Summary
Under infeksjon er Listeria monocytogenes i stand til krysset blod - hjerne barrieren vil colonize hjernen. I denne protokollen viser vi hvordan å vurdere bakteriell kolonisering av organer etter infeksjon av mus. En prosedyre for å utføre hele organ perfusjon for bestemte fastsettelse av bakteriell tall i hjernen parenchyma tilbys.
Abstract
Listeria monocytogenes er en intracellulær bakteriell patogen som er ofte forbundet med mat-borne infeksjon. Evne til L. monocytogenes å krysse blod - hjerne barrieren (BBB) er om som det kan føre til livstruende hjernehinnebetennelse og encefalitt. BBB beskytter hjernen microenvironment fra forskjellige giftige metabolitter og mikrobiell patogener som finnes i blodet etter infeksjon, og støtter derfor hjernen homeostase. Mekanismene som L. monocytogenes i blodet cross BBB å gi hjernen infeksjoner ikke er fullt ut forstått og det er også en mangel på en robust modellsystem å studere hjernen infeksjoner av L. monocytogenes. Her presenterer vi en enkel mus infeksjon modell å avgjøre om bakterier har krysset BBB og quantitate byrden av bakterier som har kolonisert hjernen i vivo. I denne metoden, dyrene var smittet intravenøst av L. monocytogenes og var humant euthanized av eksponering for CO2 etterfulgt av cervical forvridning. CARDIAC perfusjon av dyrene ble utført før høsting infiserte organer. Blodet ble samlet inn før perfusjon og antall bakterier per organ eller mL blod ble fastsatt plating fortynninger av blod eller organ homogenates på agar plater og telle antall kolonier dannet. Denne metoden kan brukes til å studere romanen reseptor-ligand interaksjoner som forbedrer infeksjon i hjernen av L. monocytogenes og kan lett tilpasses for studier av flere bakteriell patogener.
Introduction
Gram-positive bakterien Listeria monocytogenes er en facultative intracellulær patogen og en av de mest dødelige mat-borne patogener over hele verden. Inntak av L. monocytogenes forurenset mat kan føre til listeriosis hos mennesker, en alvorlig invasiv sykdom målretting mest gravide, nyfødte, eldre, og immunsupprimerte individer1. Letalitet fra listeriosis er så høyt som 20-30%, det høyeste for alle mat-borne patogener2 L. monocytogenes er blant de viktigste årsakene til død av en mat-borne patogen i USA. Ingen vaksine finnes ikke for L. monocytogenes og evnen av bakterier for å effektivt spre distale organer og hjernen ved krysset blod - hjerne barrieren (BBB) kan føre til livstruende hjernehinnebetennelse og kolonisering av hjernen3 , 4 , 5 , 6. bakteriell meningitt er vanligvis alvorlig; mens de fleste som får behandling gjenopprette, kan infeksjoner forårsake alvorlige komplikasjoner, f.eks, hjerneskade, hørselstap eller lærevansker hos barn. L. monocytogenes spådd til minst 10% av alle samfunn ervervet hjernehinnebetennelse i USA7.
En hovedrute for bakteriell formidling til hjernen og meninges er gjennom blodet. Bakterier i blodårer i hjernen er å krysse BBB å forårsake hjernen infeksjon. BBB er en svært Stangeriaceae barriere som beskytter hjernen fra fremmede partikler i blodet. Endotelceller utgjør et lag som linjer overflaten av blodkar8,9. I tillegg til L. monocytogeneser flere bakteriell patogener som Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, Escherichia coliog Haemophilus influenzae type b (Hib) i stand til å kolonisere hjernen ved krysset BBB3,4,5,6. Men når behandlingen bakteriell byrder i hjernen av infiserte mus, er det viktig å bestemme om bakterier har krysset BBB, ellers bakterielle belastningen i hjernen kan representere bakterier er fremdeles i blodårene i hjernen. Derfor er det nødvendig å perfuse mus alle blod før fastsettelse colony-forming enheter (CFU) av hjernen homogenates.
I denne studien beskrive vi i vivo metoder for å undersøke L. monocytogenes infeksjon av hjernen. For metodene som er beskrevet her, brukte vi L. monocytogenes stammen 10403S. L. monocytogenes 10403S er en av de mest brukte Laboratorium stammene å studere systemisk listeriosis i musemodell av infeksjon10. Denne protokollen er basert på standard intravenøs injeksjon av L. monocytogenes etterfulgt av perfusjon av mus. En skjematisk oversikt over infeksjon protokollen i mus er vist i figur 1. L. monocytogenes-infiserte hjernen og andre organer fra ikke-perfused eller parfyme mus ble samlet og bakteriell orgel byrden bestemt. Disse metodene er nyttige for ikke bare å bestemme total bakteriell kolonisering av hjernen i infiserte dyr, men er også gunstig for å avgjøre om bakterier har penetrert av BBB i vivo å megle invasjonen av hjernen. Det er viktig å understreke at denne laboratorium protokollen skal utføres etter konsultasjon med relevante institusjonelle biosafety utvalget og dyr anlegget ledelsen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dyrene skal opprettholdes og behandlet med maksimal omsorg å minimere ubehag i løpet av prosedyren. Prosedyren er gjennomføres i samsvar med den institusjonelle Animal Care og bruk komité og alle føderale, statlige og lokale lover. Også oppmerksom på at laboratorieforsøk gjennomføres grad 2 retningslinjer.
1. vekst av L. monocytogenes for musen infeksjon studier
-
Autoclave 500 mL hjernen hjertet infusjon (BHI) agar medium i en 1 L Erlenmeyer kolbe å forberede solide media plater. Kan media kule i et vannbad 56 ° C og deretter legge til streptomycin på en siste konsentrasjon 100 µg/ml.
- Hell 25 mL av media/Petriskål i Petriskål plater. La platene tørke ved romtemperatur (22 oC-25 ° C). Om nødvendig kan platene tørkes ved 37 ° C før helt tørt.
-
Bruke sterilt vaksinere sløyfen og steril teknikk, få en løkke full av frosne L. monocytogenes belastning 10403S11,12 fra en lager kultur frosset i BHI media pluss 30% glyserol og vedlikeholde i-80 ° C fryser.
- Strek L. monocytogenes på en BHI agar/streptomycin plate slik at enkelt bakteriell koloniene kan isoleres. Sett platene i en 37 ° C inkubator natten (18 h til 24 h) for å vokse L. monocytogenes koloniene.
- Bruke en steril inoculating loop, plukke et enkelt L. monocytogenes colony fra BHI agar plate og vaksinere kolonien i et sterilt reagensrør inneholder 5 mL av BHI kjøttkraft som inneholder 100 µg/mL streptomycin.
-
Inkuber L. monocytogenes kultur røret litt skrå på 30 ° overnatter i en statisk inkubator.
- Dagen visuelt inspisere L. monocytogenes kultur for vekst (BHI media blir grumset) og vortex kort å sikre en ensartet suspensjon av kulturen.
- Tas aseptisk fjerne en 1 mL aliquot av bakteriell kultur og måle optisk densitet ved 600 nm (OD600) bruker et spektrofotometer.
Merk: Sterile BHI kjøttkraft brukes som tomt for spektrofotometer lesing taes optisk densitet av L. monocytogenes kultur. L. monocytogenes kultur kan også bli utvannet (to til fem ganger) i BHI før du leser optisk densitet. - Bestemme antall L. monocytogenes koloni danner enheter (CFU) per mL BHI kultur ved plating 10 ganger føljetong fortynninger av kulturen. Dette er nyttig å opprette en relasjon mellom den optiske densitet for L. monocytogenes kultur og antall bakterier per mL kultur. Generelt, tilsvarer en OD600 1,0 for en L. monocytogenes kultur ca 1 x 109 CFU bakterier per mL.
2. utarbeidelse av L. monocytogenes for infeksjon av mus
- Atten tjuefire timer før dyr infeksjon, vokse L. monocytogenes kulturer i BHI buljong som inneholder 100 µg/mL streptomycin og bestemme OD600/ ~ CFU per mL som angitt i trinn 1.
Merk: Mus er vanligvis organisert en uke før infeksjon og er acclimated til dyr anlegget før infeksjon studier utføres. I denne studien, 6-8 ukens gamle kvinnelige BALB/c mus (5 mus per gruppe) ble plassert i en barriere miljø i Harvard Medical School BSL2 nivå dyr forvaring anlegget og levert mat og vann ad libitum. - Bestemme mengden av L. monocytogenes kultur må infisere hver musen basert på den ~ CFU per mL av bakteriell kultur. Gjøre en fortynning av L. monocytogenes kultur i sterilt fosfat-bufret saltvann pH 7.2 (PBS) til riktig konsentrasjonen av bakterier. Mus er vanligvis infisert intravenøst med 200 µL av PBS som inneholder 1 – 2 × 104 CFU bakterier/dyr.
- Kontrollere antall L. monocytogenes i inoculum ved plating 10 ganger føljetong fortynninger på BHI agar plater som inneholder 100 µg/mL streptomycin. Inkuber plater i en 37 ° C inkubator over natten for å bestemme antall L. monocytogenes inokulert per mus som følger:
Inoculum (CFU) = (antall kolonier x fortynningsfaktoren) / mL belagt x volum (mL) injisert
3. infeksjon for mus L. monocytogenes via intravenøs hale blodåre injeksjon
-
Fjern lokket og mat hyllene fra buret med musene, og plasser byrået under en 250 W infrarød varmelampe i 5 min.
Merk: Denne metoden tillater hale årer å dilate, at injeksjoner er enklere å utføre.- Forsiktig plassere dyret i en passende størrelse mus begrensende enhet for å holde trygt dyret under halen blodåre injeksjoner.
- Bland L. monocytogenes inoculum (trinn 2.2) og Legg til inoculum i 1 mL sprøyte utstyrt med en 26 G nål.
- Finn en lateral hale åre musen og rengjør injeksjonsstedet med en spritpute eller 75% etanol spray.
-
Forsiktig injisere musen med 200 µL av L. monocytogenes suspensjon i en lateral hale blodåre sprøyten med 26 G nålen.
- Bruk bomull gasbind til kort legge press på injeksjonsstedet stoppe blødninger, og plassere dyret i nye bur.
Merk: Utføre denne prosessen for alle mus injiseres og merke buret med riktig etiketter. For å avgjøre etter injeksjon konsentrasjonen av L. monocytogenes inoculum, gjentar du trinn 2.3 bruke restbeløpet til inoculum. Intravenøs L. monocytogenes infeksjon inoculum per musen rapporteres som den gjennomsnittlige CFU målt før og etter injeksjon inoculum prøvene.
- Bruk bomull gasbind til kort legge press på injeksjonsstedet stoppe blødninger, og plassere dyret i nye bur.
- Overvåke den infiserte dyr daglig og Merk åpenbare tegn på sykdom (f.eks ruffled pels, sammenkrøket holdning, treg bevegelse, vekttap). Fjerne dyr som synes å være betydelig døende før 72 h etter infeksjon (f.eks, 24, 48 timer etter infeksjon) fra studien og Human ofre. Fortsette daglig overvåking inntil alle gjenværende dyr både på 72 h etter infeksjon.
Merk: 50% dødelig dose (LD50) for L. monocytogenes belastning 10403S i BALB/c mus er ~ 1-2 x 104 CFU/dyr. Mus infisert med LD50 doser av L. monocytogenes bruker denne protokollen kan vise tegn på sykdom, som angitt ovenfor, og etterforskerne kan forvente at mus til å starte succumbing til infeksjon etter 72 h etter infeksjon.
4. disseksjon og Cardiac perfusjon av mus infisert med L. monocytogenes
-
På 72 h etter infeksjon (eller på en tidligere ønsket tidspunkt), euthanize infiserte mus bruker en protokoll som er godkjent av den institusjonelle dyr etikk, som CO2 kvelning etterfulgt av cervical forvridning.
Merk: Hvis blodgivning er utført, minimere rive av blodkar mens du utfører cervical forvridning.- Bekreft mus ha blitt euthanized av fraværet av en pote-rykk reaksjon.
Merk: Hvis hjerte perfusjonsmåling skal utføres, stille opp en automatisert pumpe/perfusjon system på en strømningshastighet på 4 mL volum/min.
- Bekreft mus ha blitt euthanized av fraværet av en pote-rykk reaksjon.
- Plasser dyret på ryggen i en disseksjon panne og bruke 75% etanol på abdominal pels/hudoverflaten.
- Med saks, gjør et snitt i bukveggen og utvide snittet til bare under ribbe buret.
- Utsett mellomgulvet og visceral organer.
Merk: Vær forsiktig så du ikke lacerate noen visceral organer. - Åpne bryst hulrom ved å kutte membranen og kuttet ribbe buret bilateralt å avsløre venstre ventrikkel hjertet.
- Bruker sløv tang, forsiktig Trykk på hjertet og sett inn en 21 G sommerfugl nål koblet perfusjon systemet til venstre ventrikkel og forsiktig kutte rett atrium å samle blod (~0.2 mL) i en 2 mL tube med 10 mM ethylenediaminetetraacetic syre (EDTA) for å hindre koagulering. En skjematisk diagram av cardiac perfusjon i musen er vist i figur 2.
Merk: Hvis perfusjon er ikke skal utføres, blod kan samles av cardiac punktering bruker en 1 mL sprøyte og raskt overført til en 2 mL tube med 10 mM EDTA å hindre koagulering. L. monocytogenes -infisert organer høstes deretter som beskrevet (trinn 5.1). - Begynne perfusjon og perfuse dyr for 4 min med 15 – 20 mL av PBS med 10 mM EDTA.
Merk: Vurdere perfusjon ved å observere blod og PBS-EDTA løsning strømmer gjennom høyre atrium og i disseksjon kjelen. Hjernen og leveren vises forvellet etter fullført perfusjon at gjenværende bakterier er høstet organer og av sirkulerende blod.
5. organ høsting og fastsetting av bakteriell byrder
- Følgende perfusjon, høsting organer (f.eks leveren, milt) ved å nøye fjerne eventuelle blodkar og leddbånd knyttet og plasser organer separat i et sterilt 15 mL konisk rør som inneholder 5 mL steril kald (4 ° C) PBS. La prøvene på is inntil videre behandling oppstår.
-
Å høste hjernen, halshugge hodet bak det ører med saks og kutt hodebunnen huden mellom dyrets øyne ned midtlinjen. Hvis nødvendig, trim overflødig vev holde saksen presset mot skallen.
- Forsiktig et tips av saksen inn foramen magnum (hull i bunnen av skallen gjennom ryggmargen går) og skjær sidelengs i skallen på begge sider.
- Forsiktig kutte skallen mellom gnageres øyne ned midtlinjen, husk å bruke lateralt press. Unngå forstyrrelsene av hjernen og opprettholde minimum kontakt mellom hjernevevet og saksen.
- Fin spiss tang, åpne skallen for å avdekke hjernen og plassere en slikkepott mellom undersiden av hjernen og bunnen av skallen fjerne hjernen.
Merk: Dette gjør rive av hjernen nerve fibre. - Nøye overføre hjernen til en 15 mL konisk rør som inneholder 5 mL steril kaldt PBS.
- Forkaste musen carcass, og Gjenta trinnene for gjenværende dyrene.
Merk: Når alle organer har vært høstet, ren prosedyren området og forberede for orgel homogenisering å bestemme bakteriell byrder.
- Rengjøres og steriliseres spissen av en vev homogenizer plassert i en biosafety skap ved å sette spissen og kjører homogenizer for 10 s sekvensielt i 5% blekemiddel, sterilt vann, 75% etanol, sterilt vann hver i en separat 15 mL konisk rør.
-
Homogenize infisert hjernen (~ 20 s innstillingen 6, maksimum RPMs) i 15 mL konisk røret gjenstår ingen synlige vev fragmenter.
- Rengjør homogenizer som beskrevet i trinn 5.3 å hindre bakteriell bære over forurensning til neste orgel prøven.
- Utføre homogenisering prosessen for alle andre organer (f.eks leveren, milt).
- Når homogenisering prosessen er fullført, rengjør homogenizer som beskrevet i trinn 5.3 og store videre bruk.
-
Forberede 10 ganger føljetong fortynninger av orgel homogenates i sterilt PBS og plate fortynninger på BHI agar/streptomycin plater å bestemme CFU per orgel.
Merk: En lignende metode er utført for å avgjøre CFU per mL blod.- Etter alle fortynninger er belagt, overføre platene til en inkubator 37 ° C over natten.
- Dagen telle antall kolonier på hver plate å avgjøre det totale antallet bakterier per organ eller mL blod som følger:
CFU/orgel (antall kolonier x fortynningsfaktoren) / mL homogenate belagt x 5
CFU/mL blod (antall kolonier x fortynningsfaktoren) / mL blod belagt
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Hjernen er svært Stangeriaceae og L. monocytogenes er kjent for å infisere celletyper tilstede i blod3,13. Beskrevet protokollen brukes til å vise hvor L. monocytogenes å krysse den blod - hjerne barrieren (BBB) fører til infeksjon av hjernen i mus. For å avgjøre hvis bakterier har krysset BBB i vivo, utføres perfusjon av blod i musen før fastsettelse bakteriell byrder i hjernen. Ellers kan CFU innhentet inneholde bakterier som finnes i blodårene i hjernen. L. monocytogenes infisert hjerner (figur 3A) og lever (figur 3B) før eller etter steder 72 h etter infeksjon vises. Figur 4 viser bakteriell byrdene i L. monocytogenes -infiserte mus organer og illustrerer hvor mange bakterier i hjernen, blod, lever og milt hver mus. Disse data tyder på at perfusjon av dyr ikke betydelig påvirke bakteriell byrden på musen organer undersøkt i denne studien (Figur 4).
