Preparation of rAAV9 to Overexpress or Knockdown Genes in Mouse Hearts

Jian Ding; Zhi-Qiang Lin; Jian-Ming Jiang; Christine E. Seidman; Jonathan G. Seidman; William T. Pu; Da-Zhi Wang

doi:10.3791/54787

JoVE Journal
Genetics

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Genetics

Preparation of rAAV9 to Overexpress or Knockdown Genes in Mouse Hearts

在小鼠心脏rAAV9的制备过表达或敲除基因

Full Text

13,448 Views

11:11 min

December 17, 2016

DOI: 10.3791/54787-v

Jian Ding^1,2, Zhi-Qiang Lin^1,2, Jian-Ming Jiang^3,4, Christine E. Seidman^3,4, Jonathan G. Seidman^3,4, William T. Pu^1,2, Da-Zhi Wang^1,2

¹Department of Cardiology,Boston Children's Hospital, ²Department of Pediatrics,Harvard Medical School, ³Department of Genetics,Harvard Medical School, ⁴Howard Hughes Medical Institute

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

在本手稿中，描述了一种制备重组腺相关病毒 9 （rAAV9）载体以纵小鼠心脏中基因表达的方法。

该程序的总体目标是制备重组腺相关病毒 9 或 rAAV9，以纵小鼠心脏中的基因表达。该方法可以回答心脏病学和分子遗传学领域的关键问题，例如如何在体内研究小鼠心脏的基因功能。这项技术的主要优点是，它将使我们能够轻松地在小鼠心脏体内纵基因表达和功能，从而允许基因功能获得功能，而不必依赖转基因动物模型。

生成 rAAV9 构建体并根据文本方案培养 HEK293 细胞后，为了在第 1 天转染细胞，将 70 μg AAV Rep-Cap 质粒、70 μg rAAV9 质粒和 200 μg Ad 辅助质粒混合在 50 mL离心管中。向试管中加入 49 毫升不含 FBS 的室温 DMEM 并充分混合。然后，要制备四比一的 PEI 到 DNA 溶液，向试管中加入 1， 360 微升 PEI 并充分混合。

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos