Portal Vene injeksjon: En metode for å studere kreftmetastase til leveren

Leveren er et sekundært metastatisk sted for de fleste kreftformer. For å studere metastase kan vi injisere kreftceller i portalvenen, som bærer blod fra andre deler av kroppen til leveren.

Begynn med å plassere en bedøvet mus i en liggende stilling. Steriliser det nakne bukområdet ved hjelp av klorhexidin og alkohol. Bruk mikroscissorer, gjør et snitt mellom ribber og den fjerde brystkjertelen på dyrets venstre side uten å skade indre organer.

Plasser en gasbindpute gjennomvåt i steril saltvann nær snittet. Trekk tarmen forsiktig ut ved hjelp av en steril bomullspinne for å avsløre portalvenen, og legg den på gasbindet. Dekk organene med gasbindputen for å forhindre tørking. Sett sprøytenålen som inneholder fluorescerende merkede kreftceller inn i portalvenen og injiser cellene langsomt. Vent noen sekunder for å forhindre tilbakestrømning av celler og forsiktig fjerne nålen.

Etter injeksjon reiser kreftceller vanligvis i sinusoiden og invaderer inn i hepatocyttene nær portaltriaden for å metastasere. Plasser organer tilbake i bukhulen og suturer snittet. I eksempelprotokollen vil vi utføre portal vene injeksjon for å studere brystkreft metastase til leveren.

Før du begynner prosedyren, tørk av alle overflatene i det kirurgiske området med 10% blekemiddel. En time før injeksjonene, behandle 8 til 15 uker gamle BALB / c kvinnelige mus med 100 mikroliter analgesi subkutant for smertebehandling. Påfør salve på dyrets øyne. Plasser deretter musen i liggende stilling og bekreft riktig sedasjonsnivå ved tåklemme.

Deretter desinfiserer du de kirurgiske og omkringliggende områdene av dyret, inkludert halen, med tre vekslende sterile gasbind-gjennomvåt 2% klorhexidinservietter og to alkohol prep pad våtservietter. Etter den siste klorhexidinserviett, bruk en steril skalpell for å lage et 1 tommers snitt i huden mellom median og sagittal sletter på venstre side av munnen, starter like under ribbenene og slutter over den fjerde inguinale brystkjertelen teat, etterfulgt av en lignende en tomme snitt gjennom bukhinnen.

Rør nå tumorcellene opp og ned flere ganger for å resuspendere celleløsningen, og last en 25 mikroliter avtagbar nålesprøyte, utstyrt med en 32 gauge nål med 10 mikroliter av cellene. Trykk stempelet ned til cellene er på spissen av nålen og stempelet er på riktig volum for injeksjon. Tørk av utsiden av den lastede nålen med en steril alkoholpute for å fjerne eventuelle eksterne tumorceller, og pass på å unngå nålepinner.

Deretter holder du huden og bukfôret på mediansiden av snittet med tang, bruk en steril bomullspinne for å forsiktig flytte store og små tarmer til en steril gasbind gjennomvåt i steril saltvann. Dekk de indre organene i saltvanns-gjennomvåt gasbind for å opprettholde den indre fuktigheten og steriliteten. Når portalvenen er synlig, må du ha en assistent som forsiktig holder tarmene ute av veien for å eksponere portalvenen med den sterile bomullspinnen og sette nålen 3 til 5 millimeter inn i portalvenen, ca. 10 millimeter under leveren i mindre enn 5 graders vinkel, skrå side opp.

Injiser sakte hele volumet av tumorceller, slik at blodet kan strømme forbi nålehodet i flere sekunder for å unngå tilbakestrømning av tumorcellene ut av venen.

Siden riktig visualisering, tilgang og injeksjon i portalvenen er viktig, ta deg tid til å sikre at plasseringen av portalvenen i forhold til nålen er tilfredsstillende før du prøver injeksjonen.

Når alle cellene er injisert, fjernet nålen samtidig som den påførte forsiktig trykk på venen med en steril bomullsspissapplikator. Bruk deretter en ny steril bomullsspissapplikator for å holde et 0,5 til 1 centimeter kvadratisk stykke hemostatisk gasbind over injeksjonsstedet.

Etter fem minutter, løft gasbindet forsiktig for å vurdere venelukkingen. Når blodstrømmen har opphørt helt, fjern gasbindet og returner tarmene til bukhulen. Bruk et enkelt, kontinuerlig eller avbrutt suturmønster, lukk bukfôret med en steril 4-0 vicryl sutur og kon.

Etter å ha lukket huden på samme måte, injiser 100 mikroliter lokalbedøvelse langs snittstedet, etterfulgt av subkutan levering av 0,5 milliliter steril saltvann.