Coloration protéines dans les gels

Biology
 

Summary

Après la séparation par des méthodes électrophorétiques des protéines dans un gel peut être détectée par des méthodes de coloration de plusieurs. Coloration des protéines au bleu de Coomassie, coloration à l'argent, SYPRO Orange, SYPRO Ruby sont démontrées dans cette vidéo.

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Gallagher, S., Chakavarti, D. Staining Proteins in Gels. J. Vis. Exp. (17), e760, doi:10.3791/760 (2008).

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Abstract

Après la séparation par des méthodes électrophorétiques des protéines dans un gel peut être détectée par des méthodes de coloration de plusieurs. Cette unité décrit les protocoles de détection des protéines par quatre méthodes populaires. Bleu de Coomassie coloration est une méthode facile et rapide. Coloration à l'argent, tandis que plus de temps à consommer, est beaucoup plus sensible et peut donc être utilisé pour détecter de petites quantités de protéines. Fluorescent coloration est une alternative populaire aux procédures de coloration traditionnelle, principalement parce qu'il est plus sensible que la coloration au bleu de Coomassie, et est souvent aussi sensible que la coloration argentique. Coloration des protéines avec SYPRO Orange et SYPRO Ruby est aussi démontré ici.

Protocol

Le protocole texte complet de cette approche expérimentale est disponible en Current Protocols in Molecular Biology .

Comments

8 Comments

  1. WHICH REACTION EQUATION OF CONVERT Cu+² TO Cu+1 in the protein test

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 3, 2008 - 7:45 AM
  2. thank you!very good!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 6, 2008 - 8:51 PM
  3. It is very good, thanks

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 12, 2008 - 6:43 AM
  4. A good and cheap alternative to SYPRO Rubi is RuBPS staining. Here are some protocols. More information can be found on www.ruthenium.ag.vu   RuBPS staining protocol I (quality) 1. Fix the gel in 30% EtOH, 10% acetic acid overnight ². Rinse the gel in ²0% EtOH for 30 min and repeat 3 times 3. Incubate the gel in 1 mM RuBPS solution for 6 h 4. Equilibrate the gel in water for 10 min and repeat once 5. Destain the gel with 40% EtOH/10% acetic acid for 15 h 6. Equilibrate the gel in water for 10 min repeat once and scan   all% are in V/V   Procedure as published in Proteomics ²004, 4, 599–608.     RuBPS staining protocol II (fast)   1. Incubate the gel in 50 ml of 40% Ethanol/10% acetic acid containing    1 mM RuBPS for 1 h. ². Destain the gel for ²0 min in 40% Ethanol/10% acetic acid 3. Wash the gel for 10 min in water and scan   all% are in V/V   Procedure as published in PLoSONE. ²007 Feb ²8;²(²)e²63.       RuBPS staining protocol III (co-electrophoretical)   1. Add 1 ml of ²0 mM stock solution to one pocket of your SDS gel. Run     the gel according to your standard procedure. ². Incubate the gel in 50 ml of 40% Ethanol/10% acetic acid for ²0 min 3. Incubate the gel in 50 ml water for 10 min and scan       RuBPS staining protocol IV (loading buffer)   1. Add 1 ml of ²0 mM stock solution to your loading buffer (omit all other     dyes like bromophenol blue). Run the gel according to your standard     procedure. ². Incubate the gel in 50 ml of 40% Ethanol/10% acetic acid for ²0 min 3. Incubate the gel in 50 ml water for 10 min and scan  

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 16, 2009 - 1:20 PM
  5. Itz realy ² gud!

    Reply
    Posted by: sathya r.
    May 18, 2009 - 11:01 AM
  6. Thank yoy

    Reply
    Posted by: JASSIM A.
    May 20, 2009 - 9:39 AM
  7. thank you

    Reply
    Posted by: ibrahim b.
    August 27, 2010 - 12:31 AM
  8. thanks! This is very useful for my job!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 31, 2010 - 4:33 AM

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