Portal Veneninjektion: Eine Methode zur Untersuchung der Krebsmetastasierung der Leber

Die Leber ist eine sekundäre metastasierende Stelle für die meisten Krebsarten. Um Metastasen zu untersuchen, können wir Krebszellen in die Portalvene injizieren, die Blut aus anderen Teilen des Körpers in die Leber trägt.

Beginnen Sie, indem Sie eine anästhesierte Maus in eine Supine-Position setzen. Sterilisieren Sie den nackten Bauchbereich mit Chlorhexidin und Alkohol. Mit Mikroschere, machen Sie einen Schnitt zwischen den Rippen und der vierten Brustdrüse auf der linken Seite des Tieres, ohne innere Organe zu beschädigen.

Legen Sie ein Gazepad in steriler Saline in der Nähe des Schnittes getränkt. Ziehen Sie den Darm vorsichtig heraus mit einem sterilen Wattestäbchen, um die Portalvene zu enthüllen, und legen Sie sie auf die Gaze. Bedecken Sie die Organe mit dem Gazepad, um ein Trocknen zu verhindern. Setzen Sie die Spritzennadel mit fluoreszierend gekennzeichneten Krebszellen in die Portalvene ein und injizieren Sie die Zellen langsam. Warten Sie einige Sekunden, um den Rückfluss von Zellen zu verhindern und entfernen Sie die Nadel vorsichtig.

Nach der Injektion wandern Krebszellen in der Regel im Sinusoid und dringen in die Hepatozyten in der Nähe der Portaltriade ein, um sie zu metastasieren. Legen Sie Organe zurück in die Bauchhöhle und verschließen Sie den Schnitt. Im Beispielprotokoll führen wir eine Portalveneninjektion durch, um die Metastasierung von Brustkrebs in die Leber zu untersuchen.

Vor Beginn des Eingriffs alle Oberflächen des Operationsbereichs mit 10% Bleichmittel abwischen. Eine Stunde vor den Injektionen 8 bis 15 Wochen alte BALB/c weibliche Mäuse mit 100 Mikroliter Analgesie subkutan zur Schmerztherapie behandeln. Tragen Sie Salbe auf die Augen des Tieres auf. Legen Sie dann die Maus in die Supine-Position und bestätigen Sie die entsprechende Sedierung sedierung durch Zehenkneifen.

Als nächstes desinfizieren Sie die chirurgischen und umliegenden Bereiche des Tieres, einschließlich des Schwanzes, mit drei abwechselnd sterilen Gaze-getränkten 2% Chlorhexidin-Tüchern und zwei Alkohol-Prep-Pad-Tüchern. Nach dem letzten Chlorhexidin-Wisch, verwenden Sie ein steriles Skalpell, um einen 1 Zoll Schnitt in die Haut zwischen den medianen und sagittalen Ebenen auf der linken Seite des Mundes zu machen, beginnend direkt unter den Rippen und endet über der vierten Leistenbrust zitte, gefolgt von einem ähnlichen ein Zoll Schnitt durch das Peritoneum.

Nun pipette die Tumorzellen mehrmals nach oben und unten, um die Zelllösung wieder aufzuhängen, und laden Sie eine 25 Mikroliter abnehmbare Nadelspritze, ausgestattet mit einer 32-Spur-Nadel mit 10 Mikroliter der Zellen. Drücken Sie den Kolben, bis sich die Zellen an der Spitze der Nadel befinden und der Kolben das entsprechende Injektionsvolumen hat. Wischen Sie die Außenseite der geladenen Nadel mit einem sterilen Alkoholpad ab, um externe Tumorzellen zu entfernen, wobei Sie darauf achten, Nadelstiche zu vermeiden.

Dann, halten die Haut und Peritoneal-Futter der medianen Seite des Inzisions mit der Zange, verwenden Sie einen sterilen Wattestäbchen, um vorsichtig den großen und kleinen Darm auf eine sterile Gaze in steriler Saline getränkt bewegen. Bedecken Sie die inneren Organe in der mit Wasserlinie getränkten Gaze, um die innere Feuchtigkeit und Sterilität aufrechtzuerhalten. Wenn die Portalvene sichtbar ist, lassen Sie einen Assistenten den Darm vorsichtig aus dem Weg halten, um die Portalvene mit dem sterilen Wattestäbchen freizulegen und die Nadel 3 bis 5 Millimeter in die Portalvene, etwa 10 Millimeter unter der Leber in einem Winkel von weniger als 5 Grad, schräg nach oben zu legen.

Injizieren Sie langsam das volle Volumen der Tumorzellen, so dass das Blut für einige Sekunden am Nadelkopf vorbeifließen kann, um einen Rückfluss der Tumorzellen aus der Vene zu vermeiden.

Da die richtige Visualisierung, der Zugriff und die Injektion in die Portalvene unerlässlich ist, nehmen Sie sich die Zeit, um sicherzustellen, dass die Positionierung der Portalvene in Bezug auf die Nadel vor dem Injektionsversuch zufriedenstellend ist.

Wenn alle Zellen injiziert wurden, entfernte die Nadel und übte gleichzeitig sanften Druck auf die Vene mit einem sterilen Baumwollspitzenapplikator aus. Verwenden Sie dann einen neuen sterilen Baumwollspitzen-Applikator, um ein 0,5 bis 1 Zentimeter quadratisches Stück hämostatische Gaze über die Injektionsstelle zu halten.

Nach fünf Minuten die Gaze vorsichtig anheben, um den Venenverschluss zu beurteilen. Wenn der Blutfluss vollständig eingestellt ist, entfernen Sie die Gaze und bringen Sie den Darm in die Bauchhöhle zurück. Schließen Sie mit einem einfachen, kontinuierlichen oder unterbrochenen Nahtmuster das Peritonealfutter mit einer sterilen 4-0-Vicryl-Nähte und Verjüngung.

Nach dem Schließen der Haut in der gleichen Weise, injizieren 100 Mikroliter der lokalanästhesieten entlang der Schnittstelle, gefolgt von subkutaner Lieferung von 0,5 Milliliter steriler Saline.