经5μM10分钟TG完全耗尽的ER的Ca 2 +商店。 +加法(虚线,在第10秒)后, 的Fura-2荧光衰减斜率代表,这是表示单位时间内的荧光(初始值的100%)减少百分之SOCE激活。最大淬火的荧光信号是建立在实验结束后,裂解细胞,0.1%的Triton X-100(0%)。 2-APB(75μM)处理的细胞表现出了浅斜坡,建议SOCE这KYSE-150细胞中的化合物被封锁。

图4
图4。在肌肉细胞中发现锰2 +淬火法梯度SOCE激活。SOCE激活可以注册,而甘油三酯的消耗SR的Ca 2 +商店。同时应用的Mn 2 +(0.5毫米)和TG(20μM)诱导细胞内的Fura-2荧光(青色虚线显示最快的淬火点),这是明显的,从最初的锰2 +淬火梯度和S形下降率(蓝色虚线)。锰2 +淬火坡度为2-APB(75μM)处理的基底细胞水平几乎保持相同,这表明,SOCE抑制。

图5
图5。空间和时间上解决皮肤的肌纤维SOCE。 (一)RHOD-5N盐加载到TT和FLUO-5N AM被加载到的SR(B)申请的Ca 2 +消耗的解决方案后,在TT和SR车厢荧光下降。 FLUO-5N荧光的损失迅速释放的SR的Ca 2 +含量和Rhod-5N荧光损失建议SOCE激活。

Discussion

虽然的Ca 2 +结合的Ca 2 +免费的Fura-2激发波长为340 nm和380 nm处,分别的最佳比例的Fura-2的动态范围为Ca 2 +浓度测量,可能会发生在其他波长在一个特定的显微镜系统。波长的这种变化通常是由于除了与各种光学元件的光学路径的变化。在这项研究中,FURA-2激发波长为350 nm和390 nm的决定FURA-2荧光光谱的分析。

细胞内Ca 2 +水平的细胞质结果从几个来源的平衡,包括细胞内Ca 2 +释放,细胞外Ca 2 +进入,以及在ER和细胞膜离子排斥机制。为了隔离从单向SOC介导的Ca 2 +涌入细胞内Ca 2 +释放和Ca + EXTR延髓的Mn 2 +淬火法都可以使用。锰2 +被称为是能够渗透到细胞通过SOCE,但防渗膜表面挤压或吸收的ER +泵。因此,荧光猝灭代表进入细胞的单向锰2 +流量测量估计SOCE激活程度。锰2 +淬火法等色点波长在这样的Fura-2荧光强度是独立的Ca 2 +浓度。为每个系统等色点应确定由光谱扫描。另外, 锰+淬火可以在任何两个波长,在这样一种方式,最终的价值是独立的Ca 2 +浓度13记录调整后的荧光。

为了获得的SOCE骨骼肌肉的活动空间和时间的信息,我们采用双染的方法,它允许同时measuremeNT SOCE活性和SR的Ca 2 +在皮肤成年哺乳动物的EDL肌纤维含量。 SR钙2的变化之间的关系+活动内容和SOCE可以绘制指示阈值和灵敏度SOCE激活枯竭的SR的Ca 2 +存储的。 TT加载的解决方案进行了优化,另外加载的T管与Ca 2 +和吸T型管和SR的装载解决方案旨在促进最大的SR的Ca 2 +负荷,另外加载的T-管〜500微米的Ca 2 +。 FCCP在TT /简加载的解决方案和SR消耗的解决方案,以消除从线粒体的影响。

Disclosures

没有利益冲突的声明。

Acknowledgments

我们感谢这个手稿的阅读和编辑医生诺亚魏斯勒德。这项工作得到了香港研究资助UMDNJ基金会62-09透明带,美国心脏协会SDG2630086到新征,0535555N到MB,国立卫生研究院RC2AR058962-01到MB。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
RPMI 1640 Mediatech 10-040-CV
Ham's F-12 Mediatech 10-080-CV
DMEM Mediatech 10-013-CV
Glass Bottom Dish MatTek P35G-1.5-14-C
Fura-2 AM Invitrogen (Molecular Probes) F1221 -20 °C, seal tight, protected from light, dissolved into DMSO
Fluo-5N AM Invitrogen (Molecular Probes) F14204 -20 °C, seal tight, protected from light
Rhod-5N Invitrogen (Molecular Probes) R14207 -20 °C, seal tight, protected from light
Quartz Cuvette Starna Cells 3-Q-10
thapsigargin Tocris 1138
2-Amin–thoxydiphenylborane (2-APB) Tocris 1224
N-benzyl-p-toluene sulphonamide (BTS) Sigma-Aldrich 435600
Collagenase Type I Sigma C0130

Equipment:

  1. A spectrofluorometer (Photon Technology International, NJ): xenon arc lamp, computer-controlled high-speed random access monochromator, cuvette-based emission monochromator, Nikon TE-200 inverted fluorescence microscope, S Fluor 40x/1.30 oil objective, PMT detectors.
  2. Laser Scanning Confocal Microscope (BioRad Radiance2100): argon laser 453/477/488/514, HeNe laser 543nm, Nikon TE2000 inverted microscope, 60X objective (N.A. 1.4, oil).
  3. A stereomicroscope with a magnification power > 100 (Zeiss Stemi SV11 Apo).

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Parekh, A. B., Putney, J. W. Jr Store-operated calcium channels. Physiol. Rev. 85, 757-810 (2005).
  2. Ma, J., Pan, Z. Retrograde activation of store-operated calcium channel. Cell Calcium. 33, 375-384 (2003).
  3. Feske, S. ORAI1 and STIM1 deficiency in human and mice: roles of store-operated Ca2+ entry in the immune system and beyond. Immunol. Rev. 231, 189-209 (2009).
  4. Parekh, A. B. Store-operated CRAC channels: function in health and disease. Nat. Rev. Drug Discov. 9, 399-410 (2010).
  5. Pan, Z. Dysfunction of store-operated calcium channel in muscle cells lacking mg29. Nat. Cell Biol. 4, 379-383 (2002).
  6. Shin, D. W. A retrograde signal from calsequestrin for the regulation of store-operated Ca2+ entry in skeletal muscle. J. Biol. Chem. 278, 3286-3292 (2003).
  7. Ma, J., Pan, Z. Junctional membrane structure and store operated calcium entry in muscle cells. Front Biosci. 8, d242-d255 (2003).
  8. Pan, Z., Damron, D., Nieminen, A. L., Bhat, M. B., Ma, J. Depletion of intracellular Ca2+ by caffeine and ryanodine induces apoptosis of chinese hamster ovary cells transfected with ryanodine receptor. J. Biol. Chem. 275, 19978-19984 (2000).
  9. Hirata, Y. Uncoupling store-operated Ca2+ entry and altered Ca2+ release from sarcoplasmic reticulum through silencing of junctophilin genes. Biophys. J. 90, 4418-4427 (2006).
  10. Zhao, X. Enhanced resistance to fatigue and altered calcium handling properties of sarcalumenin knockout mice. Physiol. Genomics. 23, 72-78 (2005).
  11. Zhao, X. Azumolene inhibits a component of store-operated calcium entry coupled to the skeletal muscle ryanodine receptor. J. Biol. Chem. 281, 33477-33486 (2006).
  12. Launikonis, B. S., Barnes, M., Stephenson, D. G. Identification of the coupling between skeletal muscle store-operated Ca2+ entry and the inositol trisphosphate receptor. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 2941-2944 (2003).
  13. Shuttleworth, T. J. Temporal relationships between Ca2+ store mobilization and Ca2+ entry in an exocrine cell. Cell. Calcium. 15, 457-466 (1994).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics