Dissection z larw CNS na Drosophila melanogaster

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Summary

W tym artykule pokazujemy, jak wnikliwie ośrodkowego układu nerwowego z państw larw Drosophila stadium.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Hafer, N., Schedl, P. Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster. J. Vis. Exp. (1), e85, doi:10.3791/85 (2006).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Ośrodkowego układu nerwowego (CNS) larw Drosophila jest złożone i słabo rozumiane. Jednym ze sposobów zbadania CNS jest użycie immunohistochemiczne badanie ekspresji różnych powieści i białka znacznika. Barwienie całego larw jest niepraktyczne, ponieważ twardy naskórek zapobiega przenikaniu przeciwciał wewnątrz jamy ciała. W celu plamy tych tkanek należy wnikliwie zwierząt przed układaniem i przebarwienia. W tym artykule pokazujemy, jak wnikliwie larwy muszki owocowej bez uszkodzenia OUN. Zacznij od rozdarcia larwa na pół parę drobnych szczypiec, a następnie włącz naskórka "inside-out", aby odsłonić CNS. Jeśli rozwarstwienie jest wykonywane dokładnie CNS pozostanie podłączony do naskórka. Zwykle utrzymanie CNS dołączone do naskórka na całym utrwalania i barwienia kroki i tylko całkowicie usunąć CNS z naskórka tuż przed zamontowaniem próbki na szkiełku. Pokazujemy także kilka reprezentatywnych obrazów larw CNS barwione z Ewą, czynnik transkrypcyjny wyrażone w podgrupie neuronów w OUN. Artykuł kończy się omówieniem niektórych praktycznych zastosowań tej techniki i potencjalne trudności, które mogą powstać.

Protocol

  1. Dissect 3 larwy III stadium, pozostawiając CNS dołączone do naskórka. Miejsce w 1,5 ml probówce.
  2. Fix w PBS (1x) zawierający 2% formaldehydu do 40 min z biegunach. ; Użyj 250ul za co 5-10 CNS rozcięta.
  3. Usuń formaldehydu i krótko przemyć 3 razy PBS + 0,1% Triton X-100 (PBST). Użyj drobno wyciągnął pipety Pasteura, aby uniknąć utraty tkanki.
  4. Blok niespecyficzne białka wiążącego strony i permeabilize błon komórkowych przez inkubację tkanki 08/01 godzin w PBST + 5% BSA, kołysanie w temperaturze 4 ° C.
  5. Inkubować w pierwszym przeciwciałem rozcieńczony w PBST + 5% BSA kołysanie w temperaturze 4 ° C przez noc. Optymalnego rozcieńczenia przeciwciał będzie różny dla różnych przeciwciał.
  6. Spłukać 3x w PBST przez dwie 30min zmywa w temperaturze 4 ° C.
  7. Inkubować w drugim przeciwciałem rozcieńczony w PBST + 5% BSA na 1-3 godziny kołysania w 4 ° C. Spłukać 3x w PBST przez dwie 30min zmywa w temperaturze 4 ° C. Jeśli drugi jest sprzężony wrażliwy na światło związek, zawinąć w folię aluminiową rurę.
  8. Dissect tkanki dalej (w razie potrzeby) i zamontować na slajdach.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Ten film pokazuje, jak wnikliwie CNS z państw larw Drosophila stadium. Po sekcji zwłok, OUN może być barwiony przy użyciu standardowego protokołu immunohistochemiczne. Obecnie wiele jest jeszcze znany, jak dla dorosłych układu nerwowego jest generowany, a także w jaki sposób przechowuje i przesyła informacje. Badania rozwoju Drosophila CNS larwy powinny poszerzyć naszą wiedzę na okablowanie systemu nerwowego i funkcji.

Larw Drosophila wykazują szereg stereotpyed zachowania, takie jak reakcja na bodźce środowiska. Jak dowiedział się tych zachowań i przechowywane w układzie nerwowym? Badania układu nerwowego w trakcie rozwoju larwalnego pomoże odpowiedzieć na to pytanie.

Na tym etapie rozwoju Drosophila, organizm przygotowuje się do poddania się ogromne zmiany morfologiczne, które występują podczas przepoczwarzenie. W tym czasie ogromne przebudowy układu nerwowo-mięśniowego występuje jako organsim przejścia z maggot wpełza dorosłych latać. To będzie interesujące, aby określić jak neurony zmiany na tym etapie rozwoju, a jeśli ten sam typ zachowania można zaobserwować w neuronach wyższych zwierząt.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Forceps fine tipped
9-well Watch glass
Plastic Petri dish

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Forthcoming.

Comments

1 Comment

  1. The justification/ultimate goals are poorly explained. How dŒs the presence of a protein show function?

    Reply
    Posted by: jacqui s.
    December 12, 2009 - 6:36 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics