Portal aderinjectie: een methode om kankermetastasen naar de lever te bestuderen

De lever is een secundaire gemetastaseerde plaats voor de meeste kankers. Om uitzaaiingen te bestuderen, kunnen we kankercellen injecteren in de poortader, die bloed van andere delen van het lichaam naar de lever vervoert.

Begin met het plaatsen van een verdoofde muis in een liggende positie. Steriliseer het kale buikgebied met chloorhexidine en alcohol. Maak met behulp van microscissors een incisie tussen ribben en de vierde borstklier aan de linkerkant van het dier zonder interne organen te beschadigen.

Plaats een gaasje gedrenkt in steriele zoutoplossing bij de incisie. Trek de darm voorzichtig uit met een steriel wattenstaafje om de poortader te onthullen en plaats deze op het gaas. Bedek de organen met het gaasje om uitdroging te voorkomen. Steek de spuitnaald met fluorescerend gelabelde kankercellen in de poortader en injecteer de cellen langzaam. Wacht een paar seconden om de terugstroming van cellen te voorkomen en verwijder voorzichtig de naald.

Na injectie reizen kankercellen meestal in de sinusoïde en dringen ze binnen in de hepatocyten in de buurt van de portaaltriade om uit te uitzaaiingen. Plaats organen terug in de buikholte en hecht de incisie. In het voorbeeldprotocol zullen we poortaderinjectie uitvoeren om borstkankermetastasen naar de lever te bestuderen.

Voordat u met de procedure begint, veegt u alle oppervlakken van het operatiegebied af met 10% bleekmiddel. Behandel een uur voor de injecties 8 tot 15 weken oude BALB/c vrouwelijke muizen met 100 microliter analgesie subcutaan voor pijnbestrijding. Breng zalf aan op de ogen van het dier. Plaats vervolgens de muis in de liggende positie en bevestig het juiste niveau van sedatie door teenknijpen.

Desinfecteer vervolgens de chirurgische en omliggende gebieden van het dier, inclusief de staart, met drie afwisselend steriele gaas-gedrenkte 2% chloorhexidinedoekjes en twee alcohol prep pad doekjes. Gebruik na het laatste chloorhexidinedoekje een steriele scalpel om een incisie van 1 inch in de huid te maken tussen de mediane en sagittale vlaktes aan de linkerkant van de mond, beginnend net onder de ribben en eindigend boven de vierde inguinale borstklierspeen, gevolgd door een vergelijkbare incisie van één inch door het buikvlies.

Pipetteer nu de tumorcellen meerdere keren op en neer om de celoplossing te resuspenden en laad een verwijderbare naaldspuit van 25 microliters, uitgerust met een 32 gauge naald met 10 microliters van de cellen. Druk de zuiger in totdat de cellen zich op de punt van de naald bevinden en de zuiger op het juiste volume is voor injectie. Veeg de buitenkant van de geladen naald af met een steriel alcoholkussen om externe tumorcellen te verwijderen en zorg ervoor dat naaldprikken worden vermeden.

Houd vervolgens de huid en peritoneale voering van de mediane kant van de incisie vast met de tang en gebruik een steriel wattenstaafje om de grote en dunne darmen voorzichtig op een steriel gaasje te bewegen dat is gedrenkt in steriele zoutoplossing. Bedek de inwendige organen in het met zoutoplossing doordrenkte gaas om het interne vocht en de steriliteit te behouden. Wanneer de poortader zichtbaar is, laat een assistent de darmen voorzichtig uit de weg houden om de poortader bloot te leggen met het steriele wattenstaafje en steek de naald 3 tot 5 millimeter in de poortader, ongeveer 10 millimeter onder de lever onder een hoek van minder dan 5 graden, schuine kant naar boven.

Injecteer langzaam het volledige volume van tumorcellen, waardoor het bloed enkele seconden langs de naaldkop kan stromen om een terugstroom van de tumorcellen uit de ader te voorkomen.

Omdat de juiste visualisatie, toegang en injectie in de poortader essentieel is, neemt u de tijd om ervoor te zorgen dat de positionering van de poortader ten opzichte van de naald bevredigend is voordat u de injectie probeert.

Wanneer alle cellen zijn geïnjecteerd, verwijdert u de naald terwijl u tegelijkertijd zachte druk uitoefent op de ader met een steriele applicator met wattenstaafje. Gebruik vervolgens een nieuwe steriele katoenen tip applicator om een vierkant stuk hemostatisch gaas van 0,5 tot 1 centimeter over de injectieplaats te houden.

Til na vijf minuten het gaas voorzichtig op om de adersluiting te beoordelen. Wanneer de bloedstroom volledig is gestopt, verwijdert u het gaas en keert u de darmen terug naar de buikholte. Sluit de peritoneale voering met behulp van een eenvoudig, continu of onderbroken hechtpatroon met een steriele 4-0 vicryl hechtdraad en taps toelopend.

Injecteer na het sluiten van de huid op dezelfde manier 100 microliter lokaal verdovingsmiddel langs de incisieplaats, gevolgd door subcutane toediening van 0,5 milliliter steriele zoutoplossing.