Transfizieren RAW264.7-Zellen mit einem Luciferase-Reportergen

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, Luciferase reports-Konstrukte in rohe 2, 6, 4, 0,7 Zellen zu transfizieren, ohne die Zellen zu aktivieren. Dies wird erreicht, indem zunächst rohe 2, 6, 4, 0,7 Zellen von einer Stammplatte durch schonendes Pipettieren und Aussäen von Zellen in eine mit 24 Vertiefungen behandelte Gewebekulturplatte geerntet werden. Der zweite Schritt besteht darin, den Firefly-Luciferase-Bericht des Plasmids zu transfizieren und die Kontrolle führte das Luciferase-Plasmid in die Zellen ein.

Diese Plasmide müssen frei von Endotoxinen sein. Anschließend werden die Zellen mit den gewünschten Behandlungen stimuliert, gefolgt von einer Zelllyse und dem Transfer auf eine weiße 96-Well-Platte mit klarem Boden. Der letzte Schritt besteht darin, die Luciferase-Aktivität von Glühwürmchen zu testen und dann die Luziferase-Aktivität auszuführen, um das Verhältnis von Glühwürmchen zu berechnen.