Portal Vein Injection: Um método para estudar metástase do câncer no fígado

O fígado é um local metastático secundário para a maioria dos cânceres. Para estudar a metástase, podemos injetar células cancerígenas na veia portal, que transporta sangue de outras partes do corpo para o fígado.

Comece colocando um rato anestesiado em uma posição supina. Esterilize a área abdominal nua usando clorexidina e álcool. Usando microscisores, faça uma incisão entre costelas e a quarta glândula mamária do lado esquerdo do animal sem danificar órgãos internos.

Coloque uma almofada de gaze encharcada em soro fisiológico estéril perto da incisão. Puxe suavemente o intestino para fora usando um cotonete estéril para revelar a veia portal, e coloque-o sobre a gaze. Cubra os órgãos com a gaze para evitar a secagem. Insira a agulha de seringa contendo células cancerígenas fluorescentes rotuladas na veia portal e injete lentamente as células. Aguarde alguns segundos para evitar o fluxo de refluxo das células e remova cuidadosamente a agulha.

Após a injeção, as células cancerígenas geralmente viajam no sinusoide e invadem os hepatócitos perto da tríade portal para metástase. Coloque os órgãos de volta na cavidade abdominal e sutura a incisão. No protocolo de exemplo, realizaremos a injeção de veia portal para estudar a metástase do câncer de mama no fígado.

Antes de iniciar o procedimento, limpe todas as superfícies da área cirúrgica com 10% de alvejante. Uma hora antes das injeções, trate camundongos fêmeas BALB/c de 8 a 15 semanas de idade com 100 microliters de analgesia subcutânea para o tratamento da dor. Aplique pomada aos olhos do animal. Em seguida, coloque o mouse na posição supina e confirme o nível apropriado de sedação por pinça do dedo do dedo do sol.

Em seguida, desinfete as áreas cirúrgicas e circundantes do animal, incluindo a cauda, com três lenços de 2% de clorexidina embebidos por gaze estéril alternados e dois lenços de almofada de preparação para álcool. Após o último lenço clorhexidina, use um bisturi estéril para fazer uma incisão de 1 polegada na pele entre as planícies medianas e sagita no lado esquerdo da boca, começando logo abaixo das costelas e terminando acima da quarta de glândula mamária inguinal, seguida por uma incisão semelhante de uma polegada através do peritônio.

Agora, pipeta as células tumorais para cima e para baixo várias vezes para resuspensar a solução celular, e carregar uma seringa de agulha removível de 25 microliters, equipada com uma agulha calibre 32 com 10 microliters das células. Pressione o êmbolo até que as células estejam na ponta da agulha e o êmbolo esteja no volume apropriado para injeção. Limpe a parte externa da agulha carregada com uma almofada de álcool estéril para remover quaisquer células tumorais externas, tomando cuidado para evitar agulhas.

Em seguida, segurando a pele e o revestimento peritoneal do lado mediano da incisão com os fórceps, use um cotonete estéril para mover cuidadosamente os intestinos grosso e pequeno em uma gaze estéril encharcada em soro fisiológico estéril. Cubra os órgãos internos na gaze encharcada de soro fisiológico para manter a umidade interna e a esterilidade. Quando a veia portal estiver visível, tenha um assistente segurando suavemente os intestinos fora do caminho para expor a veia portal com o cotonete estéril e inserir a agulha de 3 a 5 milímetros na veia portal, aproximadamente 10 milímetros abaixo do fígado em um ângulo de menos de 5 graus, lado de bisel para cima.

Injete lentamente o volume total das células tumorais, permitindo que o sangue passe pela cabeça da agulha por vários segundos para evitar um fluxo de volta das células tumorais para fora da veia.

Como a visualização adequada, o acesso e a injeção na veia portal são essenciais, aproveite para garantir que o posicionamento da veia portal em relação à agulha seja satisfatório antes de tentar a injeção.

Quando todas as células tiverem sido injetadas, remova a agulha ao mesmo tempo aplicando pressão suave na veia com um aplicador de ponta de algodão estéril. Em seguida, use um novo aplicador de ponta de algodão estéril para segurar um pedaço quadrado de 0,5 a 1 centímetro quadrado de gaze hemostática sobre o local da injeção.

Após cinco minutos, levante cuidadosamente a gaze para avaliar o fechamento da veia. Quando o fluxo sanguíneo cessar completamente, remova a gaze e devolva os intestinos para a cavidade abdominal. Usando um padrão de sutura simples, contínuo ou interrompido, feche o revestimento peritoneal com uma sutura vicríl estéril 4-0 e afunilar.

Após fechar a pele da mesma forma, injete 100 microlitadores de anestésicos locais ao longo do local da incisão, seguidos pela entrega subcutânea de 0,5 mililitros de soro fisiológico estéril.