Détection d’immunoglobuline Anti-aquaporin-4 G de sérum humain par Cell-based Assay

Immunology and Infection

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Summary

Essai sur les cellules est une méthode largement utilisée pour détecter les immunoglobulines de sérum anti-aquaporin-4 G. Cette méthode pourrait être appliquée au diagnostic clinique et les recherches scientifiques de neuromyélite optique spectre troubles.

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Liu, C., Zhu, M., Wang, Y. Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay. J. Vis. Exp. (146), e59014, doi:10.3791/59014 (2019).

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Abstract

Anti-aquaporin-4 (AQP4), immunoglobuline G (IgG) est le biomarqueur diagnostique de noyau pour les troubles du spectre de neuromyélite optique (NMOSD). L’essai sur les cellules (ABC) est une méthode largement utilisée pour détecter des IgG anti-AQP4 dans le sérum humain avec une spécificité et une sensibilité élevée. En bref, sériques IgG anti-AQP4 est capté par les cellules transfectées AQP4 qui sont fixé sur la biopuce alors détectée par un anticorps secondaire marqué à la fluorescéine. La microscopie de fluorescence est utilisée pour visualiser la fluorescence, et l’intensité de la fluorescence est évaluée au moins deux des cliniciens expérimentés. Un diagnostic définitif de NMOSD peut être pris en fonction sur la combinaison des résultats de détection IgG anti-AQP4, manifestations cliniques et neuroradiologiques conclusions. Selon des études antérieures, ABC est plus sensible et plus spécifique que les autres méthodes de détection des IgG anti-AQP4, et il peut être appliqué à la fois le diagnostic clinique et les études de NMOSD. La méthode a des limites ; par exemple, il manque encore l’échelle internationale pour évaluer les titres d’IgG sériques anti-AQP4. Ici, un protocole détaillé pour la détection de IgG anti-AQP4 sérum humain à l’aide d’ABC est décrite.

Introduction

Sérum AQP4 IgG est un biomarqueur diagnostique de noyau pour neuromyélite optique du spectre des troubles (NMOSD)1. L’essai sur les cellules (ABC) est une méthode de détection des IgG anti-AQP4 largement utilisé avec grande sensibilité et spécificité. Ici, un protocole détaillé pour ABC est introduit.

AQP4, une protéine de canal de l’eau, doté de six modules transmembranaire et deux domaines hélicoïdes entourant une solution aqueuse de pores2. IgG anti-AQP4 est impliqué dans la pathogénie de le NMOSD par la liaison à la cible AQP4, qui se trouve principalement sur l’endfeet des astrocytes3. Il a été démontré que les IgG anti-AQP4 est positif dans environ deux tiers des patients NMOSD4. Les plus récents critères diagnostiques internationaux pour NMOSD, IgG anti-AQP4 est réputé être un biomarqueur diagnostique de base5. À cet égard, il est crucial d’établir un protocole fiable pour détecter le sérum humain IgG anti-AQP4 et faciliter le diagnostic clinique des NMOSD.

Actuellement, les diverses méthodes de détection d’IgG anti-AQP4 sont disponibles, comme ABC, dosage à base de tissus, immuno enzymatique et l’écoulement cytometry6,7. CBA emploie EU90 cellules, qui sont transfectées avec des AQP4 humaines, pour capturer des IgG anti-AQP4. Les IgG anti-AQP4 capturé est détectée par des anticorps secondaires fluorescents et visualisée par la suite par microscopie. Accumuler des preuves a montré que l’ABC est plus sensible et plus spécifique que les autres de6,méthodes détection IgG anti-AQP47. Selon une méta-analyse, la sensibilité et la spécificité d’ABC se sont avérés être de 76 % et 99 %, qui étaient plus élevés que sur tissus et enzyme-linked immunosorbent assays6. En outre, une comparaison multicentrique des épreuves diagnostiques d’IgG anti-AQP4 a été menée7. Un total de 193 étude sujets de 15 centres de diagnostic européens étaient inscrits7. Quatre méthodes différentes ont été utilisées pour détecter le sérum anti-AQP4 IgG7. Il a été démontré que l’ABC était plus sensible et plus spécifique que les autres méthodes7. AQP4 est placée comme deux isoformes majeurs (M1-AQP4 et AQP4-M23), anti-AQP4 IgG capture cellulaire est transfecté avec AQP4-M1 ou AQP4-M23. Toutefois, quel type de cellule de capture est mieux reste controversée. Une enquête a soutenu AQP4-M1 selon ABC8, tandis que d’autres ont indiqué que AQP4-M23 base ABC est mieux7,9,10. Toutefois, ABC AQP4-M23-basé peut donner des résultats faussement positifs en raison de liaison non-spécifique IgG8. . De Jaïre et al. 11 a signalé qu’il n’y avait aucune différence significative dans les taux de détection des IgG anti-AQP4 entre AQP4 M1 et de la base de AQP4-M23 SABC.

