Romanen objekt gjenkjenning og objektet plassering opptreden i mus på et budsjett

Behavior
 

Summary

Her gir vi en protokoll som inneholder omfattende instruksjoner for økonomisk etableringen murine objektet plassering og romanen objektet anerkjennelse atferdsmessige testing, inkludert design, pris og bygging av nødvendig utstyr samt gjennomføring av atferdsmessige testing, innsamling og analyse.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Denninger, J. K., Smith, B. M., Kirby, E. D. Novel Object Recognition and Object Location Behavioral Testing in Mice on a Budget. J. Vis. Exp. (141), e58593, doi:10.3791/58593 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Ethologically relevante atferdsmessige testing er en kritisk komponent i enhver studie som bruker musen modeller for å studere kognitive effekten av ulike fysiologiske eller patologisk endringer. Objektet plassering oppgaven (OLT) og romanen objekt gjenkjenning oppgaven (NORT) er to effektiv opptreden aktiviteter brukes vanligvis til å vise funksjonen og relativ helsen til bestemte hjernen regioner involvert i minnet. Mens begge testene utnytte den iboende preferansen for mus for nyheten å avsløre minne for tidligere støtt objekter, OLT evaluerer primært romlige lærer som avhenger svært mye av hippocampus aktivitet. Nordsjøen, evaluerer derimot ikke-romlige læring av objektidentitet, som bygger på flere områder av hjernen. Begge aktivitetene krever en åpne-feltet-testing arena, objekter med tilsvarende egenverdi mus, riktig miljø signaler og video utstyr og programvare. Kommersielt tilgjengelige systemer, kan mens praktisk, være kostbart. Dette manuskriptet detaljer en enkel, kostnadseffektiv metode for å bygge arenaene og sette opp utstyret må utføre OLT og NORT. Videre beskriver manuskriptet en effektiv testing protokoll som inneholder både OLT og NORT og inneholder typiske metoder for datainnsamling og analyse, samt representant resultater. Vellykket gjennomføring av testene kan gi verdifull innsikt i funksjonen minne av ulike mus modellsystemer og vurdere de underliggende nevrale områdene som støtter disse funksjonene.

Introduction

Effektiv kognitive tester isolere og vurdere nevrale funksjonen til bestemte hjernen regioner ved å undersøke atferd i et kontrollert miljø1. Hos mennesker, er bestemte oppgaver utformet for å vurdere målrettet hjernen områder, for eksempel Wisconsin kortet sortering aktivitet for prefrontal funksjon eller sammenkoblede kolleger læring test av Cambridge nevropsykologiske tester automatisert batteri ( CANTAB) for hippocampus funksjon2,3. Disse testene å studere funksjonene til bestemte hjernen regioner i mennesker ved å vurdere atferd som følge av nevrale aktiviteten i disse regionene. Målet av mest biomedisinsk forskning er forbedring av helse; etisk men mange studier av hjernefunksjon i helse og sykdom kan ikke utføres med menneskelige deltakere. For studier som ikke kan bruke menneskelige deltakere, er små gnagere som mus ofte modell av valg. Bruke musen modeller gir direkte kontroll over eksperimentell manipulasjoner inkludert endring av genuttrykk, induksjon av skade eller selv modulering av krets aktivitet gjennom optogenetic teknikker. Atferdsmessige testing av mus, ligner menneskelige testing, har som mål å vurdere effekten av eksperimentelle variabler på hjernefunksjon ved å måle atferd som stoler på bestemte områder.

Hippocampus er en grunnleggende struktur for minne formasjon i mennesker og Red4. Mer spesifikt, spiller hippocampus en viktig rolle i deklarativ minne som involverte relasjonell representasjoner, men ikke minne, som er avhengig av motor sentre av hjernen4. Funksjonen hippocampus minnet har vært fokus for studien over mange felt av nevrovitenskap fordi det er utsøkt sensitive til forstyrrelsene. Negativ forstyrrelser spenner fra langvarig stress og aldring beslag og hjerneslag er forbundet med hippocampus skade5. Derimot forbedre positivt tiltak, som sosial interaksjon, fysisk miljømessig berikelse eller trening, hippocampus funksjon6,7,8. Gnager studier med riktig testing hippocampus minne kan avsløre innsikt i mobilnettet og molekylære meglere minne samt effekten av ulike miljømessige tiltak på hippocampus funksjon.

I Red, er flere tester utviklet for å studere hippocampus-avhengige læring og hukommelse9,10,11. De kan grovt deles inn i oppgaver som krever en stimulans med emosjonelle valence å lokke fram en endring i atferd og oppgaver på den gnagere preferansen å undersøke romanen stimuli11. Kontekstuelle frykt condition, for eksempel par en ubehagelig stimulans (fot sjokket) med en miljømessig sammenheng og senere tester minne for konteksten ved å måle frykt-indusert fryse atferd9,11. Morris vann labyrinten og tørr motpart, Barnes labyrinten, bruke negative eksterne forsterkning for å fremme romlige læring4,11. I hvert tilfelle søker gnagere flykte fra en aversive situasjon, å være nedsenket i kaldt vann eller utsatt på en lyst plattform, henholdsvis. Radial arm labyrinten, derimot avhengig positiv reinforcement som dyr bruke naturlige foraging atferd kombinert med romlige hukommelse for å hente liten næringen belønninger4,11. Disse oppgavene er mye brukt og har gitt grunnleggende kunnskap om hippocampus minne. Men tester negative og positive eksterne forsterkninger eller frykt-inducing stimuli som sjokk legge en emosjonell komponent til disse atferdsmessige som i noen tilfeller kan være uønsket. For eksempel er de rygg- og ventrale hippocampi forbundet med forskjellige funksjoner, romlig minne versus emosjonelle regulering, henholdsvis12. Tester som bruker en følelsesmessig reaksjon på stimuli kanskje ikke nøyaktig gjenspeiler svekket romlig minne hvis ventrale hippocampus emosjonelle regulering funksjoner også.

OLT er en enkel og effektiv test som gir et mål på hippocampus avhengig av romlige hukommelse13. Aktiviteten er avhengig av et dyr er iboende preferanse for nyheten uten ekstra eksterne forsterkning og kan derfor vanligvis unngå komplikasjoner knyttet til differensial følelsesmessige reaksjoner13. Den nåværende protokollen for OLT presenteres for mus, men det er også effektiv i rotter hvis dimensjonene av utstyret skaleres riktig. Protokollen består av acclimating en mus til en åpen-feltet-testing arena og deretter slik at det å undersøke 2 objekter i forhold til romlige miljømessige signaler. Musen er så fjernet fra arena, og under en forsinkelse (Inter prøve intervall eller ITI), en av objektene blir flyttet. Etter ITI, er musen gjeninnføres til arena og lov til å fritt utforske. Generelt, mus foretrekker nyhet, og om de husker plasseringen av objekter fra deres første eksponering, de vil bruke mer tid på å undersøke det flyttede objektet. Dyr med hippocampus lesjoner dårlig romlige innholdsrettet læring og følgelig demonstrere ingen preferanse for objekter i romanen sted14,15.

OLT kan brukes uavhengig eller i kombinasjon med en ekstra test minne som trekker på neural aktivitet fra flere områder av hjernen, romanen objekt gjenkjenning oppgaven (NORT). Nordsjøen er identisk med OLT til testfasen, når ett av objektene er erstattet av en roman objekt i stedet for å bli flyttet til en ny plassering. Som tilfellet er med OLT, foretrekker mus med god hukommelse objektene spontant undersøker romanen objektet. I motsetning til objekt plasseringen hukommelse, som avhenger svært mye av hippocampus underlag, objekt gjenkjenning minne synes å stole på en rekke områder av hjernen og involvering av hippocampus er urolig. Mange studier rapporten at hippocampus leksjonen eller inaktivering ikke påvirker romanen objektet preferanse10,13,16,17, mens andre finner det motsatte18,19. Imidlertid er det fortsatt en brukte oppgave å vurdere de generelle minnefunksjon i gnagere.

Protokollen presenteres her delineates trinnene involvert i å initiere og gjennomføre OLT og NORT, som begge bruker en åpne-feltet-testing arena. Kommersielt tilgjengelige atferdsmessige testutstyr kan være kostnadseffektive uoverkommelige, spesielt for mindre labs. Denne protokollen inkluderer design og enkle trinn for å bygge arenaer huset til minimal kostnad og uten spesialverktøy. Videre detaljer denne protokollen ideelle atferdsmessige testing området, inkludert plassering av arenaer, kontekstuell signaler og videoopptak system som setter scenen for implementering av OLT og NORT protokoller. Representant resultater for vellykket samt feil studier presenteres, understreker viktigheten av optimalisere alle materialer og prosedyrer for hver studie.

Beskrivelse Alternativet Antall
Del A: akryl ark - ugjennomsiktig hvit (0.635 cm x 40 cm x 40.64 cm) Rutet kanter 2
Del B: akryl ark - ugjennomsiktig hvit (0.635 cm x 40 cm x 41.91 cm) Rutet kanter 2
Del C: akryl ark - ugjennomsiktig hvit (0.635 cm x 41.91 cm x 41.91 cm) Rutet kanter 1
Acryllic sement (1 pkt.) NA 1
16 gauge Hypo applikator NA 1
Kombinasjon Square NA 1
HD Webcam NA 1
Videoopptak programvare NA 1
USB 2.0 skjøteledning NA 1
Kabel kanal NA 1

Tabell 1: Spesifisert liste over materialer og utstyr som kreves for atferdsdata testing.

Protocol

Følgende protokollen er godkjent av institusjonelle Animal Care og bruk Committee (IACUC) ved Ohio State University (OSU).

1. bygge arenaene

  1. Bestille materialer i tabell 1: fem ark akryl, akryl sement og en 16 G hypo applikatoren.
  2. Ha riktig sikkerhetsutstyr i henhold til produsentens instruksjoner, som kan inkludere øye, hud og andre typer beskyttelse.
  3. Fjern det beskyttende papir belegget fra akryl ark.
  4. Tørr passer alle materialer å bekrefte at størrelser er riktig (figur 1A).
  5. Montere og Legg i sprøyten med akryl sement.
  6. Juster langsiden av utvendig vegg (del B) med en overkant av base (del C) og sikre at de er vinkelrett til hverandre ved hjelp av en kombinasjon eller maskinist firkant.
  7. Sprøyten, bruk en liten og jevn perle sement direkte på hjørnet av de to delene sammen.
  8. Hold de to stykker (deler B og C) på plass før de blir satt (ca 5 min).
    Merk: Vanligvis de være 80% herdet i 24, men forsamlingen kan fortsette etter 5 min.
  9. Gjenta trinn 1.5-1.7 med andre yttervegg (del B) hos samme basen.
  10. Fest de to indre veggene (del A), en om gangen, til sokkelen med trinnene 1.5-1.7.
  11. I tillegg bruker sprøyten gjelder en liten og jevn perle av sement direkte til hjørnet blir nå formet av yttervegg (del B) og indre vegg (del A).
  12. Holde disse brikkene på plass for 5 min.
  13. Etter 24 48 h, fortsette å sette opp opptreden testing miljøet.

2. sette opp opptreden Testing miljøet og utstyr

  1. Plass miljømessige signaler (som beskrevet under diskusjon) overfor hverandre og vender livet i testing området (figur 1B).
  2. Ordne de fire testing arenaene i en 2-av-2 måte enten på gulvet eller solid bord på riktig avstand til signaler og kameraet å maksimere visuell skriving til mus (figur 1B).
  3. Kontroller siktlinje med en meter pinne støttet fra hver arena etasje over muren mot signaler for å bekrefte at disse avstandene mellom arenaene og signaler er riktig.
  4. Avgjøre optimal optisk bane som lar video dokumentasjon av alle fire arenaer ved å justere høyden på kameraet eller høyden på tabellen. (Figur 1B).
  5. Koble kameraet til en USB-forlengelseskabel.
  6. Bruke kabel raceways, Kjør kabelen over taket og ned en vegg på en datamaskin kjører video fange programvare.
  7. Skjule datamaskinen bak en gardin som vil skille musene i testing området forsker (figur 1 c).
  8. Montere 4 minst 3 ulike objekter som er ca 2-5 cm i lengde og bredde og opp til 10 cm i høyden å benytte til tester (figur 1 d).

Figure 1
Figur 1: atferdsmessige testing forberedelse. (A) åpen-feltet-testing arena montering del A tilsvarer den indre veggen, del B som ytterveggen og del C som base. Ferdig arena har to ytterveggene (deler B) som kjører hele kanten av base og to indre vegger (deler A) som passer mellom de ytre veggene på tilstøtende kantene av base (del C). Alle vegger vil hvile på basen. (B) representant arrangement av arenaer på en 0.62 m høy tabell, 60 x 90 cm miljømessige Stikkordene, lys og et kamera for et testområde som lar erobringen av alle fire arenaer samtidig. (C) en gardin skjuler eksperimentator og datamaskinen systemet fra mus under rettssaker. Overhead lysene er på for å ta bildet, men under testing bare gulv lamper er på. Også, en av de miljømessige signaler er fjernet for dette fotografiet av området testing, men under testing, finnes det en fjerde stikkordet foran arenaene, overfor alle svart stikkordet bak tabellen. (D) en representant objekt (og hersker for skala) som er egnet for OLT eller NORT testing med mus. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

  1. Validere disse objektene.
    1. Få minst 8 vill-type mus i sex, belastning og aldersgruppe representant for eksperimentell musene som brukes (f.eks 6 til 9 uke gamle kvinnelige og mannlige C57Bl/6 mus).
    2. Håndtere alle mus daglig i 1 min i løpet av 3-5 dager før testing.
    3. Dele mus i grupper på 4, og hvis de ikke allerede enkeltvis ligger, flytte dem til enkelte ren holder burene.
    4. Bringe dem inn i testing rom og tillate dem å acclimate i minst 30 min.
      Merk: Tilstedeværelsen av eksperimentator i rommet for disse 30 min vil redusere stress på mus under aktiviteten, spesielt hvis eksperimentator er mannlige20.
    5. Når acclimation er gjort og eksperimentator er klar til å starte, kan du begynne å spille inn videoen.
    6. Plasser hver musen mot veggene i ett hjørne av arenaen (kalt hjørnet utgivelsen) (figur 2A).
    7. Tillate at mus til å utforske arenaene fritt for 10 min.
    8. Stoppe innspillingen video.
    9. Tilbake mus til merdene ren holder for en varighet på 20 min.
    10. Rengjør anbefalt alle arenaer med dyr anlegget rengjøring metoder, slik som tørke med 70% etanol å minimere olfactory signaler før neste bruk.
    11. Bruke dobbeltsidig tape, påføre 2 forskjellige objekter nær 2 ikke-utgivelsen hjørnene slik at objektene er balansert i arena og 6 x 6 cm2 fra hver vegg av det hjørnet (figur 2B).
    12. Starte innspillingen av videoen.
    13. Plass hver musen mot veggene i hjørnet utgivelsen.
    14. Kan mus å undersøke arena og objekter fritt for 10 min.
    15. Stoppe innspillingen video.
    16. Sted mus tilbake i burene sine rene holder for en varighet på 20 min.
    17. Rengjør anbefalt alle arenaer og objekter med dyr anlegget rengjøring metoder som tørke med 70% etanol å minimere olfactory signaler.
    18. Gjenta trening forsøk med 2 nye objekter festet på samme sted til alle objekter (minst tre forskjellige objekt hvis både OLT og NORT) har blitt testet med hvert museklikk.
    19. Utelate objekter at mus å sitte objekt.
    20. Analysere undersøkelse av hver mus med hvert objekt etter trinn 4.
    21. Utelat objekter som har en negativ eller positiv egenverdi.

3. gjennomføre atferdsmessige testen

  1. En uke før testing: familiarisering til enkeltpersoner gjennomføre atferdsmessige testene
    1. Håndtere voksen 6 til 9 uke gamle kvinnelige og mannlige C57Bl/6 mus daglig i 1 min i løpet av 3-5 dager før testing.
  2. Dag 1: habituering økter
    1. Dele mus i grupper på 4, og hvis de ikke allerede enkeltvis ligger, flytte dem til enkelte ren holder burene.
    2. Bringe dem i til testing rom og tillate dem å acclimate til testing rom i minst 30 min.
      Merk: tilstedeværelse av eksperimentator i rommet for disse 30 min vil redusere stress på mus under aktiviteten, spesielt hvis eksperimentator er mannlige20.
  3. Når acclimation er gjort og eksperimentator er klar til å starte, kan du begynne å spille inn videoen.
  4. Plasser hver musen i arena (en mus per arena) mot veggene i hjørnet utgivelsen (figur 2A).
  5. Tillate at mus til å utforske arenaene fritt for 6 min.
  6. Stoppe innspillingen video.
  7. Tilbake mus til merdene ren holde under Inter prøve intervall (ITI).
  8. Rengjør anbefalt alle arenaer med dyr anlegget rengjøring metoder som tørke med 70% etanol å minimere olfactory signaler.
  9. Gjenta trinn 3.3-3.9 to ganger for totalt 3 habituering økter hver musen.
  10. Returnere alle mus til burene sine hjem.
  11. Rengjør alle arenaer med dyr anlegget anbefalt rengjøring metoder som tørke med 70% etanol å minimere olfactory signaler før bruk neste dag.
  12. Dag 2: trening rettssaken, OLT NORT
    Merk: Nordsjøen er en valgfri test.
    1. Etter 24 timer, ta den samme gruppen av mus i til testing rom og tillate dem å acclimate til testing rom i minst 30 min som gjort før habituering øktene på gårsdagen.
    2. Gjennomføre en trening prøveversjon benytter 2 objekter i arenaen (figur 2B).
      1. Bruke dobbeltsidig tape, feste objekter 6 x 6 cm2 fra 2 ikke-utgivelsen hjørnene slik at de er balansert i arena.
      2. Starte innspillingen av videoen.
      3. Plass hver musen mot veggene i hjørnet utgivelsen som gjort under habituering-økter.
      4. Kan mus å undersøke arena og objekter fritt for 10 min.
      5. Stoppe innspillingen video.
      6. Sted mus tilbake i burene sine rene holder for en ITI 20 min.
      7. Rengjør anbefalt alle arenaer og objekter med dyr anlegget rengjøring metoder som tørke med 70% etanol å minimere olfactory signaler.
    3. Utføre OLT.
      1. Flytte ett av objektene som brukes i trening prøve en ny ikke-utgivelsen hjørne og feste objektet 6 cm fra hver vegg av det hjørnet med dobbeltsidig tape (figur 2C).
        Merk: Det andre objektet bør forbli der det var under treningen prøve.
      2. Starte innspillingen av videoen.
      3. Plass hver musen mot veggene i hjørnet utgivelsen.
      4. Kan mus å undersøke objektene i 10 min.
      5. Stoppe innspillingen video.
      6. Sted mus tilbake i burene sine rene holder for en ITI 20 min.
      7. Rengjør anbefalt alle arenaer og objekter med dyr anlegget rengjøring metoder som tørke med 70% etanol å minimere olfactory signaler.
    4. Utføre Nordsjøen.
      1. Erstatt objektet ikke ble flyttet under OLT romanen objekter med og påføre romanen objektet 6 cm fra to veggene i hjørnet med dobbeltsidig tape (figur 2D).
      2. Starte innspillingen av videoen.
      3. Plass hver musen mot veggene i hjørnet utgivelsen.
      4. Kan mus å undersøke objektene i 10 min.
      5. Stoppe innspillingen video.
      6. Plasser mus i burene sine hjem.
      7. Rengjør anbefalt alle arenaer og objekter med dyr anlegget rengjøring metoder som tørke med 70% etanol å minimere olfactory signaler før neste bruk.

Figure 2
Figur 2: Arena-konfigurasjon for prøvelser. (A) åpen-feltet testing arena uten objekter for habituering økten. Svarte pilen viser et utgivelsen hjørne. Dette hjørnet bør være samme relative plassering i hver arena og være konsekvent for alle mus testes og hver prøveversjon. (B) For trening rettssaken, to forskjellige objekter er festet til feltet åpen på 6 x 6 cm fra sine respektive vegger. (C) For the OLT, ett objekt flyttes til en ny plassering, også 6 x 6 cm fra vegger og ikke hjørnet utgivelsen. (D) For the NORT, objektet som var ro i OLT erstattes med en roman objekt mens det flyttede objektet fra OLT er nå kjent objektet. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

4. analysere atferdsmessige testdata

Merk: Analyse av video bør ideelt fullføres av minst to uavhengige, blendet forskere.

  1. Åpne videofilen.
  2. Bruke en gjennomsiktig sirkel som gir en ramme av 2 cm rundt hvert objekt på skjermen for å finne aktiv etterforskning. Bruke en videofil bildet med en linjal i en arena for å kalibrere rutenettet.
  3. Observere virkemåten til musen og registrere tiden musen aktivt undersøker objektet, som består av nesen sin pekte på objektet på en maksimal avstand på 2 cm fra objektet.
    1. Post tidsangivelsen musen begynner å undersøke et objekt og tidsangivelsen når det slutter å undersøke objektet.
    2. Gjenta dette for begge objektene i arena for varigheten av rettssaken.
    3. Beregne kumulative tid musen undersøkt hvert objekt av trekke starttid fra stopptid for hver forekomst av objektet etterforskning, og legge til alle disse verdiene.
  4. Beregn prosent av totale etterforskning tid eller diskriminering indeksen med følgende formler:
    1. Beregner prosent av totale etterforskning tid =
      Equation 1
      Merk: Verdien 50% angir større undersøkelse av romanen sted eller objekt.
    2. Beregner diskriminering indeks =
      Equation 2
      Merk: En positiv verdi angir mer tid på å undersøke romanen objektet. En diskriminering indeks null angir lik tid med begge objektene.
  5. Grafisk representere resultater og komplett statistiske analyser bruker en t-test eller ANOVA avhengig av antall grupper som sammenlignes.

Representative Results

Figur 3 inneholder eksempler på typiske positive og negative resultater oppnådd med mannlige og kvinnelige voksen C57Bl/6 mus bruker denne protokollen6. Tolkning av OLT og NORT alltid gjelder samlede data av en gruppe (se diskusjon nedenfor). Etterforskningen tid for et enkelt museklikk kan ikke tolkes som minne eller lite minne. Men resultatene av en gruppe mus (dvs., flere eksempler) kan sammenlignes med andre grupper eller fast sjanse nivåene med statistiske tester. Under en vanlig trening rettssak viser grupper av mus ikke en betydelig preferanse i gjennomsnitt for objektene som de er begge like romanen og ikke har noen egentlig negativ eller positiv verdi til mus (figur 3A og 3B). Hvis de samlede dataene av en gruppe mus viser betydelig preferanse for ett objekt over en annen under trening, bør disse objektene ikke brukes fordi den iboende preferanse/aversjon vil forvirre resultater i påfølgende forsøk. I tillegg totale etterforskning tidspunktet for alle mus må oppfylle minimum standard (tradisjonelt sett på 20 sekunder21) og skal sammenlignes for å sikre at det er ingen planlagte forskjell i undersøkelsen som kan påvirke etterfølgende tester minne.

Under OLT gjenspeiles minne for objektet plasseringen av mus utgifter i gjennomsnitt betydelig mer enn 50% av totale etterforskning tid med det flyttede objektet (figur 3A). Hvis totale etterforskning tider personlige mus varierer mye, er resultatene bedre avbildet som en diskriminering indeks for objektene (figur 3B). Den betydelige økningen i gjennomsnittlig diskriminering indeksen i figur 3B angir at mus tilbrakte mer tid med objektet etter at den hadde flyttet. Om målt av prosent eller diskriminering indeks, antyder økningen i etterforskningen av objektet etter at den er flyttet at mus husker hvor objektet ble plassert under trening.

Siste rettssaken mot denne protokollen vurderer objekt gjenkjenning minne. Et representativt eksempel med en gruppe mus viser en høyere gjennomsnittlig prosentandel av undersøkelsen (Figur 3 c) og positiv diskriminering indeks (figur 3D) sammenlignet med fast kontrollverdiene fra 50% og 0, henholdsvis. Som med OLT dataene, hvis det er betydelig variasjon i totale etterforskning tid mellom individuelle mus, diskriminering indeksen er sannsynligvis bedre metoden å visualisere dataene. Figur 3E viser et eksempel på en 2-gruppe sammenligning i Nordsjøen og noen av de statistiske komplikasjonene som kan oppstå i disse testene (se diskusjon). Mens en utvalg med en t-test for gruppe B viser undersøkelse betydelig over 50%, testen den samme for gruppe A ikke. Dette funnet betyr ikke at A og B er forskjellige fra hverandre. For å bestemme gruppe forskjeller, må en egen ikke-parametriske Mann-Whitney test med to utvalg sammenligne grupper B til A utføres. En ikke-parametriske Mann-Whitney test med to utvalg av representant gruppedataene viser ingen signifikant forskjell (p = 0,66) mellom de to gruppene i prosent av romanen objektet etterforskning tid.

Både OLT og NORT er svært følsomme for den iboende verdien av objekter og grundig testing av objektet ekvivalens er nødvendig for å sikre at det ikke er noen iboende skjevheter som kan forvirre resultater. Viser et eksempel på upassende objektvalg figur 3F og 3 G . I en pilottest med en 4, mus viste en trend mot å bruke mindre enn 50% av etterforskningen tid med objekt A da sammen mot objekt B (figur 3F). Når disse objektene ble deretter brukt i en NORT med objekt A novel objektet og øke utvalgsstørrelsen 16, brukte mus betydelig mindre enn 50% av etterforskningen tid med objekt A (Figur 3 g). Denne aversjon mot romanen objektet er lett gjenkjennelig her som en teknisk feil i eksperimentet og eksemplifiserer derfor pilot testing av objekter for iboende preferanse/aversjon er viktig.

