Tactile Conditioning and Movement Analysis Of antennal Prøvetaking Strategies i Honey Bees (

Neuroscience

Your institution must subscribe to JoVE's Neuroscience section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

I denne protokollen viser vi hvordan du tilstand utnyttet honningbier til taktile stimuli og innføre en 2D motion capture teknikk for å analysere kinematikken i fin-skala antennal sampling mønster.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Mujagić, S., Würth, S. M., Hellbach, S., Dürr, V. Tactile Conditioning And Movement Analysis Of Antennal Sampling Strategies In Honey Bees (Apis mellifera L.). J. Vis. Exp. (70), e50179, doi:10.3791/50179 (2012).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Honningbier (Apis mellifera L.) er eusocial insekter og godt kjent for sine komplekse arbeidsdeling og assosiativ læring evne 1, 2. Arbeideren bier tilbringe første halvdel av sitt liv inne i mørke strukturen, hvor de er sykepleier larvene eller bygge den vanlige sekskantede kammer for mat (f.eks pollen eller nektar) og gruble 3. Antennene er ekstraordinære multisensoriske følehorn og spiller en sentral rolle i ulike taktile medierte oppgaver 4, inkludert hive bygge 5 og mønstergjenkjenning 6. Senere i livet, forlater hver enkelt bie strukturen til fôr for mat. Så en bie må lære å diskriminere lønnsomme mat kilder, huske deres plassering, og kommunisere den til sine reir mates 7. Bier bruke ulike floral signaler som farger eller lukter 7, 8, men også taktile signaler fra bladet overflaten 9 til å danne multisensoriske minner fra matkilde. Under laboratorium conditions kan bier få opplæring i en appetitive læring paradigme å diskriminere taktile objekt, for eksempel kanter eller spor med sine 10 antenner, 11, 12, 13. Dette læring paradigmet er nært knyttet til den klassiske olfactory condition av snabel forlengelse respons (PER) i utnyttes bier 14. Fordelen med den taktile læring paradigmet i laboratoriet er muligheten for å kombinere atferdsmessige eksperimenter på læring med ulike fysiologiske målinger, inkludert analyse av antennal bevegelsesmønster.

Protocol

1. Forberede Bees

  1. Nektar eller pollen finsnitter er fanget i feltet enten fra en sukrose mater eller direkte fra bikuben inngangen mens retur fra en foraging tur. Hver enkelt bee er fanget inn i et hetteglass som er lukket med en skum plugg og tatt umiddelbart inn i laboratoriet for videre håndtering.
  2. I laboratoriet, blir de fangede bier kort avkjølt i kjøleskap ved 4 ° C inntil de viser første tegn av immobilitet.
  3. Hvert enkelt immobilisert bie er montert i en liten metallrør med teip mellom hode og thorax og over magen. Forsiktighet bør utvises at snabel og antenner er fritt bevegelige.
  4. Male sammensatte øyne og Ocelli av den faste bee med hvit maling (f.eks løsemiddelfri Tipp-Ex) til occlude visjon.
  5. Legg en liten dråpe av smeltet voks bak hodet på bee å fikse det til tape mellom hodet og thorax for å hindre hodebevegelser under opptak.
  6. Merke hvert enkelt bee med et nummer på båndet for bedre identifisering og plasser røret med fast bee i en fuktig atmosfære for å forhindre dehydrering.
  7. Mate hver enkelt bie i 5 sek med dråper av en 30% sukroseløsning presentert med en sprøyte og la alle bier gjenopprette for 30 min før starter med taktile condition protokollen.

2. Tactile Conditioning

  1. Før condition, har hver enkelt bee å testes for snabel forlengelse respons (PER) til et 30% sukrose stimulans påføres antennene. Derved spissen av snabel må krysse en virtuell linje mellom de åpnede mandibles. Forkaste alle biene som ikke svarer med en PER til sukrose stimulans.
  2. For taktil condition bruke et messing kube (f.eks 3 x 5 mm) med en glatt eller en gravert mønster, f.eks horisontale eller vertikale spor som danner en rist med 150 mikrometer bølgelengde, som betinget stimulus (CS). Feller det ubetingede stimulus (US) bruker en 30% sukroseløsning (husholdning sukker, fortynnet i vann).
  3. Messing cube (CS) er plassert inn i en holder på en mikromanipulator (f.eks MM33 Märzhäuser) for å sikre nøyaktig posisjonering under condition prosedyren. USA er presentert for bee med en sprøyte fylt med en 30% sukroseløsning.
  4. Condition prosedyren består av fem motstandere av den taktile stimuli (CS) og sukroseløsning (US) med en inter-rettssaken intervall (ITI) på 5 min. Plasser et singel bie foran mikromanipulator med det monterte taktile stimulus (CS). Plasser CS langsomt, slik at overflaten av den taktile stimulus er parallell med hodet av bee (figur 1 A og B). Avstanden mellom dyret og den taktile objektet skal være i området av den antennal arbeidsradius av de testede bie, dvs. bie skal kunne skanne taktile stimulans i en komfortabel stilling wed begge antennene. I eksempelet vist i figur 1, var avstanden 3 mm. La bee skanne den taktile stimuli (CS) i 5 sek. Etter den første 3 sek, presentere en dråpe av 30% sukrose (US) løsning med en sprøyte under snabel. Bruk spissen av sprøyten til forsiktig heve snabel. Sukrose stimulering under snabel vil lokke fram det ubetingede PER 15. La bee å slikke sukrose belønning. Bruk en stoppeklokke med et alarmsignal til å opprettholde nøyaktig tid intervaller under condition.
  5. Den betingede PER brukes som et mål for læring suksess av en bie. Etter de første belønnet motstandere, bier begynne å svare på CS presentasjon i forlengelsen av sine snabel, noe som indikerer at de forventer den kommende belønning. Et fullt utvidede snabel observert når som helst i løpet av 3 sek tidsvinduet for taktil stimulans presentasjon og før sukrose presentasjon scoret som en positiv respons. Ingen respons regnes negative. OCCurrence av PER må bemerkes av eksperimentator. Prosentandelen av bier viser PER under CS presentasjonen er plottet for hvert forsøk.

3. Kinematiske Recordings

  1. Antennal bevegelser av en enkelt harnessed bee er registrert med et digitalt videokamera med en egnet makro objektiv (f.eks Basler A602f-2 utstyrt med TechSpec VZM 200, operert på 50 fps via en brann wire tilkobling). Kameraet er plassert over dyret i en topp-ned-visning (figur 1 A). I figur 1, er den romlige oppløsningen av opptakene 0,02 mm / piksel.
  2. Kalibrere kameraet ved å registrere enkle bilder av en 10 x 10 mm sjakkbrett med en kant lengde på 1 mm fra forskjellige retninger under kameraet målet. Kalibreringen kan gjøres med kameraet kalibreringsverktøy boks Matlab 16.
  3. Plasser en enkelt fast bie under kameralinsen. Presenter den taktile stimulansen, festet til en micromanipulator, Til dyret. Fortsett på samme måte som beskrevet for taktil condition, og registrere antennal bevegelse mens bee skanner objektet. Det er viktig at hele antennal arbeidsområde og taktile stimuli er synlige. Valgene av stimulans mønstre testet og rettssaken tallene avhenger av den eksperimentelle design.

4. Dataanalyse

  1. Beregningen av bildet bakgrunnen er gjort i Matlab. Først har median gråtoner verdi over tid skal beregnes for hver piksel. Statiske objekter, som fast leder av bie og den taktile stimuli, vil utgjøre bildet bakgrunnen. Bevegelige objekter, som to antennene, vil ikke være en del av bakgrunnen.
  2. Hver ramme for videoopptaket må være lastet sekvensielt, og forskjellen mellom den aktuelle rammen og bildebakgrunnen må beregnes. Resultatet av denne subtraksjon understreker de deler av bildet som beveger seg fra ramme til ramme. Ideally, antennene av bee er de eneste områder av ikke-null-verdier (figur 1C).
  3. For videre behandling, er de to største områder med ikke-null pikselverdier antatt å være antennene. For begge antennene en binær maske skal genereres inneholdende for hver piksel en verdi 1, dersom pikselen tilhører antennen og verdien 0 ellers. Denne masken tjener som et grunnlag for å lokalisere antennal tipsene senere. For å få en foreløpig maske for hele bildet den grå-verdien av hver piksel av differansen bildet er sammenlignet med en forhåndsdefinert terskel. Siden vi tar vare på støy senere denne terskelen er valgt til å være ganske lav. Den foreløpige maske da bærer fortsatt to typer feil: For det første, på grunn av bildestøyen små regioner fortsatt er en del av masken. Dernest kan områder som tilhører antennen ikke nødvendigvis være forbindelse. Sistnevnte forekommer hovedsakelig hvis bakgrunnen har omtrent samme luminescens som antenne. For å eliminere disse gjenstandene, standardbildebehandling morfologisk operasjon er brukt, dvs. en kombinasjon av bilde erosjon og dilatasjon, å stole på standard Matlab funksjoner imerode og imdilate henholdsvis (se 17 pp. 158-205 for ytterligere forklaring). Etter denoising prosessen antennene hypoteser fortsatt inneholdt innenfor samme maske. Derfor, som et neste skritt det binære masken er gruppert for disjunkte områder ved hjelp av standard Matlab-funksjonen bwlabel (se 17 pp. 40-48 for ytterligere informasjon om bildesegmentering algoritme).
  4. Antall piksler per klynge telles og de to største klyngene er valgt. Tyngdepunktet er beregnet til å skille mellom den venstre og høyre antenne (figur 1D).
  5. Den antennal spiss for hver antenne kan defineres som den pikselen i en klynge med den høyeste verdien i proksimale til distale retning (se figur 1D).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

I det følgende eksperiment studerte vi hvordan taktil læring påvirker antennal prøvetaking atferd i honningbier. For dette er overvåket vi bevegelsen av antennal spissen i naive og betinget bier før og under presentasjonen av en taktil stimulus.

Først ble den spontane antennal bevegelsen av en gruppe av pollen fôrhøstere (N = 42) registrert i 1 min. Halvparten av bier (N = 21) ble deretter kondisjonert ved sammenkobling fem ganger en taktil stimulus med en 30% sukrose belønning. Dette var den betingede gruppen. Det taktile stimulus var 30 x 50 mm overflate av et messing kube med en gravert horisontal rist (λ = 150 um). Den andre halvparten av biene (N = 21) ble ikke betinget og brukt som et naivt gruppe. Fig. 2 viser midlere læringskurven av det kondisjonerte gruppen av bier. Prosentandelen av betinget PER etter første belønning er vesentlig forskjellig fra den spontane adferd (Figur 2 3. belønning.

Etterpå bevegelsen av antennal spissen i både den kondisjonerte og naive gruppen ble registreres igjen i 1 min i nærvær av den taktile stimulans Figur 3 A 1 -. B 2 viser fordelingen av antennal tips steder i begge grupper, før og under presentasjonen av den taktile objektet. Både den naive og den kondisjonerte gruppen endret sin antennal bevegelsesmønster i nærvær av en taktil stimulans forhold til spontan oppførsel. Sannsynligheten for at antennal spissen til å søke og / eller prøve området av stimulus er signifikant økt hvis stimulus var tilstede, som viser at følbar prøvetaking innebærer en markant endring i antennal bevegelsesmønsteret sammenlignet spontan antennal bevegelse. Dette gjelder for begge grupper av bier (figur 3 C 1 og C (figur 3 C 1 og C 2, Mann-Whitney U test, P <0,05, det var ingen signifikant forskjell mellom de to referanse perioder A i figur 3C). Dermed fører følbar condition til en økning av aktiv antennal bevegelse nær objektet og taktil prøvetaking av objektet overflaten som tidligere vist i Erber (2012) 18. Sammenlignet med den naive gruppen var den romlige fordelingen under stimulans presentasjon mye mykere etter condition (Sammenlign Figur 3 B 1 og B 2).

Oppsummert viser resultatene fra dette eksperimentet viser at honningbier kan trenes veldig effektivt å svare på en taktil stimulans, og at følbar læring ledsages av økt aktivive søke og prøvetaking atferd.

Figur 1
. Figur 1 Video-opptak og antennal sporing prosedyre A:. Top-down visning av en fast bie og den taktile stimuli. Den taktile stimulans er plassert i fronten av hodet av det faste bee med okkluderte øyne. Det ligger innenfor antennal arbeider-serien. d og p angir distale og proksimale steder i forhold til dyret B:. Sidevisning av samme bee og den taktile stimulans. Overflaten av taktil stimulans og hodet av bie (blå stiplede linjer) er parallelle med hverandre C:. Skille bevegelige piksler fra statiske piksler i en videosekvens. Trekke hvert bilde fra en bakgrunn modellen lar identifisering av de bevegelige delene, dvs. enntennae. Den faste leder av bie og den taktile stimuli (angitt her som røde stiplede linjer) er statiske og ikke synlig etter at subtraksjon D:. Definere venstre og høyre og antennal tips. De to største pixel klynger etter subtraksjon er identifisert som antenner. Beregning av tyngdepunktet tillater skille mellom venstre (rød) og den høyre (grønn) antenne. Den antennal spiss for hver antenne (svart kors) kan defineres som det piksel i en klynge med den største verdien i den distale retning.

