Name: 从鼠尾基因组DNA提取 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: 学习从10日龄小鼠幼崽尾部提取基因组DNA的标准化操作流程，掌握避免交叉污染的关键技术要点，了解耳标打孔法进行个体识别的方法，为后续PCR基因型鉴定提供高质量DNA样本。

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<ol style="margin-top: 0in">
<li>剪取尾尖组织（3 mm）并标记耳朵。</li>
<li>加入 720 ml STE 缓冲液和 30 ml 蛋白酶 K（10 mg/ml 储存液）。</li>
<li>在 55°C 加热块中孵育，每小时涡旋振荡 10 秒（最高速度），持续 3 小时。</li>
<li>在 70°C 灭活蛋白酶 K，持续 5 分钟。</li>
<li>冰上淬灭 5 分钟。</li>
<li>将尾部 DNA 离心&nbsp;10 分钟（最高速度）。</li>
<li>将上清液倾入新管中，管内预先加入 720 ml 异丙醇。&nbsp; </li>
<li>通过倒置离心管或涡旋振荡使 DNA 沉淀。</li>
<li>以最高速度离心 5 分钟使 DNA 沉淀。 弃去上清液。</li>
<li>用 70% 乙醇洗涤沉淀。</li>
<li>以最高速度离心基因组 DNA 5 分钟。 弃去上清液。</li>
<li>让 DNA 沉淀在室温下干燥 1–2 分钟。</li>
<li>根据沉淀大小，将 DNA 重悬于 100–200 ml 溶液中。</li>
<li>将离心管置于 55°C 水浴中 1 小时，以促进 DNA 溶解。&nbsp; </li>
</ol>

从小鼠尾部提取基因组dna

Isolation of Genomic DNA from Mouse Tails

从小鼠尾部提取基因组DNA

这是一只出生10天的小鼠幼崽，我将取其尾部组织样本，然后从中提取基因组DNA。具体操作是剪下约3毫米长的尾部组织，将这段尾组织放入一个离心管中，并将离心管置于干冰上保存。为了防止不同小鼠之间的样本污染，我通常会在剃刀刀片上标记上次切割的位置。这样，在处理下一只小鼠时，我将确保使用新的刀片进行下一次尾部组织取样。为了区分同窝小鼠中的不同个体，你需要一种标记小鼠的方法。其中一种方法是使用图中所示的耳缘打孔器，在小鼠耳朵上打孔以作标识。轻轻地像这样抓住小鼠颈部的皮肤，将其翻转过来，并用手指夹住尾巴。另一只手抓住耳朵的穿孔处，迅速在小鼠耳朵上剪一下。看到这个过程多么无痛了吗？现在可以看到，我已经将一些尾部组织片段放入了这些离心管中，接下来我将加入有助于消化的溶液。首先加入 720 µL 的 STE 溶液，然后加入 30 µL 的蛋白酶 K。这是我们在消化前剪取的尾部组织片段的外观。现在我将把尾部组织置于55°C的加热块上。许多实验方案要求在55°C下持续摇动，但就我的实验目的而言，这并非必要，因为我将对尾部组织进行涡旋振荡。现在我将对这段尾部组织涡旋振荡两秒钟。一、二。涡旋处理后，观察离心管内剩余物，可见尾部组织已完全溶解，在70°C下激活蛋白酶K 5分钟，然后在冰上淬灭5分钟。将尾部组织在微量离心机中以最大速度离心10分钟。在此微量离心机中，最大速度为13,000 RPM。在消化尾部组织离心的同时，标记若干微量离心管，并向其中加入750 µL异丙醇。离心消化后的尾段后，毛发和未消化的组织将在离心管底部形成沉淀。含有消化产物的上清液中含有STE溶液和蛋白酶K，将其加入含有异丙醇的微量离心管中后，DNA将开始从溶液中析出，呈现半透明、羽毛状的形态，而在气泡周围漂浮的丝状物即为从小鼠尾部提取的基因组DNA。混合异丙醇与STE溶液后，基因组DNA会析出并形成此处所示的小球状物，在微型离心机中全速离心5分钟，使沉淀的基因组DNA沉降。 在离心管底部可以看到我们沉淀的基因组 DNA。现在我将吸出管内的溶液，仅留下基因组 DNA 沉淀。每次吸取另一根离心管中的液体时，我都会更换移液枪头。将移液器的吸头尖端置于该吸液器的尖端。吸除STE溶液和异丙醇后，我将加入一毫升70%乙醇以清洗基因组DNA沉淀。由于基因组DNA沉淀通常附着在微量离心管管壁上，难以完全脱离并充分在70%乙醇中洗涤，因此您需要用移液器吸头在下方的微量离心管架上来回刮擦，以使沉淀脱离管壁。您可以按如下方式操作。这是基因组DNA在沉淀并用70%乙醇洗涤后的外观。我将再次以最高速离心五分钟，然后吸除70%乙醇，以沉淀经过洗涤后的基因组DNA沉淀物。用70%乙醇在全速下离心5分钟，然后吸除70%乙醇，并让DNA干燥5分钟。观察试管底部的基因组DNA沉淀，干燥程度以接近此状态为宜。目前我已将从小鼠尾部提取的基因组DNA沉淀

isolation-of-genomic-dna-from-mouse-tails

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

从鼠尾基因组DNA提取

使用 Sigma 的 SYBR Green Extract-N-Amp 组织 PCR 试剂盒，可在一个半小时内完成小鼠尾部样本的完整基因分型，包括组织消化和 PCR...

使用Sigma公司的Extract-N-Amp组织PCR试剂盒快速对小鼠组织进行基因分型

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利用小鼠早期胚胎对组织特异性基因进行染色质免疫沉淀实验

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一种用于从难以捕捉的小型哺乳动物获取高质量DNA的非侵入性毛发采样技术

本文介绍了从斑马鱼尾鳍组织中提取DNA的方法。该方案展示了一种快速且高效的斑马鱼基因型分析技术。...

从尾鳍组织提取DNA：斑马鱼基因分型中常用的方法

在本视频中，我们演示了在小鼠模型中通过断尾法采集外周血的操作步骤。采集的血液随后经过离心处理以分离血浆，所得血浆可用于后续实验。...

一种用于外周血采集和血浆分离的小鼠尾尖剪取操作方法

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从小鼠耳部和尾部组织制备原代成纤维细胞培养物

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关键词：转基因小鼠，卵母细胞，显微注射，基因修饰，胚胎操作

我们描述了一种针对转基因啮齿类动物或经特定化学/物理因素处理的相应动物的培养细胞中进行Lambda Select...

Lambda Select cII 突变检测系统

本文介绍一种从新鲜或冷冻组织中快速分离高质量细胞核的方案，适用于后续的大规模平行RNA测序。方案中包括去污剂-机械法和低渗-机械法两种组织破碎与细胞裂解方法，均可用于细胞核的分离。...

用于大规模并行单核RNA测序的成年脊髓核的分离

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利用一种简单且经济高效的DNA提取方法分析易感狼疮小鼠肠道微生物群动态变化

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利用基因分型与基因组规模的基因剔除筛选鉴定恶性外周神经鞘瘤小鼠模型中的治疗靶点

学习从10日龄小鼠幼崽尾部提取基因组DNA的标准化操作流程，掌握避免交叉污染的关键技术要点，了解耳标打孔法进行个体识别的方法，为后续PCR基因型鉴定提供高质量DNA样本。

从小鼠尾部提取基因组DNA

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