Figure 3
Figur 3: testing atferdsdata med vill-type voksne C57Bl/6 mus. (A) sammenligning prosent totale etterforskning tid av det flyttede objektet under treningen rettssaken mot OLT viser betydelig økning i etterforskning, etter objektet flyttet. p < 0,0001, parvis t-test. (B) representant resultater flyttede objektet gransking treningen og OLT forsøk vises som en diskriminering indeks viser tilsvarende en betydelig økning i undersøkelse av objektet etter at den er flyttet. p < 0,0001, parvis t-test. (C) prosent totale undersøkelse gang for romanen objektet i Nordsjøen viser betydelig preferanse for å undersøke romanen objektet. ** p = 0.0024, utvalg med en t-test vs. 50%. (D) representant resultater for romanen objektet etterforskning i Nordsjøen som en diskriminering indeks tilsvarende viser preferanse for å undersøke romanen objektet. ** p = 0.0024, utvalg med en t-test vs 0. (E) representant resultatene av en NORT analyse som involverer to forskjellige grupper av mus. Gruppe B avviker vesentlig fra 50% av t-test med en utvalg (** p = 0.0024), men gruppe A ikke (p = 0.5837). I en egen analyse, for å sammenligne grupper, en Mann-Whitney-test for to utvalg brukes på grunn av ujevn gruppe størrelsene og ingen signifikant forskjell i undersøkelsen er funnet (p = 0,66, ns). (F) prosent tid med et objekt under validering studier i en liten utvalgsstørrelsen viser en trend mot aversjon til objektet. p = 0.2159, t-test med en utvalg. (G) øke utvalgsstørrelsen og objektet fra (F) brukes som en roman objekt i en NORT, en betydelig aversjon til objektet blir funnet, selv om det nye objektet. * p = 0.0270, t-test med en utvalg. Dette er et eksempel på en teknisk feil i objektvalg. Dataene presenteres som betyr ± SEM. Data fra panelene C-E er tilpasset fra en tidligere publikasjon6. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Discussion

Denne protokollen gir en kostnadseffektiv metode til å gjennomføre objektet plassering og romanen objektet anerkjennelse opptreden i mus. Disse testene aktivere evalueringen av hippocampus funksjon som funksjon av andre kortikale områder, for eksempel prefrontal cortex, involvert i objektet anerkjennelse10. OLT og NORT har fordelen av å unngå stimuli med sterk emosjonell valence som kreves for Morris vann labyrinten, kontekstuell frykt condition, Barnes labyrint eller radial arm labyrint. De også unngå behovet for mat deprivasjon som kreves for radial arm labyrinten. Videre beskriver denne protokollen en enkel to-dagers testprosedyre som ikke krever omfattende eller komplisert for kjøring eller analyse. En ulempe ved disse aktivitetene er at de ikke tillater tiltak av læring eller oppkjøp. En forskjell i nyhet undersøkelse kan være dårligere lære om objekter under trening, dårligere minne for hva som ble lært eller begge deler. Totale tiden undersøker objekter er et viktig mål for utelukker noen iboende forskjeller i leting stasjonen men er ikke et mål av læring. Hvis læring er viktig for en eksperimentell spørsmål, vann labyrinten, Barnes labyrinten, eller radial arm labyrint ville trolig være å foretrekke.

Egendefinerte bygningen av atferdsmessige arenaer har potensial til å spare hundrevis av dollar og få objektet testing i finansielle rekkevidden av en rekke labs. Dette eliminerer mange hindringer og effektiviserer prosessen med fabrikasjon å gjøre huset arena bygging mer tilgjengelig for forskere uten spesialisert opplæring i akryl. Det er viktig å merke at du kjøper farget akryl ark som vil kontrast med musene, som hvite akryl for svart mus og svart akryl for hvite mus, vil lette datainnsamling og analyse, særlig når benytter kommersielt tilgjengelig analyseprogramvare. Bestilling cut til størrelse ark med "rutet kanter" eliminerer behovet for en tabell så (tabell 1), og bruk av akryl sement fjerner behovet for bore og forsenke pilot hull. Skru i festene, boring og kutte akryl ofte fører det pause, chip og sprekk den skjøre naturen. Sement er et løsemiddel, vil flyte inn i området sammen, oppløsning og mykgjørende noen akryl den møter. Således, det bør ikke brukes til hver del separat som om det var en tradisjonell lim. I motsetning til lim, sement ikke fylle negative områder eller overholder overflater. Dette er den primære grunnen til å bestille "rutet kanter" som dette vil sikre en jevn og flat kant, opprette en mye bedre bond. Når sement tørker, vil det har smeltet to akryl ark i en enkelt brikke i en prosess som kalles "løsemiddel welding". Mye som metall sveising, sluttproduktet er ett stykke, men sveiset området vil alltid forbli svakeste plasseringen. Som sådan, når arenaene er i bruk, må utvises forsiktighet for å unngå direkte innvirkning eller ekstrem stress på de forhold.

Denne protokollen viser også hvordan du konfigurerer 4 arenaer for samtidig testing av opptil 4 mus (figur 1 og figur 2). Ugjennomsiktig veggene av arenaene at mus ser hverandre under testing, men det er fortsatt en mulighet som har andre mus på rommet forårsaker lukt eller støy distraksjoner som kan svekke testing. Habituering prøvelser som detaljert her kan hjelpe redusere denne bekymringen, som mus er utsatt for flere dyr rom betingelsene før atferdsmessige testing. Men hvis distraksjoner fra andre mus eller eksperimentator støy forbundet med å håndtere andre mus er en sterk bekymring, en arena med ett museklikk kan brukes også, men det vil øke tiden det tar å fullføre OLT og NORT med flere mus. Mer enn 4 arenaer kan teoretisk brukes også, men de fleste kameraer har ikke en bred nok synsfelt vise at mange arenaer med god oppløsning.

Dimensjonene og avstander som tilbys her er generelle retningslinjer for musen atferdsmessige testing i et typisk testing rom som er 16 x 16 x 16 m3 i dimensjoner (figur 1B og 1 C). Definert av aktuelle miljømessige signaler, må arenaer og videoopptak utstyr være optimalisert for hvert miljø. Signaler kan bestå av store figurer eller mønstre (vanligvis i svart og hvitt) at mus til romlig orientere seg under OLT. I stedet for å plassere signaler på forskjellige steder overfor hverandre, kan signaler også monteres til veggene av testing området. Denne protokollen anbefaler dele testing rommet med en gardin å skjule forsker og datamaskinen under atferdsmessige testing. Under alle habituering, Inter prøve intervaller og aktive forsøk, bør forskerne lukke teppet for å skille seg fra testing området. Hvis dette ikke er praktisk, datamaskinen kan forbli i lys av mus, men forskeren må flyttes ut av visningen under oppgaven. Hvis forskeren, kan mus prøve å stole på henne eller ham som en romlig bunke.

