포털 정맥 주입: 간암 전이를 연구하는 방법

간은 대부분의 암을 위한 이차 전이성 사이트입니다. 전이를 연구하기 위해, 우리는 바디의 그밖 부분에서 간으로 혈액을 전송하는 포털 정맥으로 암세포를 주입할 수 있습니다.

먼저 마취된 마우스를 척추 위치에 배치합니다. 클로르헨시딘과 알코올을 사용하여 맨복부 부위를 살균하십시오. 미세 사이저를 사용하여, 내부 장기를 손상시키지 않고 동물의 왼쪽에 갈비뼈와 네 번째 유방 선 사이의 절개를합니다.

절개 근처에 멸균 식염수에 담근 거즈 패드를 놓습니다. 멸균 면봉을 사용하여 내장을 부드럽게 당겨 포털 정맥을 드러내고 거즈위에 놓습니다. 건조를 방지하기 위해 거즈 패드로 장기를 덮습니다. 형광으로 표지된 암세포를 함유한 주사기 바늘을 포털 정맥에 삽입하고 천천히 세포를 주입한다. 세포의 역류를 방지하고 조심스럽게 바늘을 제거하기 위해 몇 초 동안 기다립니다.

주사 후, 암세포는 일반적으로 부비동성으로 이동하고 전이하기 위하여 포털 삼각체 근처의 간세포로 침입합니다. 장기를 복강으로 다시 넣고 절개를 봉합합니다. 실시예 프로토콜에서, 우리는 간유방암 전이를 연구하기 위하여 포털 정맥 주입을 능력을 발휘할 것입니다.

시술을 시작하기 전에 10 %의 표백제로 수술 영역의 모든 표면을 닦아냅니다. 주사 1시간 전에 통증 관리를 위해 100마이크로리터의 진통제를 피형적으로 처리하십시오. 동물의 눈에 연고를 바르습니다. 그런 다음 마우스를 supine 위치에 배치하고 발가락 핀치에 의해 적절한 수준의 착식 수준을 확인합니다.

다음으로, 꼬리를 포함한 동물의 외과 및 주변 부위를 소독하고, 3개의 번갈아 멸균 거즈에 담근 2% 클로르헤시딘 물티슈와 2개의 알코올 준비 패드 물티슈를 사용한다. 마지막 클로르헨시딘 닦아 후, 멸균 메스를 사용하여 입 왼쪽의 중앙분리대와 처상 평원 사이의 피부에 1인치 절개를 하고, 갈비뼈 바로 아래에서 시작하여 네 번째 잉구유방 유방선 젖꼭지 위로 끝나는 다음 복막을 통해 비슷한 1인치 절개를 합니다.

지금, 종양 세포를 위아래로 여러 번 피펫하여 세포 용액을 재보페하고, 세포의 10 마이크로리터가 장착된 32 게이지 바늘을 장착한 25마이크로리터 이동식 바늘 주사기를 적재한다. 세포가 바늘의 끝에 있고 플런저가 주입을 위한 적당한 양에 있기 전까지는 플런저를 우울하게 합니다. 적재된 바늘의 바깥쪽을 멸균 알코올 패드로 닦아 외부 종양 세포를 제거하고 바늘 스틱을 피하십시오.

이어서, 포셉을 가진 절개의 중앙쪽의 피부와 하중 안대기를 잡고, 멸균 면봉을 사용하여 크고 작은 내장을 멸균 식염수에 담근 멸균 거즈에 조심스럽게 움직입니다. 식염수에 흠뻑 젖은 거즈에 내부 장기를 덮어 내부 수분과 멸균을 유지합니다. 포탈 정맥이 보이면, 조교가 멸균 면봉으로 포털 정맥을 노출시키고 바늘을 3~5밀리미터를 포털 정맥에 삽입하는 방법에서 내장을 부드럽게 잡고, 간 아래 약 10mm를 5도 이하로, 비스벨 측으로 한다.

천천히 종양 세포의 전체 볼륨을 주입하여 혈액이 바늘 머리를 지나 몇 초 동안 흐르도록하여 종양 세포의 역류를 피하십시오.

적절한 시각화, 접근 및 포탈 정맥내주사가 필수적이기 때문에, 주사를 시도하기 전에 바늘과 관련하여 포털 정맥의 위치가 만족되는지 확인하는 데 시간을 할애하십시오.

모든 세포가 주입되었을 때, 동시에 멸균 면 팁 어플리케이터와 정맥에 부드러운 압력을 가하면서 바늘을 제거. 이어서, 새로운 멸균 면 팁 어플리케이터를 사용하여 0.5~1센티미터의 혈전성 거즈조각을 주입 부위에 보관한다.

5분 후, 거즈를 조심스럽게 들어 올려 정맥 폐쇄를 평가합니다. 혈류가 완전히 중단되면 거즈를 제거하고 내장을 복강으로 되돌려 보입니다. 단순하고 연속적이거나 중단된 봉합사 패턴을 사용하여 멸균 4-0 부당봉과 테이퍼로 각막 안감을 닫습니다.

같은 방식으로 피부를 닫은 후 절개 부위를 따라 국소 마취제 100 마이크로리터를 주입한 다음 멸균 식염수 0.5 밀리리터를 피하로 전달합니다.