Portal Vene Injektion: En metode til at studere kræft metastaser til leveren

Leveren er en sekundær metastatisk site for de fleste kræftformer. For at studere metastaser kan vi injicere kræftceller i portalåren, som bærer blod fra andre dele af kroppen til leveren.

Start med at placere en bedøvet mus i en liggende stilling. Steriliser det nøgne abdominale område ved hjælp af chlorhexidin og alkohol. Brug mikroscissorer, lav et snit mellem ribben og den fjerde brystkirtel på dyrets venstre side uden at beskadige indre organer.

Placer en gaze pad gennemblødt i steril saltvand nær indsnittet. Træk forsigtigt tarmen ud ved hjælp af en steril vatpind for at afsløre portalåren og læg den på gaze. Dæk organerne med gazepuden for at forhindre tørring. Indsæt sprøjtenålen, der indeholder fluorescerende mærkede kræftceller, ind i portalåren, og injicer langsomt cellerne. Vent et par sekunder for at forhindre tilbagestrømning af celler og forsigtigt fjerne nålen.

Efter injektion, normalt kræftceller rejse i sinusoid og invadere ind i hepatocytter nær portalen triade at metastasere. Placer organer tilbage i bughulen og sutur indsnittet. I eksemplet protokol, vil vi udføre portal vene injektion for at studere brystkræft metastaser til leveren.

Før du begynder proceduren, tørre ned alle overflader af det kirurgiske område med 10% blegemiddel. En time før injektionerne, behandle 8 til 15-ugers gamle BALB / c kvindelige mus med 100 mikroliter af analgesi subkutanly for smertebehandling. Påfør salve på dyrets øjne. Placer derefter musen i liggende stilling og bekræft det passende niveau af sedation ved tåklem.

Dernæst desinficere dyrets kirurgiske og omkringliggende områder, herunder halen, med tre vekslende sterile gaze-gennemblødte 2% chlorhexidinservietter og to alkoholforberedelsespudeservietter. Efter den sidste chlorhexidin tørre, bruge en steril skalpel til at gøre en 1 tommer snit i huden mellem medianen og sagittal sletterne på venstre side af munden, der starter lige under ribbenene og slutter over den fjerde inguinal brystkirtel patte, efterfulgt af en lignende en tomme snit gennem bughinden.

Nu pipetter tumorcellerne op og ned flere gange for at genbruge celleopløsningen og indlæse en 25 mikroliter aftagelig nålesprøjte, udstyret med en 32 gauge nål med 10 mikroliter af cellerne. Tryk stemplet, indtil cellerne er på spidsen af nålen, og stemplet har det rette volumen til injektion. Tør ydersiden af den indlæste nål med en steril alkohol pad for at fjerne eventuelle eksterne tumorceller, idet man sørger for at undgå nålepinde.

Derefter holder huden og peritoneal foring af medianen side af snittet med pincet, skal du bruge en steril bomuld vatpind til forsigtigt at flytte de store og tyndtarmen på en steril gaze gennemblødt i steril saltvand. Dæk de indre organer i den saltvandsblødede gaze for at opretholde den indre fugt og sterilitet. Når portalen vene er synlig, har en assistent forsigtigt holde tarmene ud af vejen for at eksponere portalen vene med den sterile vatpind og indsætte nålen 3 til 5 millimeter ind i portalen vene, cirka 10 millimeter under leveren i en mindre end 5 graders vinkel, facet side op.

Langsomt injicere den fulde mængde af tumorceller, så blodet til at flyde forbi nålen hovedet i flere sekunder for at undgå en tilbagestrømning af tumorceller ud af venen.

Da korrekt visualisering, adgang og injektion i portalvenden er afgørende, skal du tage dig tid til at sikre, at placeringen af portalvenden i forhold til nålen er tilfredsstillende, før du forsøger injektionen.

Når alle cellerne er blevet injiceret, fjernes nålen samtidig anvende blidt tryk på venen med en steril bomuld spids applikator. Brug derefter en ny steril bomuldsspidsapplikator til at holde et 0,5 til 1 centimeter firkantet stykke hemostatisk gasbind over injektionsstedet.

Efter fem minutter løftes gasbindet forsigtigt for at vurdere venelukningen. Når blodgennemstrømningen er ophørt helt, skal du fjerne gasbindet og returnere tarmene til bukhulen. Ved hjælp af en enkel, kontinuerlig, eller afbrudt sutur mønster, lukke peritoneal foring med en steril 4-0 vicryl sutur og koniske.

Efter at have lukket huden på samme måde injiceres 100 mikroliter lokalbedøvelse langs indsnitsstedet efterfulgt af subkutan levering af 0,5 milliliter steril saltvand.