Alle opptreden testing bør fullføres i temperatur og luftfuktighet-kontrollerte omgivelser med svak, men selv belysning på rundt 310 lux og minimal overflødig lyd eller sterk miljømessige lukt stikkord, for eksempel parfyme på forskere. Mellom hver prøve og testing dag, skal alle arenaer og objekter vaskes med dyr anlegget anbefalte metoder sterilisering som tørke med 70% etanol eller unscented blekemiddel kluter å minimere olfactory signaler. Hvis kjemiske desinfeksjonsmidler, anbefales en siste skylling med 70% etanol fordi mange kjemiske desinfeksjonsmidler kan være irriterende til dyrenes føtter.  Som med alle opptreden oppgave, håndtering mus i flere dager før testing er nødvendig for å gjøre dem kjent med personene som skal utføre OLT og NORT og redusere stress under testing20,22. Som mus kan oppleve akutt stress på grunn av ukjente personer i området testing, er det også anbefalt at alle opptreden testing skal være ferdig innen samme personen(e). Testingen parametere og forhold i denne protokollen er optimalisert for 6 til 9 uke gamle voksen C57Bl/6 mus og ville være mest nyttig i avslørende minne impairments på grunn av skade i denne aldersgruppen eller minne impairments grunn alder selv i eldre mus. Hvis målet er å teste minnet forbedringer i unge mus, ville en lengre ITI alt fra 1 time til 1 dag være mer hensiktsmessig å unngå tak effekter på ytelse i enklere 20 min ITI versjon. Faktisk kan det er variere fra 5 min (for umiddelbar sperring) til flere timer eller dager (ekstern minner), avhengig av behovene til eksperimentet og stammer og alder på mus. Viktigere, uavhengig av lengden, bør alle det er være samsvar mellom økter i et eksperiment. Ulike stammer og alder på mus viser forskjeller i virkemåten og læring, tidspunktet for hver prøve og intervall, testing området arrangement, og objekter som brukes kan endres etter bestemt belastningen av mus, alder og bestemt skaden / sykdom/intervensjon modell blir testet9,21,23,25.

Mens den hippocampus avhengigheten av romlige hukommelse testet i OLT er veletablerte, Nordsjøen kan eller kan ikke stole på hippocampus. Tolkning av data fra Nordsjøen bør ta denne påminnelse i kontoen. Bestemme variablene, for om hippocampus er involvert, i objektet anerkjennelse minnet er avtalt ikke ennå, men kan inkludere ITI lengde eller saliency romlige stikkordene18. Spesielt bruker presentert protokollen romlige OLT før Nordsjøen, som kan lede mus mot hjelp hippocampus prosesser i Nordsjøen. Dermed er det viktig å merke seg at rekkefølgen kan reverseres, eller hver oppgave kan kjøres uavhengig, avhengig av forskere spørsmål og behov.

Objektvalg er en viktig del av både OLT og NORT22,24. Ideelt er tungt nok ikke å lett fortrengt av mus og laget av materialer, som glass eller metall, som en mus ikke kan skade ved tygge eller riper. Tre, skum eller myk plast objekter er ikke riktig som de er lett deformert og er vanskelig å holde odor-ledig. Videre skal objektene som brukes i forsøkene være relativt lik i størrelse, struktur, lukt og materiale. Figur 1 d gir et eksempel på et passende objekt som kan brukes. Denne oransje plast figur av en kylling er fylt med sand å gi nok vekt og forseglet for å forhindre lekkasje av reagenser eller andre lukt-forårsaker agenter. På grunn av formen på toppen er mus ikke klatre over eller sitte på dette objektet. OLT eller NORT, er dette objektet best sammen med et annet objekt av samme størrelse, vekt, materialet, farge og kompleksitet, for eksempel en lignende plast figur av en kanin. For å sikre at objektet etterforskning virkelig gjenspeiler preferanse for nyhet, alle objekter må være godkjent for tilsvarende egenverdi med minimum 8 mus i den samme stammen, kjønn og alder forsøksgruppen som beskrevet i avsnittet 2.9 protokollen. I tillegg bør objektene være randomisert som objektet er roman eller flyttede objektet mellom mus i samme studien å sikre at iboende egenskaper av objektene ikke påvirker preferanse. Objektplassering kan også sterkt påvirke suksess eller fiasko OLT og NORT. Objektene må være balansert i arenaene og ikke være for nær veggene. Et hjørne overfylt av et objekt er attraktivt for mus å skjule dette vil forvirre tiltak for undersøkelse.

En viktig forutsetning for datainnsamling er å definere "aktiv etterforskning", som når en mus engasjerer et objekt med sin nese pekte på objektet ikke mer enn 2 cm unna. Musen flytte over toppen av objektet eller ser forbi objektet kvalifiserer ikke som aktiv etterforskning. Videre, siden de OLT og NORT avhenger mus huske enten romlige plassering eller faktiske funksjoner i objektet, det må være tilstrekkelig studie av disse under trening prøvelser. Dermed må forskeren definere gangen minimum etterforskning og ekskludere eventuelle arbeidstakere som ikke oppfyller det opprinnelige nivået av etterforskning, tradisjonelt sett på 20 sekunder21.

Kvantifisering av objektet etterforskning tid kan oppnås på ulike måter med eller uten dyre analyseprogramvare. Hvis manuell scoring, som beskrevet her, kan den mest omfattende datainnsamlingen oppnås ved den tid frimerker på videoen når musen undersøker objektet. Opptak i starten og opphøre timene av objektet etterforskning under tre individuelle prøvelser skaper en fast logg over upartiske tidsangivelser og muliggjør nøyaktig manuell beregning av data i motsetning til alternative metoder som bruker en stoppeklokke til additively Registrer den totale tiden mus undersøker hvert objekt.

Kommersiell programvarepakker er også tilgjengelig for scoring objektet etterforskning. Kommersielt tilgjengelig programvare gir et vell av data utover hånden scoring data beskrevet her, inkludert total distanse reist, brukt i visse områder av arenaen og hastigheten på bevegelsen16,23. Programvaren når riktig kalibrert og bekreftet for å oppdage objektet etterforskning, kan også gi data mye raskere enn manuell scoring. Dette raskere data avkastning kan i det lange løp, gi netto besparelser i forhold til de menneskelige timene kreves for manuell scoring. Men de fleste programvarepakker for atferdsanalyse har høy forhåndskostnader som kan være uoverkommelige for mange laboratorier og manuell scoring kanne ofte være dyktig av student forskere, gjør timekostnadene av atferdsmessige scoring minimal. Kommersiell programvare kommer også ofte med begrensninger på hvor mange brukere kan tilgang til programvaren samtidig, begrense data gjennomstrømming og tidsbesparelser. Selv om det er mange fordeler disse programvarepakker, er de ikke nødvendig å samle viktig informasjon tid undersøker objekter fra OLT og NORT. Å kjøpe disse dataene manuelt gjør romanen objektet oppgaver mer økonomisk tilgjengelig for et bredere utvalg av forskere.

En tilleggsfunksjon for denne protokollen er at den første økten med habituering er i hovedsak en rettssak i et åpent felt, som kan gi data på aktivitet og angst nivåer. Aktivitetsnivåer kan kvantifiseres bruke total distanse eller gjennomsnittlig hastighet, hvis sporing er tilgjengelig. Tilsvarende med sporingsprogrammer, kan angst tiltak være avledet fra tiden i midten av arena eller distanse i midten. Disse dataene kan også være kjøpt manuelt ved overliggende arena videoen et rutenett og kvantifisere kryssinger. Åpne-feltet dataene kan hjelpe utelukke brutto motor underskudd eller overdreven angst som kan forstyrre objektet etterforskning senere.

De statistiske testene som brukes i denne protokollen er representant for tradisjonelle metoder for analyse. Når du sammenligner 2 grupper av mus, anbefales en to utvalg, tosidige t-test til å teste betydningen av forskjellen i prosent tid å undersøke flyttet eller romanen objektet mellom grupper. Om utvalgsstørrelsene ujevn, har usedvanlig høye variasjon, eller Vis ujevn variasjon mellom grupper, en ikke-parametriske test anbefales i stedet som mange av de underliggende antagelsene av t-test vil bli brutt i disse betingelsene. Når du sammenligner 3 eller flere grupper av mus, anbefales ANOVAs å teste om gruppen har en betydelig effekt på prosent tid å undersøke det flyttede eller romanen objektet. Feil-korrigert innlegg-hoc tester, som Tukey's test eller Bonferroni-korrigert parvis sammenligninger, kan deretter brukes for å teste forskjellen i prosent etterforskning tid mellom hvert par av grupper. Med OLT er en ekstra måte å analysere data å teste for en betydelig endring i prosent tid å undersøke det flyttede objektet fra trening til OLT prøvelser. Med bare en gruppe av mus, denne testen ville ta form av en sammenkoblet, tosidige t-test, tester for betydelige endringer i prosent tid med det flyttede objektet fra trening til OLT i hver mus (Husk at dette er sammen analysene og ikke uavhengig målinger siden hver mus gir to datapunkter). Med to grupper av mus, en gjentatte measures toveis VARIANSANALYSE brukes, blir med gjentatte mål rettssaken (opplæring versus OLT) og gruppe oppdrag er den andre faktoren. Post-hoc tester for forskjeller mellom behandlingsgrupper bør sammenligne gruppene til hverandre i rettssaker.

Alternativt, hvis bevis i OLT eller NORT er alt som er testet, en utvalg med en t-test prosent tid undersøker et objekt mot den faste verdien 50% kan brukes. Gangen prosent betydelig høyere enn 50% foreslår minne for objektet. En prosent tid betydelig under 50% foreslår aversjon (for noen grunn), og objektet valg bør vurderes på nytt. Men kan ikke ett utvalg t-test avsløre om to eller flere grupper skiller seg fra hverandre. For eksempel i et eksperiment med to grupper av mus, hvis gruppe A brukt 60% av tiden med romanen objektet p = utvalg med 0.049 etter en t-test forhold til 50%, og gruppe B bare brukte 59% av tiden med romanen objektet p = 0.051 , Gruppe A er vesentlig forskjellig fra 50% (og gruppe B er ikke). Men er det feilaktig å konkludere med at disse to gruppene er signifikant forskjellig fra hverandre. En t-test med to utvalg sammenligne A og B kan lett viser at disse to gruppene er statistisk utvisket. Hvis målet er å sammenligne minne resultatene av to eller flere grupper, gruppene må være statistisk i forhold til hverandre, ikke bare i forhold til en ekstern standard. En lignende retningslinje gjelder en sammenligning mellom tidsbruk flyttet objekter mellom trening og OLT med. I dette tilfellet, finne en betydelig forskjell i prosent tid flyttet objekter med mellom trening og OLT i én gruppe, og ikke i et annet, viser du ikke at disse gruppene er statistisk forskjellige. Grupper må være innlegg-hoc sammenlignet mot hverandre i hver prøve, ikke bare over studier innen gruppen.

Det er viktig å huske at etterforskningen da noen personlige musen ikke kan bli brukt som bevis for eller mot minne. Snarere kan minne for objektet plassering eller identitet i disse oppgavene bare avsluttes basert på aggregerte data som er statistisk sammenlignet med en annen gruppe samle data eller fast sjanse nivåer (50% for tid, 0 for diskriminering ratio). Utvalgsstørrelsen nødvendig vil avhenge sterkt av effekt størrelsen av en bestemt manipulasjon og variasjon i atferd, begge i sin tur vil avhenge musene som brukes. Alder, kjønn og manipulasjoner alle påvirke variasjon. I eksempeldataene i figur 3A og 3B, n = 14 fag ble brukt, gir en effekt størrelse 0,68 og kraften til 0,65 for en t-test med α = 0,05. Hvis en strøm av 0,8 var ønskelig for denne sammenligningen, ville en utvalgsstørrelsen 18 være nødvendig.

Denne diskusjonen er innrammet rundt p-verdier og betydning konsentrasjon fordi dette er tiltak og analyser mest vanligvis rapportert for OLT og NORT data, og derfor er trolig kjent for både eksperimentelle og anmeldere. Denne avhengigheten p-verdier har vært sterkt kritisert som statistisk ugyldig26. Imidlertid om alternative analyseteknologi og det er godkjent i noen journaler27, har ingen bredt vedtatt av feltene opptreden og biomedisinsk som standard26.

I sammendraget tester denne protokollen effektivt minne i mus på minimale kostnader. Anbefalinger for riktige modifikasjoner til protokollen er inkludert for å sikre en vellykket gjennomføring med noen små gnagere modell. Bruk av denne protokollen til bestemte skader eller terapeutisk intervensjon modeller kan avsløre verdifulle funksjonelle relevans som utfyller cellulære og molekylære mekanismer blir studert.

Disclosures

Forfatterne ikke avsløre.

Acknowledgments

Dette arbeidet ble finansiert av R00 NS089938 fra NIH og frø finansiering fra kronisk hjerneskade og Discovery temaer på Ohio State University til EDK.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Sign White - 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast) TAP Plastics NA 1/4" x 15.75" x 15.75" with Routed Edges
Sign White - 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast) TAP Plastics NA 1/4" x 15.75" x 16.5" with Routed Edges
Sign White - 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast) TAP Plastics NA 1/4" x 16.5" x 16.5" with Routed Edges
TAP Acryllic Cement (1 pt.) TAP Plastics NA
16 G Hypo Applicator TAP Plastics NA
Debut Video Capture Software Pro Edition NCH Software NA
Stanely SAE/Metric Comb Square Grainger 6R171
Logitech Pro Stream Webcam C922x CDW 4429927
Belkin 16' USB 2.0 Active Extension Cable CDW 570691
Panduit Pan-Way LD Surface Raceway (8') CDW 300902
Spatial/Environmental Cues Variable NA
Objects for testing Variable NA
70% ethanol Variable NA
Double-sided tape Variable NA

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Krakauer, J. W., Ghazanfar, A. A., Gomez-Marin, A., Maclver, M. A., Poeppel, D. Neuroscience Needs Behavior: Correcting a Reductionist Bias. Neuron. 93, (3), 480-490 (2017).
  2. Lange, F., Seer, C., Kopp, B. Cognitive flexibility in neurological disorders: Cognitive components and event-related potentials. Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 83, 496-507 (2017).
  3. Barnett, J. H., Blackwell, A. D., Sahakian, B. J., Robbins, T. W. The Paired Associates Learning (PAL) Test: 30 Years of CANTAB Translational Neuroscience from Laboratory to Bedside in Dementia Research. Current Topics in Behavioral Neuroscience. 28, 449-474 (2016).
  4. Eichenbaum, H., Otto, T., Cohen, N. J. The hippocampus-what does it do? Behavioral and Neural Biology. 57, (1), 2-36 (1992).
  5. Bartsch, T., Wulff, P. The hippocampus in aging and disease: From plasticity to vulnerability. Neuroscience. 19, (309), 1-16 (2015).
  6. Smith, B. M., Yao, X., Chen, K. S., Kirby, E. D. A Larger Social Network Enhances Novel Object Location Memory and Reduces Hippocampal Microgliosis in Aged Mice. Frontiers in Aging Neuroscience. 10, (142), 1-16 (2018).
  7. Chieffi, S., et al. Exercise Influence on Hippocampal Function: Possible Involvement of Orexin-A. Frontiers in Physiology. 14, (8), 85 (2017).
  8. Garth, A., Roeder, I., Kempermann, G. Mice in an enriched environment learn more flexibly because of adult hippocampal neurogenesis. Hippocampus. 26, (2), 261-271 (2016).
  9. Brown, R. E., Stanford, L., Schellinck, H. M. Developing standardized behavioral tests for knockout and mutant mice. Institute for Laboratory Animal Research Journal. 41, (3), 163-174 (2000).
  10. Barker, G. R., Warburton, E. C. When is the hippocampus involved in recognition memory? Journal of Neuroscience. 31, (29), 10721-10731 (2011).
  11. Savage, S., Ma, D. Animal behavior testing: memory. British Journal of Anaesthesia. 113, (1), 6-9 (2015).
  12. Fanselow, M. S., Dong, H. W. Are the dorsal and ventral hippocampus functionally distinct structures? Neuron. 65, (1), 7-19 (2010).
  13. Vogel-Ciernia, A., Wood, M. A. Examining object location and object recognition memory in mice. Current Protocols in Neuroscience. 69, 1-17 (2014).
  14. Ammassari-Teule, M., Passino, E. The dorsal hippocampus is selectively involved in the processing of spatial information even in mice with a genetic hippocampal dysfunction. Psychobiology. 25, (2), 118-125 (1997).
  15. Le Merrer, J., Rezai, X., Scherrer, G., Becker, J. A., Kieffer, B. L. Impaired hippocampus-dependent and facilitated striatum-dependent behaviors in mice lacking the delta opioid receptor. Neuropsychopharmacology. 38, (6), 1050-1059 (2013).
  16. Hattiangady, B., et al. Object location and object recognition memory impairments, motivation deficits and depression in a model of Gulf War illness. Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, 78 (2014).
  17. Oliveira, A. M., Hawk, J. D., Abel, T., Havekes, R. Post-training reversible inactivation of the hippocampus enhances novel object recognition memory. Learning and Memory. 17, (3), 155-160 (2010).
  18. Cohen, S. J., Stackman, R. W. Jr Assessing rodent hippocampal involvement in the novel object recognition task. Behavioral Brain Research. 285, 105-117 (2014).
  19. Cohen, S. J., et al. The Rodent Hippocampus Is Essential for Nonspatial Object Memory. Current Biology. 23, (17), 1685-1690 (2013).
  20. Sorge, R. E., et al. Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents. Nature Methods. 11, (6), 629-632 (2014).
  21. Ennaceur, A., Delacour, J. A new one-trial test for neurobiological studies of memory in rats. 1: Behavioral data. Behavioral Brain Research. 31, (1), 47-49 (1988).
  22. Leger, M., et al. Object recognition test in mice. Nature Protocols. 8, (12), 2531-2537 (2013).
  23. Wolf, A., Bauer, B., Abner, E. L., Ashkenazy-Frolinger, T., Hartz, A. M. A Comprehensive Behavioral Test Battery to Assess Learning and Memory in 129S6/Tg2576 Mice. Public Library of Science ONE. 11, (1), e0147733 (2016).
  24. Ennaceur, A. One-trial object recognition in rats and mice: methodological and theoretical issues. Behavioural Brain Research. 215, 244-254 (2010).
  25. Lueptow, L. M. Novel Object Recognition Test for the Investigation of Learning and Memory in Mice. Journal of Visualized Experiments. (126), e55718 (2017).
  26. Wasserstein, R. L., Lazar, N. A. The ASA's Statement on p-Values: Context, Process, and Purpose. The American Statistician. 70, (2), 129-133 (2016).
  27. Ranstam, J. Why the P-value culture is bad and confidence intervals a better alternative. Osteoarthritis and Cartilage. 20, (8), 805-808 (2012).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics