Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
הכבד הוא אתר גרורתי משני עבור רוב סוגי הסרטן. כדי ללמוד גרורות, אנחנו יכולים להזריק תאים סרטניים לתוך הווריד פורטל, אשר נושא דם מחלקים אחרים של הגוף אל הכבד.
התחל על-ידי הצבת עכבר מורדם במצב על-חושי. לעקר את אזור הבטן החשוף באמצעות כלורקסידין ואלכוהול. באמצעות microscissors, לעשות חתך בין צלעות בלוטת החלב הרביעי בצד שמאל של החיה מבלי לפגוע באיברים פנימיים.
מניחים כרית גזה ספוגה מלוחים סטריליים ליד החתך. בעדינות למשוך את המעי החוצה באמצעות ספוגית כותנה סטרילית כדי לחשוף את הווריד פורטל, ומניחים אותו על גזה. מכסים את האיברים עם כרית גזה כדי למנוע ייבוש. הכנס את מחט המזרק המכיל תאים סרטניים שכותרתו פלואורסצנטית לתוך וריד הפורטל ולאט לאט להזריק את התאים. המתן כמה שניות כדי למנוע את הזרימה האחורית של תאים ולהסיר בזהירות את המחט.
לאחר ההזרקה, תאים סרטניים בדרך כלל לנסוע בסינוסואיד ולפלוש לתוך hepatocytes ליד שלישיית הפורטל גרורות. מחזירים את האיברים לחלל הבטן ותופרים את החתך. בפרוטוקול לדוגמה, נבצע הזרקת וריד פורטל כדי ללמוד גרורות סרטן השד לכבד.
לפני תחילת ההליך, לנגב את כל המשטחים של האזור הכירורגי עם 10% אקונומיקה. שעה לפני הזריקות, לטפל 8 כדי 15 שבועות BALB / c עכברים נקבה עם 100 microliters של משככי כאבים תת עורית לטיפול בכאב. יש למרוח משחה על עיני החיה. לאחר מכן, למקם את העכבר במצב supine ולאשר את הרמה המתאימה של sedation על ידי צביטה בוהן.
לאחר מכן, לחטא את האזורים הכירורגיים והסביבה של החיה, כולל הזנב, עם שלושה גזה סטרילי לסירוגין ספוג 2% מגבונים chlorhexidine ושני מגבונים כרית הכנה אלכוהול. לאחר ניגוב הכלורקסידין האחרון, השתמש באזמל סטרילי כדי לבצע חתך של 1 אינץ 'לתוך העור בין המישור החציוני למישורי sagittal בצד שמאל של הפה, החל ממש מתחת לצלעות ומסתיים מעל הפטמה הרביעית של בלוטת החלב המפשעה, ואחריה חתך דומה של סנטימטר אחד דרך הצפק.
עכשיו, פיפטה תאי הגידול למעלה ולמטה מספר פעמים כדי resuspend את פתרון התא, ולטעון מזרק מחט נשלף 25 מיקרוליטר, מצויד במחט 32 מד עם 10 microliters של התאים. לדכא את הוכנה עד התאים נמצאים בקצה המחט ואת הוכנה היא בנפח המתאים להזרקה. לנגב את החלק החיצוני של המחט טעון עם כרית אלכוהול סטרילית כדי להסיר את כל התאים סרטניים חיצוניים, דואג למנוע מקלות מחט.
לאחר מכן, מחזיק את העור ואת הצפק בטנה של הצד החציוני של החתך עם מלקחיים, להשתמש ספוגית כותנה סטרילית בזהירות להעביר את המעי הגס והמעי הדק על גזה סטרילית ספוג מלוחים סטריליים. מכסים את האיברים הפנימיים בגאזה ספוגת מלוחים כדי לשמור על הלחות והסטריליות הפנימיות. כאשר וריד הפורטל גלוי, יש עוזר בעדינות להחזיק את המעיים מהדרך כדי לחשוף את וריד הפורטל עם ספוגית כותנה סטרילית ולהכניס את המחט 3 עד 5 מילימטרים לתוך וריד הפורטל, כ 10 מילימטרים מתחת לכבד בזווית של פחות מ 5 מעלות, צד משופע למעלה.
לאט להזריק את הנפח המלא של תאים סרטניים, המאפשר לדם לזרום בעבר ראש המחט במשך כמה שניות, כדי למנוע זרימה אחורית של תאים סרטניים מתוך הווריד.
כמו הדמיה נכונה, גישה, והזרקה לתוך וריד הפורטל הוא חיוני, לקחת את הזמן כדי להבטיח כי המיקום של וריד הפורטל ביחס המחט הוא משביע רצון לפני הניסיון הזרקה.
כאשר כל התאים הוזרקו, הסיר את המחט בעת ובעונה אחת החלת לחץ עדין על הווריד עם מוליך קצה כותנה סטרילי. לאחר מכן, השתמש במוליך קצה כותנה סטרילי חדש להחזיק חתיכה מרובעת 0.5 עד 1 ס"מ של גזה hemostatic מעל אתר ההזרקה.
לאחר חמש דקות, בזהירות להרים את גזה כדי להעריך את סגירת הווריד. כאשר זרימת הדם נפסקה לחלוטין, להסיר את הגזה ולהחזיר את המעיים לחלל הבטן. באמצעות תבנית תפר פשוטה, רציפה או מופרעת, סגור את רירית הצפק עם תפר vicryl סטרילי 4-0 והתחדדות.
לאחר סגירת העור באותו אופן, להזריק 100 microliters של הרדמה מקומית לאורך אתר החתך, ואחריו משלוח תת עורי של 0.5 מיליליטר של מלוחים סטריליים.
