Cortex-，Hippocampus-，Thalamus-，下丘脑 - ，横向隔核 - 纹状体专用在子宫内电穿孔的C57BL / 6小鼠

这种体内细胞作的总体目标是特异性修饰小鼠样皮层、海马、丘脑、下丘脑、外侧间隔核和纹状体的中枢神经系统中某些区域的细胞。这种方法可以帮助回答有关大脑发育和功能的关键问题，例如，通过识别不同的信号级联和确定细胞分化水平。该技术的主要优点是它允许快速有效地作中枢神经系统中的各种细胞类型，而无需耗时地生成转基因小鼠。

通常，这种方法的演示是有帮助的，因为刚接触这种方法的人通常会努力找到正确的电极位置，这对于特定的电穿孔至关重要。要开始此过程，请用手术刀切开麻醉怀孕小鼠的腹腔。用 0.9% 温热的甲醇盐水溶液润湿，防止打开的腹腔干燥。

然后，使用一对环形镊子小心地取出子宫角。接下来，放置 E14 胚胎，使穿刺部位上方没有可见的血管。为了获得更好的可视化效果，请使用 5 毫米电极定位大脑中所需转染区域的角度和位置。

对于皮质区域的宫内电穿孔，在左侧心室缓慢注射 1.5 至 2 微升 DNA 溶液。并确保插入深度为 1 到 2 毫米，从子宫壁测量。然后，检查具有清晰分界线的蓝绿色。

为了获得更好的可视化效果，请使用 5 毫米电极定位大脑中所需位置的角度和位置以进行转染。之后，将 3 毫米铂电极桨的中心放在耳原基的前方，并确保它们没有放置在血管或胎盘上方。随后，施加电压开始转染。

对于海马形成的宫内电穿孔，在 E15 胚胎的右侧脑室中注射两微升 DNA 溶液。然后，将 3 到 5 毫米铂电极桨的负极放在耳原基的正前方，将正极放在耳原基的中间。然后，施加电压开始转染。

对于房间隔外核和纹状体的宫内电穿孔，在 E12 胚胎的右侧脑室中注射 1 微升 DNA 溶液。然后，将 5 毫米电极放在耳原基的水平。随后，施加电压开始转染。

对于丘脑和下丘脑的宫内电穿孔，在 E12 至 E13 胚胎的侧脑室中注射 1 至 1.5 微升 DNA 溶液。然后，等待 2 到 3 分钟，让溶液扩散到第三脑室。接下来，将 5 毫米或 3 毫米的电极放在耳原基的后方。

之后，施加电压开始转染。该示意图显示了转染皮质区域的正极和负极的适当位置。而这个，显示了转染海马形成的正极和负极的位置。

用于转染纹状体和外侧间隔核的正极和负极的位置如图所示。此处显示了用于转染丘脑和下丘脑的电极的适当位置。转染的特异性取决于电极大小。

增加电极桨的大小会降低转染的特异性。这在年轻的胚胎阶段尤其明显，但在胚胎晚期也很明显。一旦掌握，如果执行得当，这项技术可以在 15 分钟内完成。

在尝试此程序时，非常小心地处理胚胎和母亲非常重要。看完这个视频，你应该对如何转染 Black 6 小鼠的中枢神经系统的特定区域有了很好的了解。