En résumé, sérum anti-AQP4 IgG est un biomarqueur de base pour NMOSD. ABC a plus de spécificité et de sensibilité que les autres méthodes de détection des IgG anti-AQP4. Il demeure controversée s’AQP4-M1 AQP4 M23-base ou ABC est préférable. Dans cet article, un protocole détaillé pour ABC AQP4-M1-basée est décrite, qui peut s’appliquer au diagnostic clinique et d’études de NMOSD.

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Protocol

Cette procédure a été approuvée par le Comité d’éthique de l’Université de premier hôpital de la province du Jilin et s’est déroulée sur environ 1 500 sujets.

1. patient Enrollment et prélèvement d’échantillons de sang

  1. Appliquer le laboratoire de détection du sérum Qu'igg anti-AQP4 pour les patients de la clinique avec les plaintes en chef et les symptômes énuméré ci-dessous. Effectuer les examens physiques aussi bien.

    Névrite optique : les Patients souffrent de déficits visuels, tels que la perte du champ visuel et la réduction de l’acuité visuelle.
    Myélite aiguë : les Patients peuvent présenter des déficits sensoriels, paralysie et dysfonctionnement autonomique.
    Syndrome de postrema de secteur : les Patients peuvent avoir des symptômes de hoquet inexpliquée, des nausées ou vomissements.
    Syndrome de tronc cérébral aigu : lésions du tronc cérébral peuvent entraîner différents symptômes et signes physiques selon la localisation des lésions.
    Narcolepsie symptomatique ou syndrome clinique diencéphale aigu avec des lésions de MRI diencéphale NMOSD-typiques.
    Syndrome cérébral symptomatique avec des lésions cérébrales NMOSD-typique.

    Remarque : Selon les critères diagnostiques du consensus international pour NMOSD5, un diagnostic de NMOSD peut être fait si le patient est sérum anti-AQP4 IgG positif et a au moins une des caractéristiques cliniques fondamentales mentionnées ci-dessus. Cependant, nous ne recommandons pas les tests d’IgG anti-AQP4 chez les patients avec une névrite optique uniquement.
  2. Prélèvement d’échantillons de sang
    Remarque :
    les Patients ne doivent pas être jeûne.
    1. Dessiner 2-3 mL de sang veineux dans un tube de prélèvement sanguin sous vide 4 mL.
    2. Laisser le sérum à coaguler pendant 30 min à température ambiante (RT).
      Remarque : Coagulation prolongé peut augmenter les niveaux de sérum due à une fuite des plaquettes.
    3. Centrifuger à 2100 x g pendant 5 min. transvaser avec soin le sérum dans un nouveau tube.
    4. Analyser le sérum immédiatement ou la partie aliquote et conserver à -20 ou -80 ° C.
      Remarque : Stockage à-20 ° C est pour le stockage des mois, tandis que-80 ° C est pour le stockage des années.

2. détection des anticorps anti-AQP4

Mise en garde : Échantillons de patients et des réactifs utilisés doivent envisager des matières infectieuses. Réactifs contenant de l’azide de sodium dans le kit sont toxiques. Un diagramme du protocole est fourni à la Figure 1.

  1. Préparation
    1. Faire le kit RT avant utilisation.
      NOTE : Conserver le kit 2-8 ° c.
    2. Préparer au moins 200 mL de tampon de lavage PBS contenant 0,2 % Tween 20. Verser 100 mL de tampon de lavage dans un bécher de 500 mL.
    3. Diluer le sérum échantillons x 10 avec tampon de lavage. Préparer des témoins positifs et négatifs selon les instructions du distributeur.
  2. Incubation de l’échantillon
    1. Ajouter 30 µL des échantillons préalablement dilués, témoin positif ou contrôle négatif dans les champs de la réaction du bac à réactif (Figure 2).
      Remarque : Éviter les bulles d’air.
    2. Retirez le capot de protection sur les diapositives de la biopuce.
      Remarque : Ne pas toucher les biopuces pour éviter le détachement et la contamination des cellules fixes. Tenir la lame-by-side avant de retirer le couvercle.
    3. S’applique à la diapositive biopuce à la barre d’état réactif (Figure 2). Commencer une période d’incubation de 30 min à température ambiante.
      Remarque : Chaque échantillon doit être une gouttelette individuel relié à la biopuce correspondante sans mélange avec d’autres gouttelettes.
    4. Rincer doucement la lame biopuce une fois avec le tampon de lavage. Plonger la lame de biopuces dans le bécher de 500 mL, rempli de 100 mL de tampon de lavage pendant au moins 5 min Place le bécher sur un agitateur si possible.
    5. Retirez la lame de biopuces de la mémoire tampon de lavage. Soigneusement essuyer le tampon de lavage résiduelle à l’extérieur les champs de réaction avec du papier absorbant. Exposer la diapositive biopuce à l’air libre pendant 1-2 min évaporer le tampon de lavage résiduelle sur la zone réactive.
      Remarque : Ne pas sécher les champs de la réaction. Ne pas toucher les biopuces avec du papier essuie-tout.
  3. Incubation de l’anticorps secondaire
    1. Préparer la solution d’anticorps secondaire conformément aux instructions du distributeur.
    2. Ajouter 25 µL d’immunofluorescence secondaire vers les champs de la réaction d’un plateau propre.
    3. S’applique à la diapositive de biopuces pour le bac à réactif chargé avec l’anticorps secondaire. Incuber 30 min à température ambiante.
  4. Montage
    1. Versez le tampon de lavage, ajouter 100 mL de tampon de lavage fraîche dans le bol. Répéter le lavage comme décrit aux points 2.2.4 et 2.2.5.
    2. Ajouter avec précaution le milieu d’inclusion aux champs réaction sur une lame de biopuces (un pour chaque zone réactive). Sceller la diapositive biopuce avec un morceau de la lamelle couvre-objet. Éviter les bulles d’air.
  5. Détection par fluorescence
    1. Allumez la lampe fluorescente de microscope et préchauffer pendant 15 min. choisir un filtre à 488 nm.
    2. Logiciel de photographie ouvert. Prendre des photos de régions transfectées et celllulaire de tous les champs de la réaction avec des grossissements différents. Tout d’abord, prenez une photo avec un grossissement de x 4 pour un aperçu, puis prendre des photos plus avec 10 x et 20 x grossissements.
      Remarque : Le protocole détaillé est indiqué dans le tableau 1. Interprétation des résultats est discutée dans la section résultats représentatifs.

3. le diagnostic des Patients

  1. Si le patient est sérum anti-AQP4 IgG positif et montre au moins une caractéristique clinique de noyau de NMOSD (voir la section « discussion »), diagnostiquer les patients atteints de NMSOD5. Toutefois, si le patient est anti-AQP4 IgG négatif, un diagnostic de NMOSD ne peut pas être exclu.

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Representative Results

En utilisant la procédure décrite ici, IgG spécifiques anti-AQP4 dans le sérum est détectable. Au cours de la procédure, les échantillons préalablement dilués, un témoin positif et un témoin négatif ont été ajoutés aux champs de réaction, qui contiennent des zones transfectées et celllulaire (Figure 2). Fluorescence du contrôle négatif dans une zone transfectée indiqué principalement la liaison non spécifique de l’anticorps secondaire aux cellules transfectées sur biopuces (Figure 3). Fluorescence homogène faible était visible (Figure 3). En ce qui concerne le contrôle positif, les anticorps anti-AQP4 a été ajouté à la zone réactive. Forte fluorescence a été observée dans la zone transfectée, qui indiquait la liaison spécifique d’IgG anti-AQP4 à AQP4-M1 dans les cellules transfectées (Figure 4). Fluorescence du contrôle positif dans une zone celllulaire a montré relents de liaison non-spécifique des IgG anti-AQP4 à cellules fixées sur biopuces (Figure 4). Pour 10 x échantillons dilués, sérum négatif IgG anti-AQP4 montré un motif fluorescent semblable au contrôle négatif, tandis que le sérum positif a montré un modèle semblable au contrôle positif (Figure 5). L’intensité de fluorescence a été associée par le titre d’IgG anti-AQP4. Exemples de différentes intensités de fluorescence sont présentés dans la Figure 5. Figure 5 A et 5 b provenaient d’échantillons d’anti-AQP4 de IgG négatif, tandis que la Figure 5C-H provenaient d’échantillons de positif IgG anti-AQP4. Aussi longtemps que la fluorescence granulaire et hétérogène est apparu dans les zones transfectées, l’échantillon a été considéré comme anti-AQP4 IgG positif, quel que soit l’intensité de la fluorescence. Les critères diagnostiques de NMOSD, qui est basé sur le sérum anti-AQP4 IgG, sera décrite plus loin dans la section « discussion ».

