أسلوب في فيفو لدراسة سلامة حاجز الدم-الخصية الماوس

* These authors contributed equally
Developmental Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Developmental Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

نقدم هنا، بروتوكولا لتقييم سلامة حاجز الدم-الخصية عن طريق حقن الاينولين-فيتك في الخصيتين. هذا هو أسلوب فعال في فيفو لدراسة سلامة حاجز الدم-الخصية التي يمكن أن تتأثر بالعناصر الوراثية والبيئية.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Liu, M., Zhu, C., Bai, S., Li, X., Fu, K., Ye, L., Zheng, K. An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity. J. Vis. Exp. (142), e58512, doi:10.3791/58512 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

الحيوانات المنوية هو تطوير spermatogonia إلى المني ناضجة في الخصي للخصية. ويدعم هذه العملية تقاطعات خلية سيرتولي على حاجز الدم-الخصية (الفيرمونت)، وهو أشد الحاجز الأنسجة في جسم الثدييات ويعزل ظهارة سيمينيفيروس في مقصورات اثنين، القاعدية وأدلومينال. BTB يخلق المكروية فريدة من نوعها للخلايا الجرثومية في الانقسام الاختزالي أنا/الثاني ومن أجل تطوير بوستميوتيك لوحظت في المني عن طريق سبيرميوجينيسيس. هنا، يمكننا وصف مقايسة موثوق بها رصد سلامة BTB الماوس الخصية في فيفو. BTB سليمة كتل نشر مترافق FITC الاينولين من القاعدية لحجرة قمي للخصي. هذا الأسلوب مناسبة لدراسة الجينات المرشحين أو الفيروسات أو السموم البيئية التي قد تؤثر على دالة BTB أو السلامة، مع إجراء سهل واشتراط الحد أدنى من المهارات الجراحية مقارنة بالأساليب البديلة.

Introduction

وتعتبر الثدييات الحيوانات المنوية عملية التنظيم تضم spermatogonial الذاتي تجديد والتمايز من خلال سبيرماتوسيتيس في المني فرداني عن طريق الانقسام، والانقسام، وسبيرميوجينيسيس، خلالها مثيرة تحدث التغييرات البيوكيميائية والمورفولوجية. يتم نقل الخلايا الجرثومية النامية تدريجيا من قاعدة أنبوب seminiferous نحو التجويف. وينظم هذه العملية خلية خلية الاتصالات بين الخلايا الجرثومية وخلايا سيرتولي1،2. تشكيل خلايا سيرتولي مجاورة BTB الذي يقع قرب القاعدة لأنبوب سيمينيفيروس. الفيرمونت جسديا يقسم الظهارة القاعدية وحجرة أدلومينال. خلال مراحل الثامن-التاسع دورة الظهارية، ترحيل سبيرماتوسيتيس بريليبتوتيني/leptotene من المقصورات القاعدية عبر الفيرمونت، دخول المقصورات أدلومينال3. ولذلك، وظيفة BTB توفير المكروية إيمونوبريفيليجيد لإنهاء الانقسام وسبيرميوجينيسيس4،،من56. خلافا للدم-الأنسجة حواجز أخرى (مثلاً، حاجز الدم في الدماغ) التي تتكون فقط من تقاطعات ضيق (TJs)، BTB شكلتها أربعة تقاطعات مختلفة (TJs التخصصات ectoplasmic وتقاطعات الفجوة، والمتوسطة المستندة إلى خيوط desmosomes) بين Sertoli الخلايا1،7.

واستخدمت العديد من الدراسات الفئران المعدلة وراثيا، وحالات العدوى بالفيروس، وسميات البيئية للتحقيق في آليات BTB السلامة7،،من89. تعطيل BTB يدفع ضعف الحيوانات المنوية والحيضيه أو العقم. منذ تشكيل BTB وسلامة تأكدت أن تتأثر الاتصالات بين خلايا سيرتولي8، نموذجا في المختبر استناداً إلى الثقافة الأولية من خلايا سيرتولي معزولة وقد استخدمت لدراسة الفيرمونت. ومع ذلك، لا يمكن دقة تقليد هذا النموذج BTB ديناميات فيفو. وعلاوة على ذلك، تم إنشاء لا ثقافة المشارك هذه الخلايا الجرثومية مع خلايا سيرتولي كما يمكن أن يعكس جميع المكونات الهيكلية والوظيفية ذات الصلة من10،BTB11.

وبصفة عامة، في فيفو BTB سلامة فحوصات عادة استناداً إلى جزيئات صغيرة، مثل وصلة لوبيس سولفو-دائرة الصحة الوطنية--LC-البيوتين ومترافق FITC inulin (الاينولين-فيتك). عادة، يتم حظر نشر البيوتين أو الاينولين-فيتك من حجرة القاعدية بهيكل الفيرمونت. ولذلك، نحن قادرون على استخدام هذا الأسلوب لتقييم مدى الضرر BTB مقارنة مع مجموعات المراقبة. بينما يمكن أن يثير الشبهة BTB مع أنواع معينة من المنبهات، مثل المعاملة مع (كدكل2) كلوريد الكادميوم12، يصبح BTB موجوداً للجزيئات الصغيرة، الذي أدخل حجرة أدلومينال في نهاية المطاف كمؤشرات.

أوائل في فيفو BTB سلامة مقايسة ينطوي على حقن البيوتين أو الاينولين-فيتك في حبل الوريد، الذي ينطوي على جراحة، والغازية، ومعقدة وتستغرق وقتاً طويلاً. إلى جانب ذلك، كالمواد مراسل منتشر عبر الجسم كله عن طريق الدورة الدموية، يقتصر تركيز المحلية البيوتين أو الاينولين-فيتك في الخصي. وعلاوة على ذلك، قد حمل التعرض للمنهجية ردود فعل المناعة. نقدم هنا، بسيطة وفعالة في فيفو BTB سلامة مقايسة تمكين الحقن المباشر قاسمة صغيرة من الاينولين فيتك في إينتيرستيتيوم للخصية. استخدام الفلورية وسم الأسلوب، عملية المصبوغة مريحة، كما الأجسام المضادة الثانوية غير مطلوبة. وهنا، هو تصور عملية صبغة الفلورسنت الدخول في الخصية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

جميع التجارب على الحيوانات المؤداة أقرتها لجنة جامعة نانجينغ الطبية. وأبقى تحت ظروف كبيرة التي تسيطر عليها الفئران الذكور C57BL/6 وزودت بالغذاء والماء.

1-الأعمال التحضيرية

  1. Microinjection الشعيرات الدموية
    1. استخدام microinjection الشعيرات الدموية مع القطر الخارجي، ديميتر الداخلية، وطول من 1.0 مم و 0.8 ملم 10.0 سم، على التوالي.
    2. سحب الزجاج الشعيرات الدموية مع ساحبة شعرية (الشكل 1A). اختبار وقم بضبط الإعدادات حسب الجهاز ساحبة الشعرية الذي يتم استخدامه.
    3. كسر نصائح ماصة بالملقط للحصول على الشعيرات الدموية ليبلغ قطرها 50 ميكرومتر في التلميح.
      ملاحظة: قد تكون النصائح وقتاً طويلاً لاختراق في الخصية.
    4. شحذ الحافة بزاوية 30 درجة باستخدام بيفيلير ميكروبيبيتي (الشكل 1).
  2. الكواشف
    1. تحضير الصوديوم بينتوباربيتال 1%: حل بينتوباربيتال الصوديوم 100 مغ في 10 مل من المحلول الملحي مخزنة الفوسفات (PBS) (الخطوة 2.3.3).
    2. إعداد 10 ملغ/مل الاينولين-فيتك: حل الاينولين-فيتك 1 ملغ في 100 ميكروليتر من برنامج تلفزيوني (الخطوة 2.1.6).
    3. إعداد بارافورمالدهيد 4%: حل بارافورمالدهيد (PFA) ز 4 في 100 مل من برنامج تلفزيوني (الخطوة 2.3.3).
    4. إعداد السكروز 30%: حل السكروز الجيل الثالث 3g في 10 مل من برنامج تلفزيوني (الخطوة 2.3.4).
    5. إعداد 0.1% كلوريد الكادميوم: حل كلوريد الكادميوم ملغ 10 في 10 مل من برنامج تلفزيوني (الخطوة 2.1.1).

