Портал Vein Инъекции: Метод для изучения метастазов рака в печень

Печень является вторичным метастатическим сайтом для большинства видов рака. Для изучения метастазов, мы можем вводить раковые клетки в портальные вены, которая несет кровь из других частей тела в печень.

Начните с размещения обезболивающей мыши в положении на спине. Стерилизовать голую область живота с помощью хлоргексидина и алкоголя. Используя микрошисоры, сделайте разрез между ребрами и четвертой молочной железой на левой стороне животного, не повреждая внутренние органы.

Поместите марлевую площадку, пропитанную стерильным солевым раствором возле разреза. Аккуратно вытащите кишечник с помощью стерильного ватным тампоном, чтобы выявить портал вены, и поместите его на марлю. Обложка органов с марлевой площадкой для предотвращения высыхания. Вставьте шприц иглы, содержащие флуоресцентно помечены раковые клетки в портальные вены и медленно вводить клетки. Подождите несколько секунд, чтобы предотвратить задний поток клеток и тщательно удалить иглу.

После инъекции раковые клетки обычно путешествуют в синусоиде и вторгаются в гепатоциты возле портала триады, чтобы метастазировать. Поместите органы обратно в брюшную полость и шов разрез. В примере протокола, мы будем выполнять инъекции портала вены для изучения метастазов рака молочной железы в печень.

Перед началом процедуры протрите все поверхности хирургической области 10% отбеливателем. За час до инъекций, лечить от 8 до 15 недель BALB / C самок мышей с 100 микролитров анальгезии подкожно для боли. Нанесите мазь на глаза животного. Затем поместите мышь в положение на спине и подтвердите соответствующий уровень сеяния на щипать.

Далее, дезинфицировать хирургические и прилегающие районы животного, в том числе хвост, с тремя чередующихся стерильных марле пропитанной 2% хлоргексидина салфетки и два спирта prep pad салфетки. После последнего хлоргексидина протрите, используйте стерильный скальпель, чтобы сделать 1 дюймовый разрез в кожу между медианной и sagittal равнины на левой стороне рта, начиная чуть ниже ребер и заканчивая выше четвертой паховой молочной железы соты, а затем аналогичные один дюйм разрез через брюшной полости.

Теперь, пипетки опухолевых клеток вверх и вниз несколько раз, чтобы повторно использовать клеточный раствор, и загрузить 25 микролитров съемный шприц иглы, оснащенный 32 калибровочной иглы с 10 микролитров клеток. Депрессия поршень, пока клетки находятся на кончике иглы и поршень находится на соответствующем объеме для инъекции. Протрите внешнюю часть загруженной иглы стерильной алкогольной прокладкой, чтобы удалить любые внешние опухолевые клетки, заботясь, чтобы избежать иглы палочки.

Затем, держа кожу и перитонеальную подкладку средней стороны разреза с помощью типсов, используйте стерильный ватный тампон, чтобы тщательно переместить большой и тонкий кишечник на стерильную марлю, пропитанную стерильным солевым раствором. Обложка внутренних органов в солевой марли для поддержания внутренней влаги и бесплодия. Когда вена портала видна, ими помощник аккуратно удержит кишечник, чтобы разоблачить вену портала стерильным ватным тампоном и вставьте иглу от 3 до 5 миллиметров в портвейную вену, примерно на 10 миллиметров ниже печени под углом менее 5 градусов, скошенную сторону вверх.

Медленно вводить полный объем опухолевых клеток, что позволяет крови течь мимо иглы головы в течение нескольких секунд, чтобы избежать обратного потока опухолевых клеток из вены.

Поскольку правильная визуализация, доступ и инъекция в вену портала имеет важное значение, найтмит время, чтобы убедиться, что позиционирование вены портала по отношению к игле является удовлетворительным до попытки инъекции.

Когда все клетки были введены, удалены иглы при одновременном применении мягкого давления на вену с стерильным аппликатором наконечник хлопка. Затем используйте новый стерильный аппликатор наконечник хлопка, чтобы держать 0,5 до 1 сантиметра квадратный кусок гемостатической марли над местом инъекции.

Через пять минут осторожно поднимите марлю, чтобы оценить замыкание вены. Когда кровоток полностью прекратился, удалите марлю и верните кишечник в брюшную полость. Используя простой, непрерывный или прерванный шовный узор, закройте перитонеальную подкладку стерильным 4-0 vicryl швом и конусом.

После закрытия кожи таким же образом, ввись 100 микролитров местной анестезии вдоль места разреза, а затем подкожной доставки 0,5 миллилитров стерильного солевого раствора.