Inyección de venas portal: un método para estudiar la metástasis del cáncer en el hígado

El hígado es un sitio metastásico secundario para la mayoría de los cánceres. Para estudiar metástasis, podemos inyectar células cancerosas en la vena del portal, que transporta sangre de otras partes del cuerpo al hígado.

Comience colocando un ratón anestesiado en una posición supina. Esterilizar la zona abdominal desnuda con clorhexidina y alcohol. Usando microscisores, hacer una incisión entre las costillas y la cuarta glándula mamaria en el lado izquierdo del animal sin dañar los órganos internos.

Coloque una gasa empapada en solución salina estéril cerca de la incisión. Tire suavemente del intestino con un hisopo de algodón estéril para revelar la vena del portal y colóquelo en la gasa. Cubra los órganos con la gasa para evitar el secado. Inserte la aguja de la jeringa que contiene células cancerosas etiquetadas fluorescentemente en la vena del portal e inyecte lentamente las células. Espere unos segundos para evitar el flujo posterior de las células y retire cuidadosamente la aguja.

Después de la inyección, las células cancerosas generalmente viajan en el sinusoide e invaden en los hepatocitos cerca de la tríada portal para hacer metástasis. Coloque los órganos de nuevo en la cavidad abdominal y sutura la incisión. En el protocolo de ejemplo, realizaremos la inyección de venas portal para estudiar la metástasis del cáncer de mama en el hígado.

Antes de comenzar el procedimiento, limpie todas las superficies del área quirúrgica con un 10% de lejía. Una hora antes de las inyecciones, trate a ratones hembra BALB/c de 8 a 15 semanas de edad con 100 microlitros de analgesia subcutáneamente para el control del dolor. Aplicar ungüento a los ojos del animal. A continuación, coloque el ratón en la posición supina y confirme el nivel adecuado de sedación por pellizcar el dedo del pie.

A continuación, desinfectar las áreas quirúrgicas y circundantes del animal, incluida la cola, con tres toallitas alternas empapadas de gasa estéril 2% clorhexidina y dos toallitas de almohadilla de preparación de alcohol. Después de la última toallita de clorhexidina, utilice un bisturí estéril para hacer una incisión de 1 pulgada en la piel entre las llanuras medianas y sagitales en el lado izquierdo de la boca, comenzando justo debajo de las costillas y terminando por encima de la cuarta tetina inguinal de la glándula mammary, seguida de una incisión similar de una pulgada a través del peritoneo.

Ahora, pipetear las células tumorales hacia arriba y hacia abajo varias veces para liberar la solución celular, y cargar una jeringa de aguja extraíble de 25 microlitros, equipada con una aguja del calibre 32 con 10 microlitros de las células. Deprima el émbolo hasta que las células estén en la punta de la aguja y el émbolo esté en el volumen adecuado para inyección. Limpie el exterior de la aguja cargada con una almohadilla de alcohol estéril para eliminar las células tumorales externas, teniendo cuidado de evitar los palitos de aguja.

Luego, sosteniendo la piel y el revestimiento peritoneal del lado medio de la incisión con los fórceps, utilice un hisopo de algodón estéril para mover cuidadosamente los intestinos grandes y delgados a una gasa estéril empapada en solución salina estéril. Cubra los órganos internos de la gasa empapada en solución salina para mantener la humedad interna y la esterilidad. Cuando la vena del portal sea visible, pida a un asistente que sostenga suavemente los intestinos fuera del camino para exponer la vena del portal con el hisopo de algodón estéril e inserte la aguja de 3 a 5 milímetros en la vena del portal, aproximadamente 10 milímetros por debajo del hígado en un ángulo inferior a 5 grados, biselado hacia arriba.

Inyecte lentamente el volumen completo de células tumorales, permitiendo que la sangre fluya más allá de la cabeza de la aguja durante varios segundos para evitar un flujo posterior de las células tumorales fuera de la vena.

Dado que la visualización, el acceso y la inyección adecuados en la vena del portal son esenciales, tómese el tiempo para asegurarse de que el posicionamiento de la vena del portal en relación con la aguja sea satisfactorio antes de intentar la inyección.

Cuando se hayan inyectado todas las células, retire la aguja mientras aplica simultáneamente una presión suave a la vena con un aplicador estéril de punta de algodón. A continuación, utilice un nuevo aplicador de punta de algodón estéril para sostener una pieza cuadrada de 0,5 a 1 centímetro de gasa hemostática sobre el lugar de inyección.

Después de cinco minutos, levante cuidadosamente la gasa para evaluar el cierre de la vena. Cuando el flujo sanguíneo haya cesado por completo, retire la gasa y devuelva los intestinos a la cavidad abdominal. Usando un patrón de sutura simple, continuo o interrumpido, cierre el forro peritoneal con una sutura y una cónico vicryl estériles 4-0.

Después de cerrar la piel de la misma manera, inyectar 100 microlitros de anestésico local a lo largo del sitio de la incisión, seguido de la entrega subcutánea de 0,5 mililitros de solución salina estéril.