Name: 从小鼠中分离和培养骨髓衍生树突状细胞的经济有效的方案 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-01T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 29 s
Description: 学习从小鼠骨髓中分离和培养高纯度树突状细胞的经济有效方案。该方法使用GM-CSF/IL-4进行7天培养，可显著降低传统方法的时间和成本，为肿瘤免疫学研究提供可靠的细胞来源。

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本工作由天津市科学技术计划项目（20JCQNJC00550）和天津市卫生健康科技项目（TJWJ202021QN033 和 TJWJ202021QN034）资助。

所有实验程序均经南京医科大学动物护理与使用委员会批准。
1. 骨髓的分离与骨髓细胞的制备
<ol>
	<li>通过 CO2 窒息法处死 C57BL/6 小鼠（18–22 g，6–8 周龄）。将小鼠固定于小鼠手术台上，并用 70% 乙醇消毒表面。</li>
	<li>切开腿部皮肤以暴露肌肉和股动脉。使用两把镊子夹住并撕下股动脉，然后将近端向腹部方向牵拉。 
	注意：切勿直接剪断股动脉，否则会导致大量出血并污染视野。</li>
	<li>切断股骨周围的所有肌肉。</li>
	<li>缓慢向外牵拉小鼠的下肢，直至听到髋关节脱位的声音，并可见股骨头脱出。</li>
	<li>沿股骨头内侧用剪刀将下肢与身体分离。</li>
	<li>从膝关节末端处切断后肢，以获得游离且完整的股骨。</li>
	<li>使用纱布去除附着在股骨上的肌肉。 
	注意：切勿直接撕扯肌肉。小鼠股骨较为脆弱，必须保持其完整性。</li>
	<li>将股骨浸入 75% 酒精中 2–5 分钟。</li>
</ol>
2. BMDC 的诱导培养
<ol>
	<li>用 PBS 冲洗残留的酒精。使用止血钳夹住股骨的中下部，另取一把止血钳夹住股骨远端。止血钳从股骨外侧施加，将股骨从骨骺线处分离。 
	注意：在股骨发生骨折前，骨骺线不易观察。此步骤及后续步骤均需在无菌环境中进行。</li>
	<li>使用 1 mL 注射器（针头：0.6 mm × 25 mm）从骨骺线断裂处穿入骨髓腔，旋转针头以穿透股骨头并贯穿整个骨髓腔。用含 GM-CSF/IL-4 的完全培养基 1 mL 反复冲洗骨髓腔，直至骨骼变白。 
	注意：完全培养基配方：10% 胎牛血清（FBS）、1% 青霉素-链霉素、55 µM β-巯基乙醇、10 ng/mL GM-CSF 和 10 ng/mL IL-4。</li>
	<li>将所有细胞重悬于 24 mL 完全培养基中（约 5 × 105 个细胞/mL）。混匀后，每孔加入 4 mL 培养基接种至 6 孔板中，于 37 °C、5% CO2 条件下培养 2 天。 
	注意：无需裂解红细胞。</li>
	<li>培养 2 天后，更换全部培养基为含 GM-CSF/IL-4 的新鲜培养基7。在第 4、6、8 天时，更换一半培养基为含 10 ng/mL GM-CSF/IL-4 的完全培养基。 
	注意：此步骤可去除悬浮细胞，如红细胞和淋巴细胞。</li>
	<li>每天拍照记录细胞生长情况。从第 6 天开始，每天收集一孔细胞，计数细胞数量，并检测 CD11c、CD80 和 MHC II 的表达水平6,7。</li>
</ol>
3. 流式细胞术检测CD11c、CD80和MHC II的表达
<ol>
	<li>用 PBS 洗涤树突状细胞后，将 1 × 106 个细胞重悬于 100 µL FACS 缓冲液中，加入 0.5 µg 抗小鼠 CD16/32 抗体，冰上孵育 10 分钟，以阻断非特异性抗原结合位点。</li>
	<li>加入 1 µg Percp/cy5.5-CD11c、0.5 µg PE-CD80 和 0.04 µg APC-MHC II 抗体，冰上孵育 30 分钟。</li>
	<li>在 4 °C 下以 1,000 × g 离心 3 分钟，弃上清，加入 1 mL 4% 多聚甲醛，在 4 °C 固定 30 分钟，然后重悬于 300 µL FACS 缓冲液中。</li>
	<li>进行流式细胞术分析。</li>
</ol>

<ol><li>Huang, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen-loaded+monocyte+administration+induces+potent+therapeutic+antitumor+T+cell+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Antigen-loaded monocyte administration induces potent therapeutic antitumor T cell responses.</a> Journal of Clinical Investigation. 130 (2), 774-788 (2020).</li>
<li>Wang, P., Dong, S., Zhao, P., He, X., Chen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+loading+of+CTL+epitopes+onto+MHC+class+I+complexes+on+dendritic+cell+surface+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Direct loading of CTL epitopes onto MHC class I complexes on dendritic cell surface in vivo.</a> Biomaterials. 182, 92-103 (2018).</li>
<li>Banchereau, J., Steinman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+and+the+control+of+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells and the control of immunity.</a> Nature. 392 (6673), 245-252 (1998).</li>
<li>Jiang, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Galactosylated+liposome+as+a+dendritic+cell-targeted+mucosal+vaccine+for+inducing+protective+anti-tumor+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Galactosylated liposome as a dendritic cell-targeted mucosal vaccine for inducing protective anti-tumor immunity.</a> Acta Biomaterialia. 11, 356-367 (2015).</li>
<li>Shi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Next-generation+immunotherapies+to+improve+anticancer+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Next-generation immunotherapies to improve anticancer immunity.</a> Frontiers in Pharmacology. 11, 566401(2020).</li>
<li>Lutz, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+advanced+culture+method+for+generating+large+quantities+of+highly+pure+dendritic+cells+from+mouse+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">An advanced culture method for generating large quantities of highly pure dendritic cells from mouse bone marrow.</a> Journal of Immunological Methods. 223 (1), 77-92 (1999).</li>
<li>Son, Y. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+bulk-culture+method+for+generating+mature+dendritic+cells+from+mouse+bone+marrow+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">A novel bulk-culture method for generating mature dendritic cells from mouse bone marrow cells.</a> Journal of Immunological Methods. 262 (1-2), 145-157 (2002).</li>
<li>Guo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fusion+protein+vaccine+based+on+Ag85B+and+STEAP1+induces+a+protective+immune+response+against+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccines%22%5BJournal%5D)">Fusion protein vaccine based on Ag85B and STEAP1 induces a protective immune response against prostate cancer.</a> Vaccines. 9 (7), 786(2021).</li>
<li>Olweus, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cell+ontogeny%3A+A+human+dendritic+cell+lineage+of+myeloid+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Dendritic cell ontogeny: A human dendritic cell lineage of myeloid origin.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 94 (23), 12551-12556 (1997).</li>
<li>Martin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concept+of+lymphoid+versus+myeloid+dendritic+cell+lineages+revisited%3A+both+CD8alpha%28-%29+and+CD8alpha%28%2B%29+dendritic+cells+are+generated+from+CD4%28low%29+lymphoid-committed+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Concept of lymphoid versus myeloid dendritic cell lineages revisited: both CD8alpha(-) and CD8alpha(+) dendritic cells are generated from CD4(low) lymphoid-committed precursors.</a> Blood. 96 (-), 2511-2519 (2000).</li>
<li>Anderson, D. A., Dutertre, C. A., Ginhoux, F., Murphy, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+models+of+human+and+mouse+dendritic+cell+development+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%3A+Immunology%22%5BJournal%5D)">Genetic models of human and mouse dendritic cell development and function.</a> Nature Reviews: Immunology. 21 (2), 101-115 (2021).</li>
<li>Vu Manh, T. P., Bertho, N., Hosmalin, A., Schwartz-Cornil, I., Dalod, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+evolutionary+conservation+of+dendritic+cell+subset+identity+and+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Investigating evolutionary conservation of dendritic cell subset identity and functions.</a> Frontiers in Immunology. 6, 260(2015).</li>
<li>Scheicher, C., Mehlig, M., Zecher, R., Reske, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+from+mouse+bone+marrow%3A+in+vitro+differentiation+using+low+doses+of+recombinant+granulocyte-macrophage+colony-stimulating+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells from mouse bone marrow: in vitro differentiation using low doses of recombinant granulocyte-macrophage colony-stimulating factor.</a> Journal of Immunological Methods. 154 (2), 253-264 (1992).</li>
<li>Brasel, K., De Smedt, T., Smith, J. L., Maliszewski, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+murine+dendritic+cells+from+flt3-ligand-supplemented+bone+marrow+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Generation of murine dendritic cells from flt3-ligand-supplemented bone marrow cultures.</a> Blood. 96 (9), 3029-3039 (2000).</li>
<li>Mayordomo, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((marrow-derived+dendritic+cells+pulsed+with+synthetic+tumour+peptides+elicit+protective+and+therapeutic+antitumour+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">marrow-derived dendritic cells pulsed with synthetic tumour peptides elicit protective and therapeutic antitumour immunity.</a> Nature Medicine. 1 (12), 1297-1302 (1995).</li>
<li>Condon, C., Watkins, S. C., Celluzzi, C. M., Thompson, K., Falo, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA-based+immunization+by+in+vivo+transfection+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">DNA-based immunization by in vivo transfection of dendritic cells.</a> Nature Medicine. 2 (10), 1122-1128 (1996).</li>
<li>Brunner, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-prandial+administration+of+the+insulin+analogue+insulin+aspart+in+patients+with+type+1+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetic+Medicine%22%5BJournal%5D)">Post-prandial administration of the insulin analogue insulin aspart in patients with type 1 diabetes mellitus.</a> Diabetic Medicine. 17 (5), 371-375 (2000).</li>
<li>Koido, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+antitumor+immunity+by+vaccination+of+dendritic+cells+transfected+with+MUC1+RNA%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Induction of antitumor immunity by vaccination of dendritic cells transfected with MUC1 RNA.</a> Journal of Immunology. 165 (10), 5713-5719 (2000).</li>
<li>Jonasson, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strength+of+the+porcine+proximal+femoral+epiphyseal+plate%3A+The+effect+of+different+loading+directions+and+the+role+of+the+perichondrial+fibrocartilaginous+complex+and+epiphyseal+tubercle+-+An+experimental+biomechanical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Orthopaedics%22%5BJournal%5D)">Strength of the porcine proximal femoral epiphyseal plate: The effect of different loading directions and the role of the perichondrial fibrocartilaginous complex and epiphyseal tubercle - An experimental biomechanical study.</a> Journal of Experimental Orthopaedics. 1 (1), 4(2014).</li>
<li>Labeur, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+tumor+immunity+by+bone+marrow-derived+dendritic+cells+correlates+with+dendritic+cell+maturation+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Generation of tumor immunity by bone marrow-derived dendritic cells correlates with dendritic cell maturation stage.</a> Journal of Immunology. 162 (1), 168-175 (1999).</li>
<li>Hinkel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulatory+dendritic+cells+generated+from+nonfractionated+bulk+peripheral+blood+mononuclear+cell+cultures+induce+growth+of+cytotoxic+T+cells+against+renal+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">Immunomodulatory dendritic cells generated from nonfractionated bulk peripheral blood mononuclear cell cultures induce growth of cytotoxic T cells against renal cell carcinoma.</a> Journal of Immunotherapy. 23 (1), 83-93 (2000).</li>
</ol>

所有作者声明不存在利益冲突，且无任何需要披露的内容。

人类和小鼠具有不同的树突状细胞亚群，包括经典树突状细胞（cDCs，包含cDC1和cDC2）、浆细胞样树突状细胞（pDCs）以及单核细胞来源的树突状细胞（MoDCs）9,10,11通常认为，cDC1细胞调控针对细胞内病原体和癌症的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）应答，而cDC2细胞则调控针对细胞外病原体、寄生虫和过敏原的免疫应答。12可产生大量树突状细胞 体外 从小鼠骨髓祖细胞在GM-CSF和IL-4存在条件下6,13,14. 树突状细胞（DC）的纯度和数量在成功的DC免疫治疗中起着关键作用。研究人员已证实，两次剂量的1 x 105 至 1 × 106 树突状细胞（...

树突状细胞（DCs）是激活初始T细胞以及诱导针对感染性疾病、过敏性疾病和肿瘤细胞的特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应的最强大的抗原呈递细胞（APCs）1,2,3。DCs是连接先天免疫与适应性免疫的主要桥梁，在免疫防御和维持免疫耐受中发挥关键作用。在过去40年中，许多研究人员致力于定义DCs的不同亚群及其在炎症与免疫中的功能。根据这些研究，DCs来源于骨髓细胞，沿髓系和淋巴系发育。近年来，肿瘤疫苗取得了重要进展，具有广阔的应用前景。从机制上讲，肿瘤疫苗通过肿瘤抗原激活细胞毒性T淋巴细胞，从而调节免疫反应并抑制肿瘤生长。基于DCs的疫苗在肿瘤免疫治疗中发挥重要作用，已被认为是最具前景的抗肿瘤疗法之一1,4。此外，DCs还被广泛应用于新型分子靶向药物和免疫检查点抑制剂的测试中5。
研究人员迫切需要大量高纯度的树突状细胞（DCs）以进一步研究其功能。然而，树突状细胞在各种组织和血液中极为稀少，在人类和动物中仅占血细胞总数的1%。体外培养骨髓来源的树突状细胞（BMDC）是获得大量DC细胞的重要方法。同时，Lutz实验室建立的从骨髓诱导生成树突状细胞的方案已被研究人员广泛采用6。尽管该方案在获取DC细胞方面效果显著，但操作复杂且成本较高，需添加高浓度的细胞因子并进行红细胞裂解。
本研究中，我们报道了一种从小鼠骨髓（BM）中分离几乎全部骨髓细胞的方法，并在培养7-9天后诱导其分化为骨髓来源的树突状细胞（BMDC）。 体外，使用较低浓度的GM-CSF和IL-4。该方法仅需10分钟即可收获几乎全部骨髓细胞并将其悬浮于完全培养基中。简言之，本研究提供了一种高效且经济的BMDC培养方法。

<table><tbody><tr><td>&amp;beta;-巯基乙醇</td><td>Solarbio</td><td>M8211</td><td></td></tr><tr><td>6 孔板</td><td>Corning</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>APC-MHC II</td><td>Biolegend</td><td>116417</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco</td><td>10100</td><td></td></tr><tr><td>PE-CD80</td><td>Biolegend</td><td>104707</td><td></td></tr><tr><td>青霉素-链霉素</td><td>Solarbio</td><td>P1400</td><td></td></tr><tr><td>Percp/cy5.5-CD11c</td><td>Biolegend</td><td>117327</td><td></td></tr><tr><td>PRMI-1640</td><td>Thermo</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>重组小鼠 GM-CSF</td><td>Solarbio</td><td>P00184</td><td></td></tr><tr><td>重组小鼠 IL-4</td><td>Solarbio</td><td>P00196</td><td></td></tr><tr><td>TruStain Fc PLUS（抗小鼠 CD16/32）抗体</td><td>Biolegend</td><td>156603</td><td></td></tr></tbody></table>

从小鼠骨髓分离和培养树突状细胞的经济高效方案

Economical and Efficient Protocol for Isolating and Culturing Bone Marrow-derived Dendritic Cells from Mice

随着免疫学研究的进展，对树突状细胞（DCs）的需求逐渐增加。然而，树突状细胞在所有组织中均十分稀少。传统的树突状细胞分离方法主要依赖于通过注射大剂量（&#62;10 ng/mL）粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子/白细胞介素-4（GM-CSF/IL-4）诱导骨髓（BM）细胞向树突状细胞分化，该方法操作复杂且成本较高。在本实验方案中，将全部骨髓细胞在含10 ng/mL GM-CSF/IL-4的培养基中培养，经过3–4次半量换液后，每只小鼠（两根股骨）可收获高达2.7 × 107 个CD11c+细胞&#160;（即树突状细胞），纯度达80%–95%。培养10天后，CD11c、CD80和MHC II的表达水平升高，但细胞数量有所下降；细胞数量在培养第7天时达到峰值。此外，该方法仅需10分钟即可完成全部骨髓细胞的采集，且在培养1周后即可获得大量树突状细胞。

从两根股骨中提取出 1 × 107–1.7 × 107 个细胞，并重悬于 24 mL 培养基中，随后接种至 6 孔板中（图 1A）。培养 2 天后，通过完全更换培养基去除未贴壁细胞。在换液前，可观察到大量悬浮细胞（图 1B）。培养 3 天后，开始出现小的细胞克隆。第 6 天时，克隆的数量和尺寸显著增加。第 7 天时，细胞数量达到峰值（22 × 106–27 × 106），随后逐渐下降（图 2A）。树突状细胞（DC）表面变得粗糙，伪足延长，呈现出典型的成熟 DC 细胞形态（图 2B）。流式细胞术分析显示，第 6 天 CD11c 阳性细胞占总细胞的比例为 71%，到第 10 天该比例上升至 96.1%（图 2C、2D）。</p...

本文介绍一种经济高效的方法，通过在含10 ng/mL GM-CSF/IL-4的培养条件下培养7天，从小鼠中分离并获得高纯度的骨髓来源树突状细胞。

随着免疫学研究的进展，对树突状细胞（DCs）的需求逐渐增加。然而，树突状细胞在所有组织中均十分稀少。传统方法……

一种经济高效的从小鼠骨髓中分离和培养树突状细胞的方案。涉及动物实验的操作已获得南京医科大学机构动物伦理委员会的批准。一、引言。随着肿瘤免疫研究的不断深入，对树突状细胞（DC细胞）的需求逐渐增加。然而，树突状细胞（DCs）在所有组织中均较为稀少。传统上主要通过诱导骨髓分化为DCs的方法较为复杂且成本较高。二、骨髓分离与骨髓细胞制备：我们处死小鼠并将其固定于小鼠手术台。切开左侧暴露的肌肉和股动脉处的皮肤。切勿直接切割股动脉，否则将导致大量出血并污染视野。切断股骨周围的所有肌肉。缓慢向外牵拉小鼠的下肢，直至观察到股骨头脱位。将下肢与身体分离。切断后肢以获取完整且游离的股骨。使用纱布去除肌肉组织，切勿直接撕扯肌肉。小鼠的股骨较为脆弱。将股骨置于75%酒精中浸泡2至5分钟。三、BMDC的注射培养：用PBS冲洗残留的酒精。用止血钳夹住股骨的中段和下段，再用另一把止血钳夹住股骨的远端。止血钳直接作用于股骨，从骨骺线处折断股骨。使用1 ml注射器从骨骺线处穿刺进入骨髓腔。使用完全培养基冲洗骨髓腔，直至骨骼变白，共冲洗两次。收集冲洗液。加入含GM-CSF/IL-4的完全培养基至24 ml，按每孔4 ml接种于6孔板中。四、结果。两天后，更换全部含有GM-CSF/IL-4的培养基。在第四、第六和第八天，各更换一半含有GM-CSF/IL-4的完全培养基。细胞数量在第七天达到峰值，随后逐渐减少。树突状细胞形成了大量突触，呈现出典型的成熟树突状细胞形态。流式细胞术分析显示，CD11c阳性细胞比例在第6天达到71%，到第10天时该比例上升至96.1%。CD11c、CD80和MHC II类分子的表达水平随着培养时间的延长而逐渐升高。五、结论。简而言之，我们建立了一种经济且高效的从小鼠骨髓中分离和培养树突状细胞的方案，仅需10分钟即可完成骨髓细胞的分离。在含有每毫升10纳克GM-CSF和IL-4的培养条件下培养6至7天后，即可获得数量较多且高纯度的树突状细胞。

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免疫学与感染

从小鼠中分离和培养骨髓衍生树突状细胞的经济有效的方案

本视频展示了从小鼠骨髓中分化髓系树突状细胞的操作流程。视频中演示了小鼠胫骨和股骨的分离以及骨髓的处理过程。同时展示了细胞在分化前后形态学特征的图片，以及使用CpG诱导成熟后细胞表型和IL-12分泌情况的图示。...

从骨髓前体细胞培养髓系树突状细胞

本视频介绍了一种从小鼠成年小鼠骨髓中生成树突状细胞的实验方案——树突状细胞是激活T细胞的关键抗原呈递细胞。...

骨髓来源树突状细胞的制备：一种从小鼠骨髓生成树突状细胞的方法

我们描述了一种通过密度梯度离心法从小鼠骨髓中分离和纯化中性粒细胞，并使用CellTracker染料对中性粒细胞进行标记的实验方案。该方法简单、快速、可重复且经济，适用于获取大量中性粒细胞，以用于后续的功能研究或过继转移与示踪实验。...

小鼠骨髓中性粒细胞的分离、纯化及标记用于功能研究与过继性转移实验

本文介绍一种从小鼠异质性骨髓中大量生成单核细胞的实验方案，适用于转化医学研究。与其他方法相比，该新方法通过避免使用高梯度磁性细胞分选（MACS）等昂贵技术，减少了实验动物的使用数量并降低了成本。...

小鼠骨髓来源单核细胞的分离与静脉注射

不同的树突状细胞亚群作为稀有群体存在于淋巴器官中，因此难以分离出足够数量和高纯度的细胞用于免疫学实验。本文介绍一种高效、高产量的方法，用于分离目前所知的所有小鼠脾脏树突状细胞主要亚群。...

一种高效且高得率的小鼠树突状细胞亚群分离方法

单核细胞来源的树突状细胞（MoDC）能够感知微量的危险相关分子，因此极易被启动。本文提供了从血液和肿瘤中分离MoDC并利用免疫复合物对其进行激活的详细方案，同时强调了应考虑的关键注意事项，以避免其过早激活。...

小鼠单核细胞来源树突状细胞的分离方案及其后续处理 体外 使用肿瘤免疫复合物激活

本文介绍了一种用于开发和表征耐受性树突状细胞（TolDCs）并评估其免疫治疗效用的实验方案。...

小鼠耐受性树突状细胞的开发与功能表征

本实验方案描述了从小鼠中分离和培养骨髓来源巨噬细胞的方法。...

从小鼠中分离和培养骨髓来源的巨噬细胞

本文描述了in vitro条件下多房棘球绦虫（Echinococcus...

小细胞外囊泡的分离及其树突状细胞摄取 细粒棘球绦虫

我们提出了一种优化的高通量核转染方案，可高效转染人原代单核细胞来源的树突状细胞，导入质粒DNA或siRNA，且不会诱导细胞成熟。我们进一步提供了成功沉默靶基因RIG-I的证据，其mRNA水平和蛋白水平均显著下调。...

高效转染树突状细胞且不诱导细胞成熟的优化方案

学习从小鼠骨髓中分离和培养高纯度树突状细胞的经济有效方案。该方法使用GM-CSF/IL-4进行7天培养，可显著降低传统方法的时间和成本，为肿瘤免疫学研究提供可靠的细胞来源。

从小鼠骨髓分离和培养树突状细胞的经济高效方案

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