Dans quelques échantillons, seulement un petit nombre de cellules a été fortement teinté dans les zones transfectées, et il était difficile de déterminer si le sérum anti-AQP4 IgG positif ou négatif (Figure 6). Dans ce cas, « probable positif » peut être déclaré. Dans des cas plus rares, la fluorescence d’un échantillon du milieu transfectées était homogène plus forte que dans les zones celllulaire (Figure 7). Dans ce cas, l’échantillon doit être considéré comme négatif IgG anti-AQP4. La forte intensité de fluorescence de fond peut être non spécifique. Pour créer un rapport fiable, toutes les photographies devraient être aveuglément évaluées par au moins deux cliniciens. Les cliniciens devraient être formés avant l’évaluation. Dans ce protocole, ils ont montré des photographies représentant des types d’échantillons différents et ont été informés quant à la façon d’évaluer les résultats. Puis, ils ont évalué les photographies avec un clinicien expérimenté. Enfin, les cliniciens formés ont travaillé indépendamment. Dans une situation idéale, il faut toujours les mêmes cliniciens qui évaluent les résultats.

Figure 1
Figure 1 : Organigramme du protocole de détection des IgG anti-AQP4. AQP4-M1-transfectées ou celllulaire UE 90 cellules sont fixées sur les biopuces. Lors de l’ajout de sérum de biopuces, IgG anti-AQP4 dans le sérum est capturé par les cellules transfectées fixes. Ensuite, les anticorps secondaire marqué à la fluorescéine est appliquée pour détecter les IgG anti-AQP4. La fluorescence peut être visualisée au microscope avec différents grossissements. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.

Figure 2
Figure 2 : Échantillon d’incubation. (A) vue de dessus du bac à réactif. Chaque bac à réactif contient cinq champs de réaction individuelle. Le contrôle positif, échantillons et contrôle négatif ajoutons aux champs distincts de réaction. (B) vue de dessus de diapositive de la biopuce. Chaque diapositive biopuce contient cinq champs de réaction, qui ont deux paragraphes. La sous-section transfectée contient les cellules transfectées M1-AQP4 fixes, tandis que le paragraphe celllulaire contient des cellules celllulaire. (C) Front vue de glissière de tiroir et biopuce réactif. Champs de réaction sur la glissière de tiroir et biopuce réactif sont jumelés avec l’autre. L’échantillon ajouté à la zone réactive sur bac à réactif doit être connecté à la zone réactive correspondant sur la diapositive de la biopuce. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.

Figure 3
Figure 3 : Des chiffres représentatifs pour contrôle négatif. (A) une vue d’ensemble de la zone transfectée du témoin négatif a été obtenue par 4 x microscope grossissement. Fluorescence homogène faible a été observé dans toute la région. (B, C) Plus de détails ont été observées chez 10 x (B) et x (C) photos de grossissement. Généralement, la membrane cellulaire et le plasma sont légèrement colorés, et le noyau de la cellule était sans tache. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.

Figure 4
Figure 4 : Des chiffres représentatifs pour contrôle positif. (A, B) Transfectées (A) et celllulaire (B) les zones de contrôle positif sont affichent. Fluorescence homogène faible a été observée dans les zones celllulaire, indiquant la liaison non-spécifique des IgG anti-AQP4 à cellules fixées. À l’inverse, hétérogène forte fluorescence a été observée dans les zones transfectées, indiquant la liaison spécifique d’IgG anti-AQP4 à AQP4-M1 exprimée sur les cellules fixes. (C-F) Plus de détails sur transfectées (C, E) et les zones celllulaire (D, F) sont observés avec 10 x (C, D) ou 20 x grossissement (E, F). Fluorescence faible et même apparu dans les zones celllulaire. Toutefois, un grand pourcentage des cellules transfectées se trouvent dans a montré une fluorescence intense. Dans le plasma des cellules fortement colorées, IgG anti-AQP4 a montré une fluorescence granulaire et lisse. Le noyau de la cellule était non souillées enregistré ou légèrement teinté. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.

Figure 5
Figure 5 : Des chiffres représentatifs pour les échantillons de négatifs ou positifs, anticorps anti-AQP4. Les échantillons étaient 10 x dilué, et tous les chiffres indiqués ont été prises avec un objectif 10 x. (A, B) Échantillon négatif de fluorescence : fluorescence était homogène faible dans les deux (A) transfectées et (B) celllulaire zones. (C, D) Échantillon de fluorescence faible : en comparaison avec les zones celllulaire (D), une petite quantité de cellules (environ 25 % à 50 %) dans les zones transfectées (C) ont montré une fluorescence plus intense. (E, F) Échantillon de fluorescence modérée : zones transfectées (E), forte fluorescence granulaire est observé dans une quantité moyenne de cellules (environ 50 % à 75 %). (G, H) Échantillon de forte fluorescence : cellules dans les zones celllulaire (H) sont faiblement colorés. Cependant, dans les zones transfectées (G), fluorescence granulaire avec une forte intensité est apparu dans un grand nombre de cellules (environ plus de 75 %). En général, comme le titre des IgG anti-AQP4 a augmenté, tant intensité de fluorescence et le pourcentage de cellules fortement colorées élevé proportionnellement. La fluorescence des zones celllulaire était toujours faible de façon homogène. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.

Figure 6
Figure 6 : Chiffres représentatifs pour les échantillons de « positifs probables » d’anticorps anti-AQP4. (A, B) Aucune différence significative dans les profils de fluorescence ont été observées entre transfectées (A) et (B) celllulaire à un grossissement de 4 x. (C-E) Avec 10 x (C, D) ou 20 x (E, F) grossissement, quelques cellules dans les zones transfectées (C, E) a montré la forte fluorescence granulaire. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure. 

Figure 7
Figure 7 : Exemple d’échantillon IgG négatif atypique anti-AQP4. Transfectées (A) tant celllulaire (B) les zones ont été colorées homogène. Cependant, la fluorescence dans les zones transfectées était plus forte que dans les zones celllulaire. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.

Grossissement Zone transfectée Zone de celllulaire
4 x 1 photo 1 photo
x 10 4 photos 1 photo
x 20 5 photos 1 photo

Tableau 1 : microscopie à Fluorescence. Il est recommandé d’utiliser 4 x, 10 x et 20 x objectifs pour l’imagerie des zones transfectées et celllulaire.

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Discussion

Nous avons décrit une méthode largement accessible pour détecter les IgG anti-AQP4 dans le sérum humain. IgG anti-AQP4 est étroitement lié au NMOSD, et établir une méthode de détection des IgG anti-AQP4 fiable est essentiel pour le diagnostic clinique de NMOSD. Tout d’abord, les IgG anti-AQP4 est spécifique pour NMOSD. Sclérose en plaques est également une maladie auto-immune du système nerveux central et partage de nombreuses similitudes avec NMOSD12. Cependant, les IgG anti-AQP4 n’est positif en NMOSD13. Deuxièmement, les IgG anti-AQP4 est fréquente chez les patients NMOSD. Environ les deux tiers des patients NMOSD sont le sérum anti-AQP4 IgG positif4. Troisièmement, les critères de diagnostic plus récents pour NMOSD est basé sur le sérum anti-AQP4 IgG essai5. Pris ensemble, détection de sérum anti-AQP4 IgG pourrait faciliter le diagnostic clinique de NMOSD.

Parmi les méthodes de détection d’IgG anti-AQP4 divers, ABC est employé couramment pour le diagnostic clinique en raison de sa grande sensibilité et spécificité6,7. Bien que l’ABC est une méthode simple et rapide, certains points essentiels doivent être adressées. Tout d’abord, les expérimentateurs devraient être prudents lorsque vous manipulez des biopuces, celllulaire et transfectées M1-AQP4 cellules sont fixées sur les biopuces. Durant toute la procédure, biopuces ne devraient pas être touchés à la main ou desséchées. En outre, les diapositives avec biopuces doivent être manipulés délicatement, sinon les cellules fixes sur les biopuces peuvent tomber ou être contaminées, qui provoque des zones défectueuses de fluorescence ou un haut fond fluorescent. En second lieu, lorsque vous ajoutez des échantillons dans les champs de réaction sur le plateau de réactif, les chercheurs doivent s’assurer que les gouttes d’échantillons ne sont pas mélangés entre eux. Il faut éviter les bulles d’air entre les échantillons et les biopuces.

Cette méthode a des limites ; par exemple, lorsque vous utilisez l’ABC pour détecter les IgG anti-AQP4, il est difficile de quantifier l’intensité de la fluorescence et de décrire le titre d’IgG anti-AQP4 dans le sérum. Actuellement, dans notre centre de diagnostique, l’intensité de la fluorescence est subjectivement signalée par deux cliniciens après avoir comparé les photographies de contrôles vs. échantillons. Dans la plupart des cas, il n’est pas difficile de déterminer si le sérum est anti-AQP4 IgG positif ou négatif. Toutefois, dans de rares cas, la fluorescence provenant d’échantillons peut sembler seulement légèrement plus forte que le contrôle négatif, et l’échantillon est considéré comme « probable positif ». Dans ce cas, les cliniciens devraient être plus prudents de faire un diagnostic. Une autre solution possible est de répéter l’ABC. Une méthode plus précise pour quantifier l’intensité de la fluorescence et une définition internationale du « Positif IgG anti-AQP4 » est garanti. Notamment, le taux de positivité des IgG anti-AQP4 dans le liquide céphalorachidien est beaucoup plus faible que dans le sérum, et tests pour les IgG anti-AQP4 dans le liquide céphalorachidien n’est pas informative14,15.

ABC peut être appliqué à la fois le diagnostic clinique et les études scientifiques de NMOSD. Le diagnostic clinique de NMOSD est fait à la base de l’ensemble des manifestations cliniques, sérum IgG anti-AQP4 et conclusions neuroradiologiques. Sérum anti-AQP4 IgG positif patients atteints caractéristique clinique au moins un noyau de NMOSD peuvent être diagnostiquées avec NMOSD5; Toutefois, si le patient est anti-AQP4 IgG négatif, un diagnostic de NMOSD ne doit pas être exclu5et les cliniciens devraient évaluer davantage les manifestations cliniques et neuroradiologiques conclusions5,16,17 . Anticorps sériques myéline oligodendrocyte glycoprotéine peut être détecté pour aider au diagnostic de19,18,20. En particulier, bien que le titre d’IgG sériques anti-AQP4 peut être modifié avec le rituximab traitement21, il n’est pas prédictive de l’évolution de la maladie et la réponse à l’immunothérapie22,23. ABC est également employé couramment pour la recherche scientifique. Par exemple, Yang et al.24 décrit les caractéristiques cliniques des patients NMOSD positif IgG anti-AQP4. En outre, Kitley Al25 analysé les facteurs pronostiques pour anti-AQP4 NMOSD IgG positif patients25. Les deux études utilisé ABC pour détecter sérum IgG anti-AQP4.

En résumé, l’ABC est une méthode largement utilisée pour détecter les IgG anti-AQP4 et peut être appliquée au diagnostic clinique et la recherche scientifique de NMOSD.

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Disclosures

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Acknowledgments

Les auteurs sont reconnaissants de l’appui des subventions de la Fondation nationale des sciences de Chine (no 31600820), The Health et Commission planification familiale de la Province du Jilin (no 2016Q036) et la Science et technologie planification projet de la Province du Jilin (no 20180520110JH).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Anti-aquaporin-4 IIFT Euroimmun FA 1128-2005-50 Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium. 
CellSens Dimension OLYMPUS N/A photograph software
Gel & clot activator tube Improve medical 623040202 From a local Chinese company

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