Name: 从鼠尾基因组DNA提取 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: 学习从10日龄小鼠幼崽尾部提取基因组DNA的标准化操作流程，掌握避免交叉污染的关键技术要点，了解耳标打孔法进行个体识别的方法，为后续PCR基因型鉴定提供高质量DNA样本。

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<ol style="margin-top: 0in">
<li>剪取尾尖组织（3 mm）并标记耳朵。</li>
<li>加入 720 ml STE 缓冲液和 30 ml 蛋白酶 K（10 mg/ml 储存液）。</li>
<li>在 55°C 加热块中孵育，每小时涡旋振荡 10 秒（最高速度），持续 3 小时。</li>
<li>在 70°C 灭活蛋白酶 K，持续 5 分钟。</li>
<li>冰上淬灭 5 分钟。</li>
<li>将尾部 DNA 离心&nbsp;10 分钟（最高速度）。</li>
<li>将上清液倾入新管中，管内预先加入 720 ml 异丙醇。&nbsp; </li>
<li>通过倒置离心管或涡旋振荡使 DNA 沉淀。</li>
<li>以最高速度离心 5 分钟使 DNA 沉淀。 弃去上清液。</li>
<li>用 70% 乙醇洗涤沉淀。</li>
<li>以最高速度离心基因组 DNA 5 分钟。 弃去上清液。</li>
<li>让 DNA 沉淀在室温下干燥 1–2 分钟。</li>
<li>根据沉淀大小，将 DNA 重悬于 100–200 ml 溶液中。</li>
<li>将离心管置于 55°C 水浴中 1 小时，以促进 DNA 溶解。&nbsp; </li>
</ol>

从小鼠尾部提取基因组dna

Isolation of Genomic DNA from Mouse Tails

从小鼠尾部提取基因组DNA

这是一只出生10天的小鼠幼崽，我将取其尾部组织样本，然后从中提取基因组DNA。具体操作是剪下约3毫米长的尾部组织，将这段尾组织放入一个离心管中，并将离心管置于干冰上保存。为了防止不同小鼠之间的样本污染，我通常会在剃刀刀片上标记上次切割的位置。这样，在处理下一只小鼠时，我将确保使用新的刀片进行下一次尾部组织取样。为了区分同窝小鼠中的不同个体，你需要一种标记小鼠的方法。其中一种方法是使用图中所示的耳缘打孔器，在小鼠耳朵上打孔以作标识。轻轻地像这样抓住小鼠颈部的皮肤，将其翻转过来，并用手指夹住尾巴。另一只手抓住耳朵的穿孔处，迅速在小鼠耳朵上剪一下。看到这个过程多么无痛了吗？现在可以看到，我已经将一些尾部组织片段放入了这些离心管中，接下来我将加入有助于消化的溶液。首先加入 720 µL 的 STE 溶液，然后加入 30 µL 的蛋白酶 K。这是我们在消化前剪取的尾部组织片段的外观。现在我将把尾部组织置于55°C的加热块上。许多实验方案要求在55°C下持续摇动，但就我的实验目的而言，这并非必要，因为我将对尾部组织进行涡旋振荡。现在我将对这段尾部组织涡旋振荡两秒钟。一、二。涡旋处理后，观察离心管内剩余物，可见尾部组织已完全溶解，在70°C下激活蛋白酶K 5分钟，然后在冰上淬灭5分钟。将尾部组织在微量离心机中以最大速度离心10分钟。在此微量离心机中，最大速度为13,000 RPM。在消化尾部组织离心的同时，标记若干微量离心管，并向其中加入750 µL异丙醇。离心消化后的尾段后，毛发和未消化的组织将在离心管底部形成沉淀。含有消化产物的上清液中含有STE溶液和蛋白酶K，将其加入含有异丙醇的微量离心管中后，DNA将开始从溶液中析出，呈现半透明、羽毛状的形态，而在气泡周围漂浮的丝状物即为从小鼠尾部提取的基因组DNA。混合异丙醇与STE溶液后，基因组DNA会析出并形成此处所示的小球状物，在微型离心机中全速离心5分钟，使沉淀的基因组DNA沉降。 在离心管底部可以看到我们沉淀的基因组 DNA。现在我将吸出管内的溶液，仅留下基因组 DNA 沉淀。每次吸取另一根离心管中的液体时，我都会更换移液枪头。将移液器的吸头尖端置于该吸液器的尖端。吸除STE溶液和异丙醇后，我将加入一毫升70%乙醇以清洗基因组DNA沉淀。由于基因组DNA沉淀通常附着在微量离心管管壁上，难以完全脱离并充分在70%乙醇中洗涤，因此您需要用移液器吸头在下方的微量离心管架上来回刮擦，以使沉淀脱离管壁。您可以按如下方式操作。这是基因组DNA在沉淀并用70%乙醇洗涤后的外观。我将再次以最高速离心五分钟，然后吸除70%乙醇，以沉淀经过洗涤后的基因组DNA沉淀物。用70%乙醇在全速下离心5分钟，然后吸除70%乙醇，并让DNA干燥5分钟。观察试管底部的基因组DNA沉淀，干燥程度以接近此状态为宜。目前我已将从小鼠尾部提取的基因组DNA沉淀完全干燥，接下来将加入100 µL pH为8的40 mmol/L Tris溶液。因此，我将基因组DNA置于50摄氏度，这样它比在室温下能更快地溶解。在50摄氏度下放置约一小时后，我会将其冷冻或保存在4摄氏度，直到准备进行PCR反应，以确定哪些小鼠对我的转基因呈阳性。

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Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

从鼠尾基因组DNA提取

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使用Sigma公司的Extract-N-Amp组织PCR试剂盒快速对小鼠组织进行基因分型

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一种用于外周血采集和血浆分离的小鼠尾尖剪取操作方法

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关键词：转基因小鼠，卵母细胞，显微注射，基因修饰，胚胎操作

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学习从10日龄小鼠幼崽尾部提取基因组DNA的标准化操作流程，掌握避免交叉污染的关键技术要点，了解耳标打孔法进行个体识别的方法，为后续PCR基因型鉴定提供高质量DNA样本。

从小鼠尾部提取基因组DNA

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