从小鼠中分离和培养骨髓衍生树突状细胞的经济有效的方案

从小鼠分离和生成骨髓衍生树突状细胞的经济有效的方案。涉及动物受试者的程序已获南京医科大学动物伦理委员会批准。随着肿瘤免疫研究的增加，对DC细胞的需求逐渐增加。

然而，DC在所有组织中都很少见。以骨髓分化为DC为主的传统方法复杂且成本高昂。二。骨髓的分离和BM细胞的制备 我们处死小鼠并固定在小鼠手术台上。

切除左侧暴露的肌肉和股动脉的皮肤。不要直接切除股动脉。否则，会引起大量出血并污染视野。

切除股骨周围的所有肌肉。慢慢地将小鼠的下肢向外拉伸，直到股骨头脱垂，可以观察到。将下肢与身体分开。

切开后腿以获得自由和完整的股骨。使用纱布去除肌肉。不要直接撕裂肌肉。

小鼠的股骨很脆弱。将股骨置于75%酒精中两到五分钟。三。BMDC注射培养 用PBS冲洗残留的酒精。

用止血镊子夹住股骨的中下部，用另一个止血钳夹住股骨的下端。止血钳从字面上施加到股骨上，股骨从骨骺线断裂。使用一ml注射器从骨骺线刺穿骨髓腔。

使用完整的培养基两部分冲洗骨髓腔，直到骨头变白。收集冲洗液。补充含有GM CSF / IL-4至24ml的完整培养基，并在6孔板中播种，每孔4ml。四.结果.

两天后，更换所有含有GM-CSF / IL-4的培养基。在第四天、第六天和第八天，一半人更换了含有GM-CSF / IL-4的完整培养基。细胞数量在第七天达到峰值，然后逐渐减少。

DC细胞形成大量突触，呈现典型的成熟DC细胞形态。流量子指标分析表明，CD11c在第6天施加的比率为71%，在第10天将宽比提高到96.1%。CD11c、CD80和MSC2的表达随着培养时间的增加而逐渐增加。五、结论。

简而言之，我们建立了一种经济有效的方案，用于从小鼠中分离和生成骨髓来源的树突状细胞，只需10分钟即可分离骨髓细胞。在培养6至7天后收获大量高纯度DC，每毫升10ng，GM-CSF和IL-4。