从鼠尾基因组DNA提取

这是一只 10 天大的小鼠幼崽，我将进行尾部活检，然后从它的尾巴中提取基因组 DNA。所以我要做的是剪掉它的尾巴一点，大约大约 3 毫米，然后我将这块尾巴放入一个 einor 管中，然后将 einor 管放在干冰上。现在，为了避免从一只鼠标到另一只鼠标的污染，我通常会在我最后一次切割的部分标记剃须刀片。

这样，对于下一只鼠标，我一定会使用一块干净的剃须刀片进行下一次尾部活检。为了区分猫窝中的不同老鼠，您需要一种方法来识别老鼠。一种方法是使用此处显示的耳孔打孔器在他们的耳朵上打一个洞。

轻轻地抓住老鼠的脖子，就像这样，把它翻过来，用手指捏住它的尾巴。用另一只手刺穿耳孔，然后快速剪断鼠标的耳朵。看到那有多轻松了吗？

好了，现在你可以看到这些 einor 管里有一些尾巴碎片，现在我要添加有助于它们消化的溶液。首先，我将添加 720 μL 的 STE 溶液，然后我将添加 30 μL 的蛋白质。Ace K.So 这是我们在消化前切下的那块尾巴。

现在我要将尾片放在 55 度的加热块上。许多协议要求以 55 度的连续运动摇摆，但就我的目的而言，这不是必需的，因为我将对尾部部件进行涡旋。现在，我将对这块尾巴进行两秒钟的涡旋。

一、二。所以涡旋后，看看这里 einor 管内剩下的东西，你可以看到那块尾巴已经完全溶解，并在 70 摄氏度下激活蛋白酶 K，持续 5 分钟。在冰上淬火 5 分钟。

在微量离心机中全速旋转尾片 10 分钟。在该微型离心机中，全速为 13， 000 RPM。当消化尾部旋转时，标记一些 einor管用 750 μL 的异丙醇填充 einor管。

在旋转消化的尾部后，头发和未消化的材料将在管式醒酒器底部形成一个颗粒。含有消化物质、STE 和蛋白酶 K 的溶液进入含有异丙醇 DNA 的日出管中，将开始从溶液中出来，呈现鬼状和羽毛状，就在气泡周围游动的是从小鼠尾巴中分离出来的基因组 DNA。将异丙醇和 STE 溶液混合后，基因组 DNA 将从溶液中出来，它看起来像一个小球，在微量离心机中全速旋转沉淀的基因组 DNA 5 分钟。

试管底部是我们沉淀的基因组 DNA。现在我要吸出试管内的溶液，只留下基因组 DNA 沉淀。每次抽吸另一根管子时，我都会更换管道。

宠物尖端的吸气器尖端。吸出 STE 和异丙醇后，我将加入 1 毫升 70% 乙醇来洗涤基因组 DNA 沉淀。因为基因组 DNA 沉淀通常粘附在微量离心管的侧面，很难在 70% 乙醇中彻底清洗，所以您需要将其耙过我这里的微量离心管架。

你可以像这样做。因此，以下是基因组 DNA 在沉淀并在 70% 乙醇中洗涤后的情况。我将再次全速离心 5 分钟，然后在基因组 DNA 沉淀洗涤后吸出 70% 乙醇离心。

他们的 70% 乙醇全速喷射 5 分钟，吸出 70% 乙醇，让 DNA 干燥 5 分钟。看看试管底部的基因组 DNA 沉淀，它大约是你想要的干燥度。因此，我已经从小鼠尾巴上干燥了基因组 DNA 颗粒，现在我要在 pH 值为 8 的情况下加入 100 微升 40 毫摩尔 tris。

因此，我在 50 摄氏度下获得了基因组 DNA，它比添加室温更快地进入溶液。在 50 度下大约一个小时左右后，我会将其冷冻或置于 4 度，直到我想运行 PCR 反应以真正找出哪些小鼠对我的转基因呈阳性。