2-أساليب

  1. إعداد التخدير وبريسورجيري
    1. وزن عمرها 8 الأسبوع C57BL/6 ذكور الفئران وحساب الجرعة اللازمة من كدكل2. علاج مجموعة من الفئران (n = 3) مع كدكل2 (يتعلق 5 مغ/كغ، القائمة) لمد 3 قبل الجراحة. التعامل مع مجموعة أخرى من الفئران الذكور C57BL/6 8 عاماً في الأسبوع (n = 3) مع برنامج تلفزيوني كعنصر التحكم.
    2. إجراء عمليات جراحية تحت ظروف معقمة باستخدام المحاقن المعقمة وابرة ومقص وملقط.
    3. إعداد حل العامل التخدير الطازجة. الجرعة المطلوبة من التخدير 70 ملغ من الصوديوم بينتوباربيتال/كغ وزن الجسم. في المتوسط، يزن ماوس C57BL/6 الكبار في 8 أسابيع عمر ~ 25 زاي، الذي يقابل ميكروليتر 175 1% بينتوباربيتال الصوديوم (ملغ 1.75 في الماوس).
      ملاحظة: يتم حل بينتوباربيتال الصوديوم في المحلول الملحي المعقم مخزنة الفوسفات (PBS). الحل هو تصفية بواسطة 0.22 أم وحدة التصفية قبل استخدامها.
    4. تنظيف المنطقة للجراحة مع الإيثانول 75% وتغطية المنطقة بمنشفة نظيفة أنسجة.
    5. قم بتشغيل سخان ترموستاتي وضبط درجة الحرارة إلى 37 درجة مئوية.
    6. إعداد حل عملي الاينولين-فيتك (10 مغ/مل) في اليوم لعملية جراحية.
  2. إجراء العمليات الجراحية
    1. وزن عمرها 8 الأسبوع C57BL/6 ذكور الفئران وحساب الجرعة اللازمة للتخدير.
    2. إجراء حقن داخل الصوديوم بينتوباربيتال استخدام المحاقن المعقمة 1 مل. ضع الماوس في قفص نظيف.
    3. مراقبة استجابة منعكس العين ونمط التنفس من الماوس للتأكد من أن ذلك يتم تحت التخدير الكامل.
      ملاحظة: عادة، 10-15 دقيقة ضرورية حتى يتم تخديره الماوس عميق، مع الافتقار التام إلى استجابة قرصه أخمص القدمين والحفاظ على التنفس بطيء وثابت.
    4. حرك الماوس إلى منطقة العملية وتغطية منطقة العين مع ورقة الأنسجة رطبة لتجنب جفاف أثناء التخدير (الشكل 2A).
    5. حلق شعر البطن لها مع آلة حلاقة وتطهير منطقة الجراحة مع الإيثانول 75%.
    6. مع مقص حاد، جعل شق جلد 1 سم فوق الغدد بريبوتيال لفضح جدار البطن. رفع جدار البطن بالملقط الصغيرة وشق 0.5 سم لفضح التجويف الصفاقى (الشكل 2).
    7. استخدام الملقط للبحث عن منصات الدهون حول البربخ والخصية. بعناية سحب منصات الدهون لفضح الخصية المرفقة وضوح (الشكل 2 و 2D). عادة ما تعمل على الخصية واحدة في وقت واحد.
      ملاحظة: تجنب لمس منصات الدهون والخصية بيديه.
    8. ضع ورقة (9 سم في القطر) تحت منصات الدهون والخصية (الشكل 2).
    9. حقن ماصة microinjection فيتك الاينولين وتوصيله إلى وحدة ميكرومانيبولاتور (الشكل 1). برفق إدراج ماصة microinjection تحت albuginea الغلالة وتحميل ما مجموعة 20 ميكروليتر من الاينولين فيتك في إينتيرستيتيوم للخصية (الشكل 2E و 2F).
      ملاحظة: بعناية كساد ماصة microinjection لتجنب نقله.
    10. رصد حركة الاينولين-فيتك في الخصية (الشكل 2).
    11. فورا مرة أخرى الخصية في تجويف البطن بعد انتهاء الحقن.
    12. كرر الإجراء في الخصية كونترالاتيرال. يتم حقن هذه الخصية مع 20 ميكروليتر من برنامج تلفزيوني كعنصر تحكم.
    13. إغلاق الجلد خياطة الجروح جراحية وتحريك الماوس إلى لوحة حرارة من سخان ترموستاتي (الشكل 1B). إدارة جرعة مقدارها 1 مغ مسكن (البوبرينورفين) كل 1 كغم من وزن الجسم عن طريق الحقن تحت الجلد.
  3. الحصاد في الخصيتين وإعداد الأجزاء المجمدة
    1. euthanize الماوس المستلم بخلع عنق الرحم وفقا لرعاية الحيوان 40 دقيقة بعد الحقن، واستخدام المبادئ التوجيهية.
    2. استخدام زوج من مقص حاد لجمع الخصيتين. وضع الخصيتين في 1 مل من برنامج تلفزيوني المثلج لإزالة أي تلوث الدم.
    3. إصلاح الخصيتين في بارافورمالدهيد 4% (PFA) في 4 درجات مئوية على 12-24 h. تجاهل 4% منهاج عمل بيجين وغسل الأنسجة 3 x مع 1.5 مل من برنامج تلفزيوني 1% عند درجة حرارة الغرفة.
    4. يذوي الأنسجة في السكروز 30% بين عشية وضحاها. وضع في الخصية في الإطار التضمين وتغطية الأنسجة بدرجة الحرارة المثلى قطع مجمع (OCT). بعد أن يتم تجميد OCT، ملء هذا الإطار التضمين مع أكتوبر حيث أن الخصية كلها يمكن أن تكون مغطاة باكتوبر.
    5. قطع المقاطع العرضية 5 ميكرومترات-سميكة، المجمدة الخصيتين في كريوستات في-20 درجة مئوية، والسماح لهم بالانضمام إلى شرائح المجهر.
      ملاحظة: إعادة تجميد الأنسجة المضمنة في الثلج الجاف قد يزيد صلابة للقطع.
  4. طلب الصورة
    1. ضع الشرائح في مربع هوميديفيد. الحارة الشرائح في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق.
    2. تغسل الأجزاء 3 x مع تريس مخزنة المالحة (تبس) في درجة حرارة الغرفة.
    3. أيردري لمدة 5 دقائق في الظلام. تمحو أي تبس المتبقية مع ورقة خالية من الغبار.
    4. تغطية المقاطع العرضية مع 4 ', 6-دياميدينو-2-فينيليندولي (DAPI). ضع ساترة مقلوب على شريحة مجهر.
    5. الحصول على الصور باستخدام مجهر [كنفوكل]. إجمالي 20 X التكبير يكفي بوجه عام للكشف عن إشارة الزاهية الفلورسنت.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

