Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Karaciğer çoğu kanser için ikincil bir metastatik bölgedir. Metastazı incelemek için, vücudun diğer bölgelerinden karaciğere kan taşıyan portal damara kanser hücreleri enjekte edebiliriz.
Uyuşturullaşmış bir fareyi geri zeka konumuna getirerek başlayın. Klorheksidin ve alkol kullanarak çıplak karın bölgesini sterilize edin. Mikrosistörler kullanarak, iç organlara zarar vermeden hayvanın sol tarafındaki kaburgalar ve dördüncü meme bezi arasında bir kesi yapın.
Kesiğin yanına steril salin içine batırılmış bir gazlı bez yerleştirin. Portal damarı ortaya çıkarmak için steril bir pamuklu çubuk kullanarak bağırsağı hafifçe çekin ve gazlı bez üzerine yerleştirin. Kurumasını önlemek için organları gazlı bezle örtün. Floresan etiketli kanser hücreleri içeren şırınga iğnesini portal damarına yerleştirin ve hücreleri yavaşça enjekte edin. Hücrelerin geri akışını önlemek için birkaç saniye bekleyin ve iğneyi dikkatlice çıkarın.
Enjeksiyondan sonra, kanser hücreleri genellikle sinüzoidde seyahat eder ve metastaz yapmak için portal üçlüsünün yakınındaki hepatositlere istila eder. Organları tekrar karın boşluğuna yerleştirin ve kesiği dikin. Örnek protokolde karaciğere meme kanseri metastazını incelemek için portal damar enjeksiyonu yapacağız.
İşleme başlamadan önce cerrahi bölgenin tüm yüzeylerini %10 çamaşır suyu ile silin. Enjeksiyonlardan bir saat önce, ağrı yönetimi için 8 ila 15 haftalık BALB / c dişi fareleri 100 mikrolitre analjezi subkutan olarak tedavi edin. Hayvanın gözlerine merhem uygulayın. Ardından, fareyi supine konumuna getirin ve uygun sedasyon seviyesini parmakla kıstırarak onaylayın.
Daha sonra, hayvanın kuyruk da dahil olmak üzere cerrahi ve çevresini üç alternatif steril gazlı bezle ıslatılmış% 2 klorheksidin mendil ve iki alkol hazırlık yastığı mendili ile dezenfekte edin. Son klorheksidin silme işleminden sonra, ağzın sol tarafındaki ortanca ve sagittal düzlükler arasında cilde 1 inçlik bir kesi yapmak için steril bir neşter kullanın, kaburgaların hemen altından başlayıp dördüncü kasık meme ucunun üzerinde sona erer, ardından peritondan benzer bir inç kesi yapılır.
Şimdi, hücre solüsyonunun yeniden dürtülmek için tümör hücrelerini birkaç kez yukarı ve aşağı borulayın ve hücrelerin 10 mikrolitresine sahip 32 kalibrelik bir iğne ile donatılmış 25 mikrolitre çıkarılabilir iğne şırıngası yükleyin. Hücreler iğnenin ucuna gelene ve piston enjeksiyon için uygun hacme gelene kadar pistonu bastırın. Herhangi bir dış tümör hücresini çıkarmak için yüklü iğnenin dışını steril bir alkol pedi ile silin, iğne çubuklarından kaçınmaya dikkat edin.
Daha sonra, kesiğin ortanca tarafının derisini ve periton astarını ön ayaklarla tutarak, büyük ve ince bağırsakları steril saline batırılmış steril bir gazlı bez üzerine dikkatlice taşımak için steril bir pamuklu çubuk kullanın. İç nemi ve steriliteyi korumak için iç organları salinle ıslatılmış gazlı bezle örtün. Portal damar görünür olduğunda, bir asistanın steril pamuklu çubukla portal damarı ortaya çıkarmak için bağırsakları yavaşça yoldan çekmesini sağlayın ve iğneyi portal damarına 3 ila 5 milimetre, karaciğerin yaklaşık 10 milimetre altında 5 dereceden daha az bir açıyla, eğim tarafı yukarı doğru yerleştirin.
Tümör hücrelerinin tam hacmini yavaşça enjekte ederek, tümör hücrelerinin damardan geri akışını önlemek için kanın birkaç saniye boyunca iğne kafasının yanından akmasını sağlar.
Portal damarına uygun görselleştirme, erişim ve enjeksiyon esas olduğundan, enjeksiyonu denemeden önce portal damarının iğneye göre konumlandırılmasının tatmin edici olduğundan emin olmak için zaman ayırın.
Tüm hücreler enjekte edildiğinde, aynı anda steril bir pamuk ucu aplikatörü ile damara hafif basınç uygularken iğneyi çıkarın. Ardından, enjeksiyon bölgesinin üzerinde 0,5 ila 1 santimetre karelik bir hemostatik gazlı bez parçası tutmak için yeni bir steril pamuk ucu aplikatörü kullanın.
Beş dakika sonra, damar kapanışını değerlendirmek için gazlı bezi dikkatlice kaldırın. Kan akışı tamamen durduğunda, gazlı bezi çıkarın ve bağırsakları karın boşluğuna geri verin. Basit, sürekli veya kesintiye uğramış bir dikiş deseni kullanarak periton astarını steril 4-0 vicryl dikiş ve konik ile kapatın.
Cildi aynı şekilde kapattıktan sonra, kesi bölgesi boyunca 100 mikrolitre lokal anestezi enjekte edin, ardından 0,5 mililitre steril salinin deri altı teslimatı.