Figur 1 : Skjematisk oversikt over den L. monocytogenes i vivo infeksjon protokollen. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2 : Skjematisk diagram av cardiac perfusjon prosedyren. Perfusjon gjennom musen hjertet viser innsetting av perfusjon nålen i venstre ventrikkel (trinn 4.6). Etter nåleinnføring, en umiddelbar snitt er gjort i riktig atrium å starte perfusjonsmåling prosedyren. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3 : Høstet musen organer etter infeksjon med L. monocytogenes. BALB/c mus var infisert intravenøst via lateral hale blodåre injeksjon med vill-type L. monocytogenes 10403S, (1-2 x 104 bakterier/dyr). På 72 timer etter infeksjon, mus var euthanized og mus organer ble samlet eller euthanized mus var perfused gjennom hjertet med 15-20 mL PBS med 10 mM EDTA før orgel høsting. Representant hjerner (A) og lever (B) vises fra ikke-perfused eller parfyme mus. Legg merke til at musen organer vises hvite/bleke (forvellet) etter perfusjon sikre at bakteriell CFU er høstet orgel vev og ikke sirkulerende blod i vevet. Dette tallet er endret fra Ghosh et al., 201814. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4 : Bakteriell byrder i infiserte mus organer. BALB/c mus var infisert intravenøst med vill-type L. monocytogenes 10403S som beskrevet i Figur 3. På 72 h etter infeksjon, hjernen, blod, lever og milt hver mus ble samlet og bakteriell byrdene bestemt. I separate forsøk, hele kroppen perfusjon av mus ble utført og bakterielle belastningen i hvert organ bestemt. Vannrette linjer angir median verdier. * Gruppen blod ble samlet inn umiddelbart før starten av cardiac perfusjon. Dette tallet er endret fra Ghosh et al., 201814. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
L. monocytogenes er kjøpedyktig forårsake livstruende meningoencefalitt hos mennesker. Tidligere studier har vist evnen av bakterier for å krysse blod-hjerne-barrieren (BBB) og å colonize hjernen. Tre ruter hjernen invasjon foreslått under infeksjon: direkte penetrasjon av BBB av bakterier, stealth transport av bakterier som finnes i mononukleære celler3og axonal overføring av L. monocytogenes stammer som forårsaker rhombencephalitis15. Siden hjernen er svært Stangeriaceae og L. monocytogenes er kjent for å sirkulere i blodet under systemisk infeksjon, bestemmelse av omfanget L. monocytogenes er stand til å trenge blod fartøy vil colonize sentralnervesystemet og hjernen er avgjørende.
Beskrevet protokollen, intravenøs hale blodåre injeksjon brukes til å etablere en systemisk L. monocytogenes infeksjon i mus. Denne metoden er nyttig å omgå intestinal barriere og vurdere spesielt bakteriell invasjonen av BBB fra blodet. Protokollen beskriver flere viktige parametere. En viktig parameter er bruken av det aktuelle bakterielle infeksjon dosen under i vivo eksperimenter. Dette er avgjørende for å kunne sammenligne bakteriell CFU fra forskjellige dyr grupper infisert med L. monocytogenes. En annen viktig aspekt å vurdere er L. monocytogenes påkjenningen brukes for eksperimentelle studier. Rapporter har antydet forskjeller mellom ulike L. monocytogenes stammer i virusets og evne til å infisere hjernen10,16.
Protokollen beskrevet her kan endres for å lette undersøkelse av andre aspekter av L. monocytogenes infeksjonsbiologi. L. monocytogenes infisert organer kan bearbeides videre for histopathological analyser å observere synlige inflammatoriske endringer i infiserte mus organer sammenlignet med infisert kontrollen dyr. Metodene beskrevet kan brukes videre betegner sykdom fenotyper gjelder L. monocytogenes påkjenningen involvert i menneskelige infeksjoner samt belastninger skjuler definerte mutanter i potensielle virulens determinanter. Slik søknad ble nylig utført for å avsløre en roman reseptor-ligand samhandling som forbedrer infeksjon i hjernen av L. monocytogenes og fremmet fremhevet viktigheten av verten celle overflaten vimentin i vert-patogen interaksjoner 14.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer ingen konkurrerende økonomiske interesser.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av US Public Health Service gi AI103806 fra National Institutes of Health.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Brain Heart Infusion media | Becton Dickinson | 237200 | |
| Streptomycin sulfate | Amresco | 0382-50G | |
| Petri dishes | VWR | 25384-342 | |
| Glycerol | VWR | 97062-832 | |
| IKA T18 ULTRA-TURRAX Basic Homogenizer | IKA | 3352109 | Model: T18BS1 |
| Spectrophotometer | Beckman Coulter | DU 800 series | |
| BALB/c mice | Jackson Laboratory | Model #000651 | |
| 1 mL syringes | Becton Dickinson | 309659 | |
| 26 G needles | Becton Dickinson | 305115 | |
| 21 G butterfly needles | Becton Dickinson | 367281 | |
| Ethylenediaminetetraacetic acid | Sigma-Aldrich | 60004 | |
| 15 mL conical tubes | VWR | 21008-918 | |
| Round-bottom test tubes | VWR | 60819-546 | |
| Phosphate-buffered saline | Corning | 46-013-CM | |
| Stainless steel spatula | VWR | 82027-520 | |
| Stainless steel scissors (6.5 in) | VWR | 82027-592 | |
| Stainless steel scissors (4.5 in) | VWR | 82027-578 | |
| Stainless steel blunt forceps (4.5 in) | VWR | 82027-440 | |
| Stainless steel fine tip forceps (6 in) | VWR | 82027-406 |
References
- Radoshevich, L., Cossart, P. Listeria monocytogenes: towards a complete picture of its physiology and pathogenesis. Nature Reviews Microbiology. 16 (1), 32-46 (2018).
- de Noordhout, C. M., et al. The global burden of listeriosis: a systematic review and meta-analysis. The Lancet Infectious Diseases. 14 (11), 1073-1082 (2014).
- Drevets, D. A., Leenen, P. J., Greenfield, R. A. Invasion of the central nervous system by intracellular bacteria. Clinical Microbiology Reviews. 17 (2), 323-347 (2004).
- Huang, S. H., Stins, M. F., Kim, K. S. Bacterial penetration across the blood-brain barrier during the development of neonatal meningitis. Microbes and Infection. 2 (10), 1237-1244 (2000).
- Brouwer, M. C., Tunkel, A. R., van de Beek, D. Epidemiology, diagnosis, and antimicrobial treatment of acute bacterial meningitis. Clinical Microbiology Reviews. 23 (3), 467-492 (2010).
- Thigpen, M. C., et al. Bacterial meningitis in the United States, 1998-2007. New England Journal of Medicine. 364 (21), 2016-2025 (2011).
- Durand, M. L., et al. Acute bacterial meningitis in adults. A review of 493 episodes. The New England Journal of Medicine. 328 (1), 21-28 (1993).
- Disson, O., Lecuit, M. Targeting of the central nervous system by Listeria monocytogenes. Virulence. 3 (2), 213-221 (2012).
- Daneman, R., Prat, A. The blood-brain barrier. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 7 (1), a020412 (2015).
- Becavin, C., et al. Comparison of widely used Listeria monocytogenes strains EGD, 10403S, and EGD-e highlights genomic variations underlying differences in pathogenicity. MBio. 5 (2), e00969-e00914 (2014).
- Kirchner, M., Higgins, D. E. Inhibition of ROCK activity allows InlF-mediated invasion and increased virulence of Listeria monocytogenes. Molecular Microbiology. 68 (3), 749-767 (2008).
- Grubaugh, D., et al. The VirAB ABC transporter is required for VirR regulation of Listeria monocytogenes virulence and resistance to nisin. Infection and Immunity. 86 (3), 901-917 (2018).
- Vazquez-Boland, J. A., et al. Listeria pathogenesis and molecular virulence determinants. Clinical Microbiology Reviews. 14 (3), 584-640 (2001).
- Ghosh, P., et al. Invasion of the brain by Listeria monocytogenes is mediated by InlF and host cell vimentin. MBio. 9 (1), e00160-e00118 (2018).
- Henke, D., et al. Listeria monocytogenes spreads within the brain by actin-based intra-axonal migration. Infection and Immunity. 83 (6), 2409-2419 (2015).
- Maury, M. M., et al. Uncovering Listeria monocytogenes hypervirulence by harnessing its biodiversity. Nature Genetics. 48 (3), 308-313 (2016).