الإعداد التجريبية لإجراء فحص سلامة BTB يرد في الشكل 1. سحب وشحذ microinjection الشعيرات الدموية مع ساحبة الشعرية وبيفيلير ميكروبيبيتي، على التوالي (الشكل 1A وج 1). سخان ترموستاتي ومعدات microinjection موضحة في الشكل 1 باء و دال 1.

الشكل 2 يعرض بعض الخطوات الرئيسية لحقن فيتك الاينولين. استخدام مقص لجعل شق صغير بعد أن خضع الماوس التخدير الكامل (الشكل 2 ألف و 2 باء). تتعرض الخصية الماوس وحقنها بصبغة الفلورسنت استخدام microinjection ماصة (الشكل 2 - 2 غ).

يعرض الشكل 3 صور نموذجية لإجراء دراسة لتقييم سلامة BTB استناداً فحص في فيفو . الفئران في كدكل2-يتم حقن مجموعة العلاج بجرعة حادة من كدكل2 (يتعلق 5 مغ/كغ، والقائمة) لمدة 3 أيام. نشر فيتك الاينولين من حجرة القاعدية محظور بواسطة هيكل الفيرمونت في مجموعة مراقبة، بينما البناء BTB معطوب والممرات inulin (الفلورية الخضراء) في المقصورة قمي من ظهارة سيمينيفيروس في كدكل2 -مجموعة العلاج. أجزاء الخط الأبيض تشير إلى المسافة قبل الاينولين من الغشاء الطابق السفلي (الشكل 3A). يتم تحديد مدى الضرر BTB المسافة. تجويف بيضاوي، هو دائرة نصف قطرها متوسط أقصر وأطول مسافة من حجرة القاعدية إلى مركز أنبوب. نقوم باستخدام هذه نسبة كمؤشر لمدى الضرر BTB:
Equation
هنا، دالاينولين هو المسافة التي سافر بها الاينولين من حجرة القاعدية ومدالشعاع هو نصف قطر أنبوب سيمينيفيروس نفسه (الشكل 3B). BTB سليمة في Rictorfl/+ الفئران بحظر نشر الاينولين عبر الحاجز لدخول المقصورة قمي. وفي المقابل، لدى الفئران Rictorككو BTB الشبهة السماح بنشر inulin (الشكل 3).

Figure 1
رقم 1: المعدات للماوس microinjection الخلالي الخصية. (أ) سحب الزجاج الشعيرات الدموية مع ساحبة شعرية عمودية. (ب) يظهر هذا الفريق سخان ترموستاتي. (ج) يتم شحذ النصائح باستخدام بيفيلير ميكروبيبيتي. (د) وحدة microinjection يشمل مضخة microinjection ومجهر ستيريو. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 2
الشكل 2: صور الممثل إجراء microinjection الخلالي الخصية في فيفو في ماوس. (أ) هذا الفريق يوضح إزالة شعر البطن بماكينة حلاقة. (ب) هذا الفريق يظهر شق جدار البطن 0.5 سم لفضح التجويف الصفاقى. (ج) سحب الدهون منصات تعريض الخصية المرفقة وضوح. (د) هذا الفريق يوضح موقف الخصية والبربخ. (ه) هذا الفريق يوضح موقف ماصة microinjection. (و) إدراج ماصة microinjection في إينتيرستيتيوم للخصية. (ز) هذا الفريق يظهر الخصية مع حقنه ناجحة إلى إينتيرستيتيوم للخصية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 3
الشكل 3: دراسة لتقييم سلامة BTB استناداً إلى في فيفو وظيفية مقايسة. الفئران الذكور البالغين (n = 3 في مجموعة العلاج والسيطرة على المجموعة) يتم التعامل مع كدكل2 (يتعلق 5 مغ/كغ، والقائمة) لمدة 3 أيام (مجموعة العلاج) أو تعامل مع برنامج تلفزيوني لمدة 3 أيام (مجموعة المراقبة). الاينولين-فيتك (الفلورية الخضراء) يقع بالقرب قاعدة أنبوب سيمينيفيروس في المجموعة عنصر التحكم، بينما فيتك الاينولين يبدأ مرور عبر الفيرمونت في مجموعة العلاج CdCl2. (أ) في هذا الفريق، تبين أجزاء الخط الأبيض يغزو المسافة الاينولين-فيتك. أشرطة مقياس 20 ميكرومتر. (ب) البيانات من فحوصات سلامة BTB مبينة في هذا الرسم البياني، التي تظهر المسافة التي سافر من قبل inulin (دInulin) مقابل شعاع أنبوب نفس (دRadius). الأنابيب ثمانين يتم اختيارها عشوائياً. ف < 0.001 (الطالب t-اختبار). (ج) الفيرمونت سلامة مهددة في الخصيتين فئران Rictorككو . في Rictorككو الماوس الأنابيب، تخترق الاينولين عمق ظهارة سيمينيفيروس، الوصول إلى أنبوب التجويف. أشرطة مقياس 50 ميكرومتر. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

يأخذ مكانة في ظهارة سيمينيفيروس الحيوانات المنوية وهو عملية مرتبة للغاية والدينامية التي تحكمها الخلايا الجرثومية وخلايا جسدية (مثلاً، خلايا سيرتولي)13. هيكل الفيرمونت، الذي يتكون من خلايا سيرتولي، يقسم ظهارة سيمينيفيروس القاعدية وحجرة قمي. تنمية الخلايا الجرثومية فرداني وهو يحدث في حجرة قمي الذي يشكل حاجز مناعي14.

يمكن أن يثير الشبهة الدالة الفيرمونت سميات أو بسبب وجود عيوب في الجينات المشاركة في تشكيل الوصلات الخلية، مما يؤدي إلى العقم عند الذكور. من أجل فحص سلامة الفيرمونت، في المختبر سيرتولي قد أنشئ نظام الثقافة الخلية غير قادرة على تشكيل ظهارة الفنية عن كثب أن يحاكي الفيرمونت في فيفو15. ويوفر هذا النظام في المختبر نموذج بسيط لدراسة هيكل ووظيفة من تقاطعات خلية سيرتولي. ومع ذلك، خلايا سيرتولي معزولة عن الخصية ومثقف في المختبر محدودة فيما يتعلق بالحيوان العمر وخلية الكثافة15،16. وبالإضافة إلى ذلك، رصد نقاء خلايا سيرتولي ووجود أولتراستروكتوريس يجب أن تكون محاكاة BTB ميزات17. الأهم من ذلك، بنية BTB والنزاهة تتطلب أيضا التفاعلات بين الخلايا الجرثومية وخلايا سيرتولي، كما يتضح من الدراسات الجرثومية خلية-الخاصة بالفئران متحولة فارغة مع BTB العيوب10،،من1819. وهكذا، خلق ثقافة المشارك من الخلايا الجرثومية سيرتولي الخلايا في المختبر للغرض من لخص كل وظيفة حاسمة في فيفو من الفيرمونت ما زال تحديا11،20.

هذا البروتوكول وصف أسلوب تقييم BTB السلامة في فيفو بالحقن الاينولين-فيتك، الذي عدل من إجراء تشن et al. 21-البروتوكول يصف تخدير الفئران الذكور، والتعرض التجويف الصفاقى، microinjection صبغ إلى إينتيرستيتيوم الخصية، حصاد الخصيتين وقصها إلى الأجزاء المجمدة، والحصول على الصور. لخاتمة ناجحة، ينبغي أن يلاحظ عدة خطوات. أولاً، من المهم استخدام جرعة مناسبة من التخدير، التخدير العميق شديدة قد تسبب الموت. أيضا، ينبغي أن لا يكون طول غيض حقن الشعرية طويلة جداً؛ خلاف ذلك، لا يمكن اختراق الماصة في الخصية.

يمكن استخدام الإجراء المعروض هنا لتحليل دور الفيروسات أو السموم الكيميائية أو مرشح البروتينات المشاركة في تنظيم الفيرمونت. هذا التحليل حساسة وموثوق بها، وموجودا لمراقبة سلامة BTB فيفو.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

هذا العمل كان يدعمها R مفتاح الوطنية & د البرنامج الصيني (2016YFA0500902)، الوطني العلوم الطبيعية مؤسسة في الصين (31471228, 31771653)، ومؤسسة العلوم جيانغسو "العلماء الشبان البارزين" (BK20150047)، العلوم الطبيعية مؤسسة من مقاطعة جيانغسو (BK20140897، 14KJA180005) والبرنامج المبتكرة والمشاريع الخاصة من مقاطعة جيانغسو إلى K.Z.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Capillary puller  SUTTER INSTRUMENT (USA) P-97
10x PBS Hyclone (USA) SH30258.01 dilution to 1× in ddH2O
4’,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) Sigma (USA) F6057
Adhesion microscope slides CITOGLAS (China) 80312-3161
Cadmium chloride Sigma (USA) 655198-5G
Confocal microscope Zeiss (Germany) LSM700
Dust-free paper Kimberly-Clark (USA) 34120
Inulin-FITC Sigma (USA) F3272
Microinjection capillaries Zhengtianyi (China) BJ-40 1.0 mm × 0.8 mm  × 100 mm
Micropipette beveler NARISHIGE (JAPAN) EG-400
OCT SAKURA (JAPAN) 4583
Paraformaldehyde Sigma (USA) P6148
Pentobarbital sodium Merck (Germany) P11011
Shaver  Yashen (China)
Stereo microscope Nikon (JAPAN) SMZ1000
Sucrose  Sangon Biotech (China) A610498
Surgical instruments Stronger (China) scissors, forceps, needle holder
Syringe KDL (China) 20163150518 0.45 mm × 0.16 mm RW LB
thermostatic heater KELL (Nanjing, China) KEL-2010
10x TBS, pH 7.6
0.2 M Tris Sangon Biotech (China) A600194
1.37 M Nacl Sangon Biotech (China) A610476