Figur 2
Figur 2. Læringskurve av taktile PER condition. Pollen finsnitter ble trent med fem motstandere av CS (taktil stimulans) og USA (sukroseløsning) med en inter-rettssaken intervall på 5 min. Prosentandelen av positive reaksjoner fra 21 dyr er plottet for den spontane atferd (spont) og during presentasjon av CS etter hver condition trial. Prosentandelen av PER observert etter den første og alle følgende belønninger er vesentlig forskjellig fra den spontane adferd (Fisher eksakte sannsynligheten test, p <0,001).

Figur 3
Figur 3. Normalisert middeltall distribusjoner av antennal spissen plasseringen i en periode på 1 min. Den antennal spissen distribusjonen av hvert bee ble normalisert til det totale antall datapunkter pr dyr. Panelene vise resultater fra naive (venstre, N = 21) og klimaanlegg bier (høyre, N = 21) før (A) og under stimulans presentasjon (B) A 1 og A 2:. Spontan antennal bevegelse før stimulans presentasjon. Abscissen viser den laterale posisjonen til antennal spissen i forhold til the midten av hodet (sammenlign med figur 1C og D). Ordinaten viser den distale posisjon antennal tips. Fargeskalaen angir hvor stor prosentandel av tiden som antennal spissen brukt på hvilket som helst sted. Innspillingen periode på 1 min var tilsvarende 3000 videobilder B 1 og B 2:. Samme som i en 1,2, men i løpet av stimulans presentasjon C 1 og C 2:. Gjennomsnittlig antall rammer der antennal Tipset ble plassert inne objektet området, dvs. ± 3 binger distale eller proksimale i forhold til stimulus overflaten. C1: naiv gruppe, C2: aircondition gruppe. The Box-whisker plott viser medianen, mener, kvartiler, og 5-95% persentil områder av antall bilder per minutt. I begge grupper av bier, det er en betydelig forskjell mellom 'ingen stimulus' (A) og 'med stimulans "(B, C; Wilcoxons signert-rank test, en C: P = 5,39 * 10 -4, C 2 -5). Gjennomsnittlig antall rammer under taktile stimuli presentasjon er vesentlig større i klimaanlegg bier enn hos naive bier (Mann-Whitney U test, 1 C - C 2: P = 0,007). Klikk her for å se større figur .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Fremstilling av bier: Innsamling og fikse biene bør gjøres raskt, for å holde stresset nivået på dyret lav. Stress har en effekt på PER-respons og derfor kan ha en indirekte effekt på læring ytelse i bier 19, 20. Stressnivået kan reduseres ved å plassere hetteglass med bier direkte på isen umiddelbart etter samlingen til immobilize dem raskt. Det må tas hensyn til at biene trenger mer tid til å utvinne den lenger anestesi perioden er før.

Vision har en negativ effekt på taktile læring i bier 18. Derfor er det viktig å occlude visjon ved male øynene av dyret. For å øke den visuelle kontrasten på videoopptak, er det anbefalt å bruke hvit maling (f.eks Tipp-Ex). Forsiktighet bør utvises for ikke å få for antennene i kontakt med malingen.

Læring ytelse: Tidligere studier i laboratoriet og felt viste at sukrose følsomhet i honningbie finsnitter påvirker deres assosiativ læring evne 21, 22. Høy sukrose følsomhet er positivt korrelert med bedre taktil oppkjøp og diskriminering forestillinger. Pollen fôrhøstere av en honningbie kolonien er i gjennomsnitt mer mottakelig for sukrose enn nektar fôrhøstere i de fleste uker av en foraging sesong 23. De kan lett identifiseres ved pollen belastninger på bakbeina og fanget på strukturen inngangen. Nektar fôrhøstere med høy sukrose følsomhet kan bli fanget på slutten av en foraging sesong, mellom september og oktober. De kan velges på kunstige feeders fylt med lav konsentrert sukker vann plassert ca 20 m unna hive 23.

Læring ytelse og minne dannelse avhenger sterkt av metthet status av en bie under conditioning 25. En lengre sult period før condition, f.eks over natten, kan forbedre assosiativ læring atferd og øke motivasjon nivå av et dyr.

Taktil condition: PER brukes som det ubetingede respons i et appetitive læring protokoll 14. Derfor er det avgjørende at alle testede bier viser en fullt utvidet PER til ubetingede stimulus (sukker stimulans) før condition. Bier som ikke svarer til sukker stimulans skal destrueres, samt bier som reagerer med en PER under antennal kontakt med taktile stimuli før condition. Ellers vil ekstremt lav eller ekstremt høy respons fra disse dyrene konfundere læringskurve.

Den taktile stimuli som brukes i denne protokollen (messing kube med horisontale rister) ble tilfeldig valgt. Honey bier kan også betinget av ulike taktile stimuli med ulike former og teksturer (se 10).

Å sammenligne oppkjøp i ulike grupper av bier (f.eks Pollen-versus Nectar fôrhøstere), kan et oppkjøp poengsum beregnes 21. Denne vurdering er det totale antall av betingede reaksjoner på CS og den har et område mellom 0 (ingen betinget PER) og 5 (kondisjonert PER etter hver condition studie).

Videoanalyse: Ulike video analyser metoder ble brukt i fortiden for å kvantifisere endringer i antennal bevegelsen oppførsel i honningbier 26, 27. Vår metode har fordelen av å analysere antennal bevegelser uten å kreve reflekterende markører på antenner og ytelser fra ulike bildebehandlingsverktøy i Matlab. Som et eksempel kan man også analysere tidspunktet for Antennal kontakter mot et objekt, bestemme hastigheten antennal bevegelse, beregne vinkelposisjoner av antennene i referanse til kroppens akser eller diskriminere mellom venstre og høyre antennal bevegelse.

En PER som oppstår under opptak av antennal respons til objektet i klimaanlegg bier kan forstyrre senere med automatisk registrering av antennene. I dette tilfellet er det nødvendig å redigere filmen, for eksempel i VirtualDub, og for å maskere objektet som forstyrrer søkeprosessen, f.eks ved å dekke den delen hvor snabel vises med en grå lag av samme form.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Ingen interessekonflikter erklært.

Acknowledgments

Vi takker Joachim Erber for å introdusere oss til den taktile læring paradigmet i honningbier. Dette arbeidet ble støttet av Cluster of Excellence 277 CITEC, finansiert innenfor rammen av den tyske Excellence Initiative.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Pollen foragers, Apis mellifera L. Private hives
Glass vials (22 x 45 mm) Carl Roth GmbH Co X655.1
Brass tubes, 10 x 30 mm Self-produced
Brass cube, 3 x 5 mm Self-produced
Tipp-Ex (solvent-free) Tipp-Ex GmbH Co KG
Sucrose solution (30%) Household suger diluted in water
Ethanol (70%) Carl Roth GmbH Co 9065.3
Syringe (1 ml) and needle (0.6 x 25) Carl Roth GmbH Co 59.1
Stop Watch Carl Roth GmbH Co L423.1
Micromanipulator Märzhäuser MM33 00-42-101-0000
Digital video camera Basler A602f-2
Macro lens for camera TechSpec VZM 200
Matlab R2009b The MathWorks

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Page, R. E., Scheiner, R., Erber, J., Amdam, G. V. The development and evolution of division of labor and foraging specialization in a social insect (Apis mellifera L.). Curr. Top. Dev. Biol. 74, 253-286 (2006).
  2. Menzel, R., Müller, U. Learning and memory in honeybees: From behavior to neural substrates. Annu. Rev. Neurosci. 19, 379-404 (1996).
  3. Seeley, T. D. The wisdom of the hive. Harvard University Press. Cambridge Mass, London. (1995).
  4. Staudacher, E., Gebhardt, M. J., Dürr, V. Antennal movements and mechanoreception: neurobiology of active tactile sensors. Adv. Insect Physiol. 32, 49-205 (2005).
  5. Martin, H., Lindauer, M. Sinnesphysiologische Leistungen beim Wabenbau der Honigbiene. Z. Vergl. Physiol. 53, 372-404 (1966).
  6. Kevan, P. G. Texture sensitivity in the life of honeybees. Neurobiology and behavior of honeybees. Menzel, R., Mercer, A. Springer Verlag. Berlin, Heidelberg, New York. 96-101 (1987).
  7. von Frisch, K. Tanzsprache und Orientierung der Bienen. Springer Verlag. Berlin, Heidelberg, New York. (1965).
  8. Waser, N. M. Flower constancy: definition, cause, and ceasurement. Am. Nat. 127, 593-603 (1986).
  9. Kevan, P. G., Lane, M. A. Flower petal microtexture is a tactile cue for bees. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82, 4750-4752 (1985).
  10. Erber, J., Kierzek, S., Sander, E., Grandy, K. Tactile learning in the honeybee. J. Comp. Physiol. A. 183, 737-744 (1998).
  11. Kisch, J., Erber, J. Operant conditioning of antennal movements in the honey bee. Behav. Brain. Res. 99, 93-102 (1999).
  12. Scheiner, R., Erber, J., Page, R. E. Tactile learning and the individual evaluation of the reward in honey bees (Apis mellifera L.). J. Comp. Physiol. A. 185, 1-10 (1999).
  13. Erber, J., Scheiner, R. Honeybee learning. Encyclopedia of Neuroscience. Adelman, G., Smith, B. Elsevier. (2004).
  14. Bitterman, M. E., Menzel, R., Fietz, A., Schäfer, S. Classical conditioning of proboscis extension in honeybees (Apis mellifera). J. Comp. Psychol. 97, 107-119 (1983).
  15. Dacher, M., Gauthier, M. Involvement of NO-synthase and nicotinic receptors in learning in the honey bee. Physiol. Behav. 95, 200-207 (2008).
  16. Camera Calibration Toolbox for Matlab [Internet]. Available from: http://www.vision.caltech.edu/bouguetj/calib_doc (2004).
  17. Haralick, R. M., Shapiro, L. G. Computer and Robot Vision. I, Addison-Wesley. Reading, Mass. (1992).
  18. Erber, J. Tactile antennal learning in the honey bee. Honeybee Neurobiology and Behavior. Galizia, C. G., et al. Springer Verlag. 439-455 (2012).
  19. Pankiw, T., Page, R. E. Effect of pheromones, hormones, and handling on sucrose response thresholds of honey bees (Apis mellifera L.). J. Comp. Physiol. A. 189, 675-684 (2003).
  20. Harris, J. W., Woodring, J. Effects of stress, age, season and source colony on levels of octopamine, dopamine and serotonine in the honey bee (Apis mellifera L.) brain. J. Insect. Physiol. 38, 29-35 (1992).
  21. Scheiner, R., Kuritz-Kaiser, A., Menzel, R., Erber, J. Sensory responsiveness and the effects of equal subjective rewards on tactile learning and memory of honeybees. Learn. Mem. 12, 626-635 (2005).
  22. Mujagic, S., Sarkander, J., Erber, B., Erber, J. Sucrose acceptance and different forms of associative learning of the honey bee (Apis mellifera L.) in the field and laboratory. Front. Behav. Neurosci. 4, 46 (2010).
  23. Scheiner, R., Barnert, M., Erber, J. Variation in water and sucrose responsiveness during the foraging season affects proboscis extension learning in honey bees. Apidologie. 34, 67-72 (2003).
  24. Mujagic, S., Erber, J. Sucrose acceptance, discrimination and proboscis responses of honey bees (Apis mellifera L.) in the field and the laboratory. J. Comp. Physiol. A. 195, 325-339 (2009).
  25. Friedrich, A., Thomas, U., Müller, U. Learning at different satiation levels reveals parallel functions for the cAMP-protein kinase A cascade in formation of long-term memory. J. Neurosci. 24, 4460-4468 (2004).
  26. Erber, J., Pribbenow, B., Grandy, K., Kierzek, S. Tactile motor learning in the antennal system of the honeybee (Apis mellifera L.). J. Comp. Physiol. A. 181, 355-365 (1997).
  27. Lambin, M., Déglise, P., Gauthier, M. Antennal movements as indicators of odor detection by worker honeybees. Apidologie. 36, 119-126 (2005).

Comments

1 Comment

  1. can this protocol apply in other kinds of stimulus,such as vision cues or sound?

    Reply
    Posted by: Hong en T.
    April 26, 2014 - 12:54 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics