Injection de veines portail: Une méthode pour étudier la métastase du cancer au foie

Le foie est un site métastatique secondaire pour la plupart des cancers. Pour étudier la métastase, nous pouvons injecter des cellules cancéreuses dans la veine portail, qui transporte le sang d’autres parties du corps vers le foie.

Commencez par placer une souris anesthésiée dans une position supine. Stériliser la région abdominale nue à l’aide de chlorhexidine et d’alcool. À l’aide de microscisseurs, faire une incision entre les côtes et la quatrième glande mammaire sur le côté gauche de l’animal sans endommager les organes internes.

Placer un tampon de gaze trempé dans une solution saline stérile près de l’incision. Tirez doucement l’intestin à l’aide d’un coton-tige stérile pour révéler la veine portail, et placez-le sur la gaze. Couvrir les organes avec le tampon de gaze pour éviter le séchage. Insérez l’aiguille de seringue contenant des cellules cancéreuses étiquetées fluorescentes dans la veine portail et injectez lentement les cellules. Attendez quelques secondes pour éviter le flux arrière des cellules et retirez soigneusement l’aiguille.

Après injection, les cellules cancéreuses voyagent habituellement dans le sinusoïde et envahissent les hépatocytes près de la triade portail pour métastaser. Remettre les organes dans la cavité abdominale et suturer l’incision. Dans le protocole d’exemple, nous effectuerons l’injection de veine de portail pour étudier la métastase de cancer du sein au foie.

Avant de commencer l’intervention, essuyez toutes les surfaces de la zone chirurgicale avec 10% d’eau de Javel. Une heure avant les injections, traiter les souris femelles BALB/c âgées de 8 à 15 semaines avec 100 microlitres d’analgésie sous-cutanée pour la gestion de la douleur. Appliquer de l’onguent sur les yeux de l’animal. Ensuite, placez la souris dans la position supine et confirmez le niveau approprié de sedation par pincement d’ateil.

Ensuite, désinfectez les zones chirurgicales et environnantes de l’animal, y compris la queue, avec trois lingettes de chlorhexidine trempées de gaze stériles en alternance et deux lingettes de préparation à l’alcool. Après la dernière lingette de chlorhexidine, utilisez un scalpel stérile pour faire une incision de 1 pouce dans la peau entre les plaines médianes et sagittales sur le côté gauche de la bouche, en commençant juste en dessous des côtes et se terminant au-dessus de la quatrième tét de glande mammaire inguinale, suivie d’une incision similaire d’un pouce à travers le péritoine.

Maintenant, pipette les cellules tumorales de haut en bas à plusieurs reprises pour résuspendre la solution cellulaire, et de charger une seringue d’aiguille amovible de 25 microlitres, équipé d’une aiguille de calibre 32 avec 10 microlitres des cellules. Déprimer le piston jusqu’à ce que les cellules soient à l’extrémité de l’aiguille et que le piston soit au volume approprié pour l’injection. Essuyer l’extérieur de l’aiguille chargée avec un tampon d’alcool stérile pour enlever les cellules tumorales externes, en prenant soin d’éviter les piqûres d’aiguille.

Ensuite, en tenant la peau et la doublure péritonéale du côté médian de l’incision avec les forceps, utilisez un coton-tige stérile pour déplacer soigneusement les gros intestins et les intestins grêles sur une gaze stérile trempée dans une solution saline stérile. Couvrir les organes internes dans la gaze saline pour maintenir l’humidité interne et la stérilité. Lorsque la veine portail est visible, avoir un assistant tenir doucement les intestins hors de la voie pour exposer la veine portail avec l’écouvillon de coton stérile et insérer l’aiguille 3 à 5 millimètres dans la veine portail, environ 10 millimètres sous le foie à un angle inférieur à 5 degrés, côté biseauté vers le haut.

Injectez lentement tout le volume des cellules tumorales, permettant au sang de passer devant la tête de l’aiguille pendant plusieurs secondes pour éviter un retour des cellules tumorales hors de la veine.

Comme la visualisation, l’accès et l’injection appropriés dans la veine du portail sont essentiels, prenez le temps de vous assurer que le positionnement de la veine du portail par rapport à l’aiguille est satisfaisant avant de tenter l’injection.

Lorsque toutes les cellules ont été injectées, retirer l’aiguille tout en appliquant une pression douce sur la veine avec un applicateur stérile pointe de coton. Ensuite, utilisez un nouvel applicateur stérile à pointe de coton pour tenir un morceau carré de gaze hémostatique de 0,5 à 1 centimètre au-dessus du site d’injection.

Après cinq minutes, soulevez soigneusement la gaze pour évaluer la fermeture des veines. Lorsque le flux sanguin a complètement cessé, enlever la gaze et retourner les intestins dans la cavité abdominale. À l’aide d’un motif de suture simple, continu ou interrompu, fermez la doublure péritonéale avec une suture vicryl stérile de 4-0 et conique.

Après avoir fermé la peau de la même manière, injecter 100 microlitres d’anesthésie locale le long du site d’incision, suivie d’une livraison sous-cutanée de 0,5 millilitres de solution saline stérile.