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Mruk, D. D., Cheng, C. Y. Sertoli-Sertoli and Sertoli-germ cell interactions and their significance in germ cell movement in the seminiferous epithelium during spermatogenesis. Endocrine Reviews. 25, (5), 747-806 (2004).
  2. Wen, Q., et al. Transport of germ cells across the seminiferous epithelium during spermatogenesis-the involvement of both actin- and microtubule-based cytoskeletons. Tissue Barriers. 4, (4), e1265042 (2016).
  3. Wang, C. Q., Cheng, C. Y. A seamless trespass: germ cell migration across the seminiferous epithelium during spermatogenesis. Journal of Cell Biology. 178, (4), 549-556 (2007).
  4. Fijak, M., Meinhardt, A. The testis in immune privilege. Immunological Reviews. 213, 66-81 (2006).
  5. O'Bryan, M. K., Hedger, M. P. Inflammatory Networks in the Control of Spermatogenesis Chronic Inflammation in an Immunologically Privileged Tissue? Molecular Mechanisms In Spermatogenesis. 636, 92-114 (2008).
  6. Li, N., Wang, T., Han, D. Structural cellular and molecular aspects of immune privilege in the testis. Frontiers in Immunology. 3, 152 (2012).
  7. Mruk, D. D., Cheng, C. Y. The Mammalian Blood-Testis Barrier: Its Biology and Regulation. Endocrine Review. 36, (5), 564-591 (2015).
  8. Govero, J., et al. Zika virus infection damages the testes in mice. Nature. 540, (7633), 438-442 (2016).
  9. Jenabian, M. A., et al. Immune tolerance properties of the testicular tissue as a viral sanctuary site in ART-treated HIV-infected adults. AIDS. 30, (18), 2777-2786 (2016).
  10. Holembowski, L., et al. TAp73 is essential for germ cell adhesion and maturation in testis. Journal Of Cell Biology. 204, (7), 1173-1190 (2014).
  11. Legendre, A., et al. An engineered 3D blood-testis barrier model for the assessment of reproductive toxicity potential. Biomaterials. 31, (16), 4492-4505 (2010).
  12. Setchell, B. P., Waites, G. M. Changes in the permeability of the testicular capillaries and of the 'blood-testis barrier' after injection of cadmium chloride in the rat. Journal of Endocrinology. 47, (1), 81-86 (1970).
  13. Griswold, M. D. The central role of Sertoli cells in spermatogenesis. Seminars in Cell & Developmental Biology. 9, (4), 411-416 (1998).
  14. Cheng, C. Y., Mruk, D. D. The blood-testis barrier and its implications for male contraception. Pharmacological Reviews. 64, (1), 16-64 (2012).
  15. Mruk, D. D., Cheng, C. Y. An in vitro system to study Sertoli cell blood-testis barrier dynamics. Methods Molecular Biology. 763, 237-252 (2011).
  16. Orth, J. M. Proliferation of Sertoli cells in fetal and postnatal rats: a quantitative autoradiographic study. Anatomical Record. 203, (4), 485-492 (1982).
  17. Lee, N. P. Y., Mruk, D., Lee, W. M., Cheng, C. Y. Is the cadherin/catenin complex a functional unit of cell-cell actin-based adherens junctions in the rat testis? Biology of Reproduction. 68, (2), 489-508 (2003).
  18. Bai, S., et al. A Germline-Specific Role for the mTORC2 Component Rictor in Maintaining Spermatogonial Differentiation and Intercellular Adhesion in Mouse Testis. Molecular Human Reproduction. 24, (5), 244-259 (2018).
  19. Korhonen, H. M., et al. DICER Regulates the Formation and Maintenance of Cell-Cell Junctions in the Mouse Seminiferous Epithelium. Biology of Reproduction. 93, (6), 139 (2015).
  20. Loir, M. Trout Sertoli cells and germ cells in primary culture: I. Morphological and ultrastructural study. Gamete Research. 24, (2), 151-169 (1989).
  21. Chen, H., et al. Monitoring the Integrity of the Blood-Testis Barrier (BTB): An In Vivo Assay. Methods in Molecular Biology. 1748, 245-252 (2018).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics