Name: Kanüle Implantation in die Cisterna Magna von Nagetieren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 13 s
Description: Erfahren Sie die Kanülenimplantation in die Cisterna Magna von Mäusen zur direkten Zufuhr von Tracern und Molekülen in das Liquor cerebrospinalis. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung der glymphatischen Dynamik und des Metabolitenabbaus im Gehirn.

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Diese Arbeit wurde durch die Novo Nordisk Stiftung und National Institute of Neurological Disorders und Schlaganfall, NINDS/NIH (M.N) unterstützt. A.L.R.X. und S.H-R sind Empfänger von ein Postdoc-Stipendium und ein Promotionsstipendium der Lundbeck-Stiftung.

Alle Verfahren wurden gemäß der Europäischen Richtlinie 2010/63/EU für Tierversuche durchgeführt und waren von der Tier-Experimente-Rat unter das dänische Ministerium für Umwelt und Ernährung (2015-15-0201-00535) genehmigt.
1. Verfahren zur Kanülierung
<ol><li>Kanüle Vorbereitung Hinweis: Berühren Sie die Kanüle mit unsterilen Handschuhen.<ol>
<li>Brechen Sie die abgeschrägte Metallspitze einer 30G dental Nadel Nadel Halterung befestigen.</li>
		<li>Mit einem Nadelhalter, bereiten die Kanüle durch Einfügen der abgeschrägten Metallspitze (ca. 0,3 cm) in einer 30 cm Länge von PE10 Schläuche (Polyethylen-Schlauch 0,024" OD x 0,011" ID) gefüllt mit ACFS (126 mM NaCl, 2,5 mM KCl, 1,25 mM NaH2PO4 , 2 mM MgSO4, 2 mM CaCl2, 10 mM Glukose, 26 mM Nahco33; pH 7.4 Wenn vergast mit 95 % O2 und 5 % CO2).</li>
		<li>Spülen Sie die Kanüle mit ACFS mit einer 1 mL Spritze mit einer 30G-Nadel (30 x ½" 0,3 x 12) ausgestattet.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Chirurgischer Eingriff Hinweis: Die chronische CM Kanülierung kann die Tiere wieder aus dem chirurgischen Eingriff. CM-Injektionen sind am Tag nach der Implantation der Kanüle gemacht und können vor allem bei narkotisierten oder wach Tieren durchgeführt werden. Da dies eine Wiederherstellungs-Operation ist, sollten die Verfahren unter sterilen Bedingungen durchgeführt werden.<ol>
<li>Die Maus (C57BL/6JRj, beiderlei Geschlechts, 8 Wochen) wiegen und mit einer Mischung aus Ketamin und Xylazin zu betäuben (100 mg/kg; 10 mg/kg, beziehungsweise) mittels Injektion intraperitoneal (i.p.). Falls erforderlich, redose die Maus mit einer halben Dosis von Ketamin (50 mg/kg) während des chirurgischen Eingriffs. Alternativ für chronische Kanülierung betäuben Sie Maus, indem man sie in eine Isofluran Induktion Kammer bei 2,5-3 % Isofluran, in ca. 1 L/min O2. In diesem Fall verwenden Sie einen Nase Kegel, um Isofluran-Narkose bei 1,5-2 % während der Operation zu erhalten.</li>
		<li>Wenn Zehe Prise aufhören Reflexe, und die Atmung langsam, aber stetig wird, platzieren Sie das Tier in einem stereotaktischen Rahmen über ein Heizkissen.</li>
		<li>Ophthalmologische Salbe anwenden. Während der Operation bei Bedarf wiederholen.</li>
		<li>Rasieren Sie des Kopfes und Halses der Maus entfernen Sie Fell und Sterilisieren Sie exponierten Haut zuerst mit einem Alkoholtupfer und dann zwei Mal mit Chlorhexidin (0,5 %) oder Jod-Lösung (2 %). Wiederholen Sie die Sterilisation noch zweimal. Hinweis: Ändern Sie den chirurgischen Faltenwurf um Schmutz und Haare nach der Rasur zu entfernen. Dann legen Sie das Tier um den sterilen Bereich zu schützen.</li>
		<li>Für die chronische Kanülierung verwalten 0,5 - 1 ml Lidocain/Bupivacain (1 mg/ml und 0,25 mg/ml, beziehungsweise) subkutan (s.c.) an der Schnitt-Stelle. Verwalten Sie Buprenorphin (0,05 mg/kg; s.c.) für postoperative Analgesie.</li>
		<li>Befestigen Sie die Maus in der stereotaktischen Rahmen. Neigen Sie nach Sicherstellung Fixierung, entweder Intraural oder durch den Jochbogen den Kopf leicht, so dass es mit dem Körper (Abbildung 1E) einen Winkel von 120° bildet.</li>
		<li>Der Teil des Schädels hervorstehenden unmittelbar oberhalb der Nackenmuskulatur - occipital Kamm zu finden. Heben Sie die darüber liegende Haut mit der Pinzette, und schneiden Sie eine Mandel geformte Stück Haut von ca. 1 cm entlang der Mittellinie. Mit Wattestäbchen oder Auge Speere, eine daraus resultierende Blutung zu kontrollieren.</li>
		<li>Mit dem okzipitalen Kamm als Bezugspunkt, Auseinanderziehen der oberflächlichen Bindegewebes um die Nackenmuskulatur unten verfügbar zu machen.</li>
		<li>Trennen Sie die Muskeln an der Mittellinie, indem man sorgfältig die Zange in der Mitte des Standortes Schnitt in der vorderen zur hinteren Achse. Begleiten Sie mit ein paar gebogene Pinzetten in jeder Hand die Spitzen in der Mitte im unteren Bereich des Schädels und ziehen Sie die Muskeln beiseite. Hinweis: Dies sollte die CM aussetzen die erscheint als ein kleines umgekehrtes Dreieck, beschrieben durch das Kleinhirn über und der Medulla unten, hinter dem transluzenten dural Membran (Abbildung 1 b und 1 C).</li>
		<li>Wischen Sie mit einem chirurgischen Auge Speer oder Baumwolle Tupfer, die durale Membran, die die CM.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Einführen der Kanüle in den CM
	<ol>
<li>Entfernen Sie die Kanüle aus der ACFS gefüllten Spritze, halten die 30G Nadel an das hintere Ende des Schlauches befestigt.</li>
		<li>Ein destilliertes Wasser gefüllten 100 µL Spritze verbunden mit einer Spritzenpumpe zuordnen Sie 30G Nadel.</li>
		<li>Legen Sie eine Luftblase von ca. 1 cm in die Kanüle durch den Austritt von Luft mit Hilfe einer Spritze-Pumpe.</li>
		<li>Über eine Spritzenpumpe, 12 μL des gewünschten CSF Tracer in die Kanüle zurückziehen.</li>
		<li>Fassen Sie die Kanüle, gefüllt mit dem CSF-Tracer in der Nähe von Rohr-bedeckten Nadel mit einem gebogenen Pinzette in der dominanten Hand gehalten. Der Mittelfinger der nichtdominanten Hand auf das Ohr-Bar von der gegenüberliegenden Seite und hält es für die spätere Verwendung als Auflage für die Kanüle fest.</li>
		<li>Stecken Sie die Kanüle in einem Winkel von 45° gegenüber der Maus-Kopf vorbei in die Mitte des CM, gekennzeichnet durch seine dreieckige Aspekt gesehen durch die Dura. Vermeiden Sie jede Durchdringung des Kleinhirns oder der Medulla. Stellen Sie sicher, dass die Nadel wo Abschrägung vollständig unter die Dura ist nur bis zu einer Tiefe von 1-2 mm, d. h. bis zu dem Punkt eingefügt wird. Lassen Sie die Pinzette halten die Kanüle und lassen Sie die Kanüle auf die nicht-dominante Hand ruhen. Hinweis: Das abgeschrägte Ende der zahnärztlichen Nadeln erfordert die Anwendung einer Kraft, die durale Membran, die die CM zu durchbohren.</li>
		<li>Ggf. Trocknen Sie GfK Leck bei der Penetration mit einem chirurgischen Auge Speer oder Baumwolle Tupfer ab.</li>
		<li>Tropfen Sie 2-3 Cyanacrylat-Klebstoff auf die dural Membran umgibt die Kanüle. Geben Sie einen Tropfen Klebstoff-Beschleuniger, den Kleber sofort zu heilen. Decken Sie die Schädel und Nadel mit einer Mischung aus dental Zement (ca. 0,5 mg) und Cyanacrylat-Klebstoff (3-5 Tropfen). Sofort danach geben Sie einen Tropfen Kleber Schnellinfo zu heilen.</li>
		<li>Schneiden Sie für chronische Kanülierung den Schlauch (Abfahrt ca. 2-3 cm befestigt an der Kanüle) und versiegeln Sie es mit einer chirurgischen Schweißnaht die Hirndruck (ICP) Ebenen beibehalten, CSF Leckage durch den Schlauch zu verhindern.</li>
		<li>Verwalten Sie für chronische Kanülierung Carprofen (5 mg/kg; s.c.)</li>
		<li>Platzieren Sie für chronische Kanülierung den Mauszeiger in einem Käfig, halten es über ein Heizkissen auf Körpertemperatur zu halten, bis das Tier vollständig aus der Narkose erholt ist. Hinweis: Die Tiere sollten einzeln untergebracht werden, in ihren Käfigen zu versichern, dass die Kanüle intakt bleibt. Stellen Sie sicher, dass die Nase frei von Einstreu ist, indem Sie die Maus auf einem Papiertuch oder anderen festen Substrat. Hinweis: Am nächsten Tag, wenn der chirurgische Eingriff zum einführen der Kanüle Tiere erholt sind, können sie mit CSF Tracer injiziert werden. Injektionslösung in Narkose verabreichen eine Mischung von Ketamin/Xylazin (100 mg/kg; 10 mg/kg, beziehungsweise; i.p.) und fahren Sie mit Abschnitt 2beschriebenen Schritte. Fahren Sie für die Injektion in wach Tiere mit Abschnitt 3.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Injektion von CSF Tracer über akute implantierten CM Kanüle bei narkotisierten Tieren
Hinweis: Für die Injektion von CSF Tracer über akute implantierten CM Kanüle bei narkotisierten Tieren unmittelbar nach Schritt 8 aus vorherigen Abschnitt fort, CSF Tracer Injektion wie unten beschrieben.
<ol><li>Starten Sie mithilfe einer Spritzenpumpe die Injektion in die CM der CSF Tracer mit einer Rate von 1 μl/min für 5 oder 10 min, was zu einem Gesamtvolumen von 5 µL oder 10 µL bzw.. Am Ende der Injektion erlauben Sie die CSF-Tracer im gesamten Gehirn für 30 min mit der Kanüle ungestört zirkulieren.</li>
	<li>Schneiden Sie nach 30 min den Schlauch an der Kanüle (ca. 4 cm Abstand von der Spitze der Nadel) angeschlossen und versiegeln Sie seinem Ende mit einer chirurgischen Naht zu.</li>
	<li>Tiefe Narkose einschläfern des Tieres durch Enthauptung. Schnell das Gehirn sezieren und beheben das Gewebe durch Eintauchen in 4 % Paraformaldehyd (PFA) in Phosphat gepufferte Kochsalzlösung verdünnt (PBS, 0.01M, pH 7,4) über Nacht (o/n) bei 4 ° C.</li>
</ol>3. Injektion von CSF Tracer über chronisch implantierten CM Kanüle in wach Tiere
<ol><li>Über eine Spritzenpumpe, 7 µL oder 12 µl des gewünschten CSF Tracer in eine Kanüle, bestehend aus ca. 30 cm PE10 Schläuche mit einer abgeschrägten dental Nadelspitze 0,5 cm zurückziehen.</li>
	<li>Das Tier vorsichtig zurückhalten und Schneiden von ca. 1 cm des Schlauches an der Kanüle befestigt.</li>
	<li>Noch unter sanften Ruhigstellung, verbinden Sie schnell die Kanüle gefüllt mit CSF Tracer an der Kanüle CM implantiert.</li>
	<li>Über eine Spritzenpumpe, beginnen die Injektion in die CM der CSF-Tracer mit einer Rate von 1 µL/min injizieren 7 µL oder 12 µL zu einem Endvolumen von CSF gespritzt Tracer 5 µL oder 10 µL der ACFS noch in die implantierten Kanüle kompensieren. Am Ende der Injektion erlauben Sie die CSF-Tracer im gesamten Gehirn für 30 min mit der Kanüle ungestört zirkulieren. Sicherstellen Sie, dass das Rohr während der Injektion und Zirkulation verbunden bleibt.</li>
	<li>Am Ende des CSF Tracer Zirkulation Zeit gehen Sie zur Sterbehilfe durch Enthauptung, versicherte, dass das Tier tief betäubt ist. Schnell das Gehirn sezieren und beheben das Gewebe durch Eintauchen in 4 % Paraformaldehyd (PFA) in Phosphat gepufferte Kochsalzlösung verdünnt (PBS, 0.01M, pH 7,4) über Nacht (o/n) bei 4 ° C.</li>
</ol>

<ol><li>Xie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+Drives+Metabolite+Clearance+from+the+Adult+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Sleep Drives Metabolite Clearance from the Adult Brain.</a> Science. , 373-377 (2013).</li>
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<li>Iliff, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain-wide+pathway+for+waste+clearance+captured+by+contrast-enhanced+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Brain-wide pathway for waste clearance captured by contrast-enhanced MRI.</a> J. Clin. Invest. 123, 1299-1309 (2013).</li>
<li>Ratner, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal-mass-transfer-based+estimation+of+glymphatic+transport+in+living+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+SPIE--the+Int.+Soc.+Opt.+Eng%22%5BJournal%5D)">Optimal-mass-transfer-based estimation of glymphatic transport in living brain.</a> Proc. SPIE--the Int. Soc. Opt. Eng. 9413, (2015).</li>
<li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Body+Posture+on+Brain+Glymphatic+Transport%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The Effect of Body Posture on Brain Glymphatic Transport.</a> J. Neurosci. 35, 11034-11044 (2015).</li>
<li>Nouri, S., Sharif, M. R., Sahba, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+ferric+chloride+on+superficial+bleeding%5BTitle%5D)+AND+%22Trauma+Mon%22%5BJournal%5D)">The effect of ferric chloride on superficial bleeding.</a> Trauma Mon. 20, e18042(2015).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Wir haben ein Protokoll vorgelegt, die ein detailliertes Verfahren für Cisterna Magna Kanülierung (CMc), die bietet eine einfache Methode beschreibt um markierte Moleküle an das CSF-Fach zu liefern. CMc ermöglicht die spätere Visualisierung der CSF Dynamik, in Vivo und ex Vivo, mittels verschiedener bildgebender Verfahren oder Histologie.
Einer der Hauptvorteile der CMc-Technik liegt in einen direkten Zugang zum Subarachnoidalraum ohne die Notwendigkeit, das Gehirn von Kranio...

Liquor cerebrospinalis (CSF) taucht das zentrale Nervensystem (ZNS) in das Ventrikelsystem und entlang der Subarachnoidalblutung Räume, ein anatomisch definierten Raum im Kontinuum mit der Ventrikel, die das Gehirn und das Rückenmark umgibt. Eine der Hauptfunktionen des GFK ist eine Route für die Abfertigung von Metaboliten und gelösten Stoffen aus der Anwesenheit von zur Verfügung zu stellen. Abstand wird über die kürzlich entdeckten Glymphatic System1, das Gehirn, die analog zu den peripheren lymphatischen Systems erleichtert. Hierin, wir beschreiben und erläutern die Cisterna Magna Kanülierung (CMc), eine minimal-invasive Methode für die direkte Übergabe von Molekülen in den Liquor. CMc ist die zentrale Methode zur Untersuchung der Glymphatic-Funktion. CMc kann darüber hinaus auch für das Studium der CSF Dynamik und für eine schnelle, Gehirn-weite Lieferung nicht Blut Hirn-Schranke (BBB) durchlässig Moleküle in das Gehirn Parenchym, entlang der perivaskulärer Raum angewendet werden.
Die CMc nutzt physiologische Grundsätze der CSF Bewegungsdynamik durch die CNS, beschriftete Tracer Moleküle oder Drogen in den CSF gefüllten Raum der Cisterna Magna (CM) zu liefern. Moleküle sind über eine Kanüle in die Atlas-okzipitalen dural Membran-Abdeckung, die die CM. Moleküle dann von CSF Masse fließen über den Paravascular Platz1in der Anwesenheit durchgeführt werden implantiert eingespritzt. Tracer oder Kontrast-Agent über die CMc injiziert folgt der Bewegung des CSF, wodurch die Beurteilung der CSF Bewegung und Glymphatic Zustrom durch Quantifizierung Intensitätsstufen beschrifteten Moleküle, die die Anwesenheit von eingeben. CMc ist kompatibel mit verschiedenen bildgebenden Verfahren einschließlich Epifluoreszenz, 2-Photonen-Mikroskopie und Magnetresonanz-Bildgebung (MRI). Auch diese Beurteilung kann in Vivo und ex Vivodurchgeführt. Wichtig ist, ermöglicht CMc die Visualisierung des Systems der Glymphatic unter Narkose oder im natürlichen Schlaf sowie bei wachen, frei beweglichen Tieren.
Die CMc-Technik kann genutzt werden, um verschiedene Aspekte der Strömungsmechanik im Liquor zu studieren, sondern erweist sich als besonders nützlich für das Studium des Glymphatic-Systems sein. Glymphatic Aktivität treibt die konvektive Strömung von CSF aus dem Periarterial Raum über Wasserkanäle Aquaporin-4 (AQP-4), die in der Membran der astrocytic vaskulären Umhüllung Endfeet angebunden sind. Die konvektive Strömung ermöglicht den Austausch von CSF und interstitielle Flüssigkeit (ISF) in das Gehirn Parenchym. CSF/ISF, Stoffwechselschlacken und gelösten Stoffen enthalten wird dann aus der in Anwesenheit von über den perivenöse Platz2,3entfernt. Letzten Endes erreicht CSF/ISF die Peripherie über die kürzlich beschriebenen dural Lymphgefäße4,5. Das Glymphatic System wurde entscheidend für die Abfertigung von schädlichen Abfällen Metaboliten wie Amyloid-β2gezeigt. Darüber hinaus ist Glymphatic Clearance beeinträchtigt Altern6, nach Schädel-Hirn-Verletzung-7, und in Tiermodellen der Diabetes-8 und der Alzheimer-Krankheit9. Bemerkenswert ist Glymphatic Aktivität Zustand abhängig, während Schlaf oder Anästhesie im Vergleich zu Wachheit1deutlich höheren Aktivität zeigen. In der Tat zeigen junge narkotisierten Tiere die höchste Glymphatic-Aktivität. Experimentellen Quantifizierung der Glymphatic Tätigkeit ist somit entscheidend ihre Rolle in Gesundheit und Krankheit zu studieren.
Mehrere Studien haben CSF Dynamik und ihren Austausch mit interstitielle Flüssigkeit (ISF) in das Gehirn Parenchym angesprochen. Die Methoden, die durch die beschrifteten Moleküle geliefert werden sind jedoch eher invasiv, Hirnschäden Parenchym und Änderungen in der intrakraniellen Druck (ICP) auslösen (siehe Bewertung10). Einige Beispiele sind intraventrikuläre oder Intraparenchymal Einspritzungen die Kraniotomie oder Bohren von einen Grat beinhalten Loch in den Schädel. Diese Verfahren wurden gezeigt, ICP, so stören Glymphatic Funktion2zu ändern. Auch solche invasiven Methoden induzieren Astrogliosis und AQP-4 Immunoreactivity in dem Hirnareal Parenchym beschädigt und seine Umgebung11,12zu erhöhen. Wie Astrozyten und AQP-4 Schlüsselelemente des Glymphatic Systems, ist die CMc die Methode der Wahl für seine Studien. Die wichtigsten Vorteile von CMc im Vergleich zu mehr invasiven Verfahren sind die Aufrechterhaltung einer intakten Schädel und Gehirn Parenchym, ICP Umbauten und Astrogliosis, bzw. zu vermeiden. So öffnet CMc in Verbindung mit anderen imaging-Tools für eine breite Palette von Möglichkeiten, nicht nur das Glymphatic-System, sondern auch die Dynamik zu studieren und Mechanismen der Flüssigkeitsströmung in Homöostase sowie in Tiermodellen der neurologischen Erkrankungen.
Cisterna Magna Kanülierung (CMc) Verfahren ermöglicht einfachen und direkten Zugriff auf die cerebrospinale Flüssigkeit (CSF). Durch die Injektion von verschiedener Molekülen (z.B. Fluoreszenz Tracer, MRT-Kontrastmittel) kann der Experimentator verfolgen ihre Bewegung innerhalb der CSF-Fach und die Aktivität des Glymphatic Systems zu bewerten. Das folgende Protokoll beschreibt sowohl die akuten CMc für Injektionen unmittelbar nach der Operation, und chronische Implantation der Kanüle, in der das Tier erholt sich von dem chirurgischen Eingriff für eine spätere Injektion. Der wichtigste Unterschied zwischen der akuten und chronischen Implantation ist, dass die chronische Implantation für das Studium der Glymphatic Aktivität bei Mäusen wach.

<table><tbody><tr><td>SOPIRA Carpule 30G 0,3 x 12mm</td><td>Kulzer</td><td>AA001</td><td></td></tr><tr><td>Polyethylen Schlauch 0,024" Außendurchmesser x 0,011" ID</td><td>Scandidact</td><td>PE10-CL-500</td><td></td></tr><tr><td>30G x &frac12; &rdquo; 0,3 x 12 mm Luer-Lock</td><td>Chirana T. Injecta</td><td>CHINS01</td><td></td></tr><tr><td>Chlorhexidin 0,5% (Chlorhexidin-Digluconat)</td><td>Meda AS</td><td>keine Katalognummer, siehe Link in den Kommentaren</td><td>http://www.meda.dk/behandlingsomrader/desinfektion/desinfektion-af-hud/klorhexidin-sprit-medic-05/</td></tr> <tr><td>Alkoholtupfer 70% Isopropylalkohol 30 x 60mm</td><td>Vitrex Medical A/S</td><td>520213</td><td></td></tr><tr><td>Viskoese Oejendraeber Ophtha</td><td>Ophtha</td><td>145250</td><td></td></tr><tr><td>Holzapplikator, Doppeltes Wattestäbchen (&Oslash; ca. 4 - 5 mm, Länge ca. 12 mm)</td><td>Heinz Herenz</td><td>1032018</td><td></td></tr><tr><td>Augenspeere</td><td>Medicom</td><td>A18005</td><td></td></tr><tr><td>Eisenchlorid 10%ige Lösung</td><td>Algeos</td><td>NV0382</td><td></td></tr><tr><td>Kimtech Science Präzisionstücher Gewebewischer</td><td>Kimberly Clark Professional</td><td>05511</td><td></td></tr><tr><td>Loctite Sekundenkleber Präzision 5g</td><td>Loctite</td><td>keine Katalognummer, siehe Link in den Kommentaren</td><td>http://www.loctite-consumer.dk/da/produkter/superglue-liquid.html&nbsp;</td></tr><tr><td>Insta-Set CA Accelerator</td><td>Bob Smith Industries</td><td>BSI-152</td><td></td></tr><tr><td>Dental Cement Powder</td><td>A-M Systems</td><td>525000</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische Schweißnaht&nbsp;</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>INS750391</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton Spritze GASTIGHT&reg; , Serie 1700, 1710TLL, Volumen 100 &mu; L, PTFE Luer-Lock-Hamilton-Spritzen</td><td></td><td>1710TLL</td><td></td></tr><tr><td>LEGATO 130 Spritzenpumpe</td><td>KD Scientific</td><td>788130</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd-Pulver, 95%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (PBS; 0,01 M; pH 7,4)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3813</td><td></td></tr><tr><td>Ovalbumin, Alexa Fluor 647 Konjugat</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>O34784</td><td></td></tr><tr><td> DAPI (Diamidino-2-phenylindole) Lösung (1 mg/ml)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>62248</td><td></td></tr><tr><td>Dextran, Fluorescein, 3000 MW, anionisch</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D3305</td><td></td></tr><tr><td>E-Z Anästhesie EZ-7000 Classic System</td><td>E-Z Systems</td><td>EZ-7000</td><td></td></tr><tr><td>Attan Isofluran 1000 mg/g</td><td>ScanVet</td><td>55226</td><td></td></tr><tr><td>Euthanimal 200mg/mL (Natrium) Pentobarbital)</td><td>ScanVet</td><td>545349</td><td></td></tr><tr><td>Ketaminol Vet 100 mg/ml (Ketamin)</td><td>Intervet International BV</td><td>511519</td><td></td></tr><tr><td>Rompin Vet 20 mg/ml (Xylazin)</td><td>KVP Pharma + Veterin&auml; r Produkte GmbH</td><td>148999</td><td></td></tr><tr><td>Xylocain 20 mg/ml (Lidocain)</td><td>AstraZeneca</td><td>158543</td><td></td></tr><tr><td>Marcain 2,5 mg/ml (Bupivacain)</td><td>AstraZeneca</td><td>123918</td><td></td></tr><tr><td>Bupaq Vet 0,3 mg/ml (Buprenorphin)</td><td>Richter Pharma AG</td><td>185159&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

kanüle implantation in die cisterna magna von nagetieren

Cannula Implantation into the Cisterna Magna of Rodents

Cisterna Magna Kanülierung (CMc) ist ein einfaches Verfahren, das direkten Zugriff auf die cerebrospinale Flüssigkeit (CSF) ohne operativen Schäden an den Schädel oder das Gehirn Parenchym ermöglicht. Bei anästhesierten Nagetieren ermöglicht die Belichtung der Dura Mater durch stumpfe Dissektion der Nackenmuskulatur das einführen der Kanüle in die Cisterna Magna (CM). Die Kanüle, komponiert, entweder durch einen feinen abgeschrägten Nadel oder Borosilikatglas Kapillare, ist über einen Schlauch Polyethylen (PE) eine Spritze befestigt. Über eine Spritzenpumpe, können Moleküle dann kontrollierten Preisen direkt in die CM injiziert werden kontinuierlich mit den Subarachnoidalraum ist. Aus dem Subarachnoidalraum können wir CSF Fluten durch konvektive Strömung in den perivaskulärer Raum um eindringende Arteriolen verfolgen, wo gelöste Austausch mit der interstitiellen Flüssigkeit (ISF) erfolgt. CMc kann für akute Injektionen unmittelbar nach der Operation oder für eine chronische Implantation, mit späteren Injektion betäubt oder wach, erfolgen frei beweglichen Nagetiere. Quantifizierung der tracerverteilung im Gehirn Parenchym erfolgt durch Epifluoreszenz, 2-Photonen-Mikroskopie und Magnetresonanz-Bildgebung (MRI), abhängig von den physikalisch-chemischen Eigenschaften der injizierten Moleküle. CMc in Verbindung mit verschiedenen bildgebenden Verfahren bietet damit ein leistungsfähiges Werkzeug für die Beurteilung des Glymphatic Systems und CSF Dynamik und Funktion. CMc kann darüber hinaus genutzt werden, als Kanal für schnelle, Gehirn-weite Lieferung der Signalisierung Moleküle und metabolische Substrate, die die Blut-Hirn-Schranke (BBB) sonst nicht überqueren konnte.

Bei der Fixierung von Mäusen oder Ratten in einem stereotaktischen Rahmen sind die Nackenmuskulatur rund um die Region occipital Kamm unverblümt seziert, um die Cisterna Magna (CM) verfügbar zu machen. Die dreieckige Struktur des CM ist leicht zwischen dem kaudalen Teil des Kleinhirns und der Medulla (Abbildung 1A-1 C) anerkannt. Die Kanüle wird 1-2 mm in die CM eingefügt, durch sanft piercing die blockfreien-okzipitalen Membran (<strong clas...

Hier beschreiben wir ein Protokoll zur Durchführung der Cisterna Magna Kanülierung (CMc), minimalinvasiv, Tracer, Substrate und Signalmoleküle in den Liquor cerebrospinalis (CSF) zu liefern. In Kombination mit verschiedenen Bildgebungsverfahren ermöglicht CMc Glymphatic System sowie CSF Dynamik Bewertung und Gehirn-weite Lieferung verschiedener Verbindungen.

Kanüle Implantation in die Cisterna Magna von Nagetieren

Cisterna magna cannulation (CMc) is a straightforward procedure that enables direct access to the cerebrospinal fluid (CSF) without operative damage to ...

Das übergeordnete Ziel dieses chirurgischen Eingriffs ist es, die direkte Abgabe von Tracern, Substraten und Signalmolekülen in die Zerebrospinalflüssigkeit zu ermöglichen. Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen in den Neurowissenschaften zur Liquor- und ISF-Dynamik im Gehirn zu beantworten. Diese Methode ermöglicht die Abgabe verschiedener Moleküle, Tracer, aktiver Stoffwechselsubstrate in den Liquor, die Zerebrospinalflüssigkeit und das Kompartiment, ohne den Schädel oder das Hirnparenchym zu beschädigen.Die Auswirkungen dieser Technik erstrecken sich auf neurologische Erkrankungen, da sie die Bewertung der Liquor-ISF-Flüsse im Gehirn sowie die Beseitigung von Metaboliten und toxischen Proteinen aus dem Hirnparenchym ermöglicht. Diese Methode gibt also Einblick in die Dynamik der Liquor-ISF-Flüsse und kann zusätzlich als schneller, gehirnweiter Transportweg für Signalmoleküle und molekulare Substrate genutzt werden, die sonst die Blut-Hirn-Schranke nicht passieren könnten. Um die Kanüle vorzubereiten, brechen Sie die abgeschrägte Metallspitze einer 30-Gauge-Zahnnadel mit einem Nadelhalter ab.Führen Sie dann die abgeschrägte Metallspitze in einen 30 Zentimeter langen PE-10-Sch

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Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Quelle: Joshi, K., et al. Stereotaktischer chirurgischer Ansatz zur Mikroinjektion des kaudalen Hirnstamms und des oberen zervikalen Rückenmarks über die Cisterna magna bei Mäusen. J. Vis. Exp. (2022)Dieses Video zeigt den stereotaktischen Ansatz der Cisterna magna für die gezielte Verabreichung an den Hirnstamm und das obere Rückenmark. Durch den Zugang zur mit Liquor gefüllten Cisterna magna ermöglicht dieser Ansatz präzise Injektionen in Bereiche, die mit stereotaktischen Standardmethoden...

Stereotaktischer Cisterna magna-Ansatz für die therapeutische Verabreichung in einem Mausmodell

Quelle: Zamboni, M., et al., Induktion der Modifikation von leptomeningealen Zellen durch intrazisternale Injektion. J. Vis. Exp. (2020)Dieses Video zeigt das Verfahren zur Verabreichung eines Induktor-Medikaments in die Cisterna magna einer anästhesierten Maus. Die Injektion induziert selektiv die Expression von Fluoreszenzmarkern in Oberflächenzellen des Gehirns, die über die Zerebrospinalflüssigkeit zugänglich sind, was durch Fluoreszenzbildgebung bestätigt wurde.

Gezielte Verabreichung von Medikamenten in einem Mausmodell über Cisterna Magna Injektion

Quelle: Xavier, A. L. R., et al. Kanülenimplantation in die Cisterna Magna von Nagetieren. J. Vis. Exp. (2018)Dieses Video zeigt das Verfahren zur Implantation einer Kanüle in die Cisterna magna einer anästhesierten Maus. Bei der Technik wird eine auf der Nadel befestigte Kanüle durch die Dura in die umgekehrte dreieckige Cisterna magna geführt und für die gezielte Abgabe in das Liquor cerebrospinalis gesichert.

Kanülenimplantation in die Cisterna Magna im Mausmodell

In diesem Video beschreiben wir das Verfahren, um vom Menschen stammende Tumorzellen in die Cisterna magna des Gehirns einer Maus zu bringen. Das orthotope Mausmodell kann verwendet werden, um die metastasierende Ausbreitung von Krebs auf die kranialen Hirnhäute zu untersuchen.

Chirurgische Cisterna magna Injektion: eine Methode zur direkten Verabreichung von Tumorzellen in das zentrale Nervensystem des Mausmodells

In diesem Video beschreiben wir eine Methode, um auf die Cisterna magna in einem Schweinemodell zuzugreifen. Die Cisterna magna ist ein bevorzugter Ort für Untersuchungen über Liquor.

Lokalisierung der Cisterna Magna in einem Schweinemodell: Eine chirurgische Methode zum Zugang zur Cisterna Magna in einem Schweinemodell für die direkte Kanülierung

Dieses Video beschreibt das Protokoll für die Verabreichung von Tracermolekülen durch direkte Kanülierung der Cisterna magna in einem Schweinegehirn. Diese Methode hilft, die Verteilung der Zerebrospinalflüssigkeit im glymphatischen System sichtbar zu machen.

Tracer-Molekül-Verabreichung in der Cisterna magna: Eine Methode zur Verabreichung fluoreszierender Tracer-Moleküle durch direkte Kanülierung der Cisterna magna beim Schwein

Wir beschreiben eine intrazisternale Injektion, die eine an der Spitze gebogene Nadel verwendet, die zum Schädel stabilisiert werden kann, wodurch das Risiko einer Schädigung des darunter liegenden Parenchyms beseitigt wird. Der Ansatz kann für die genetische Schicksalskartierung und Manipulation von Leptomeningealzellen und für die Verfolgung der Bewegung von Zerebrospinalflüssigkeit verwendet werden.

Induktion von Leptomeningealzellen Modifikation über intrazisternale Injektion

Dieser Artikel stellt ein Schritt-für-Schritt-Protokoll für die direkte Kanülenimplantation in die Cisterna magna von Schweinen vor.<br...

Direkte Kanülenimplantation in der Cisterna Magna der Schweine

Die stereotaktische Chirurgie zur Ausrichtung auf Gehirnstellen bei Mäusen beinhaltet häufig den Zugang durch die Schädelknochen und wird von Schädel-Landmarken geleitet. Hier skizzieren wir einen alternativen stereotaktischen Ansatz, um den kaudalen Hirnstamm und das obere zervikale Rückenmark über die Cisterna magna anzusprechen, der auf der direkten Visualisierung von Hirnstamm-Landmarken beruht.

Stereotaktischer chirurgischer Ansatz zur Mikroinjektion des kaudalen Hirnstamms und des oberen zervikalen Rückenmarks über die Cisterna magna bei Mäusen

Um die Regulierung des zerebralen Blutflusses in vivo zu untersuchen, sind traditionelle pharmakologische Methoden invasiv und schädigen oft den Schädel, die Dura und die Leptomeninge. In dieser Arbeit haben wir eine minimal-invasive Technik entwickelt, die die Nanoinjektor-gesteuerte intrazisternale Magna (ICM) Injektion mit Laser-Speckle-Kontrastbildgebung kombiniert, um die Integrität des Schädels und der Leptomeninge zu erhalten.

Gepaarter Cisterna Magna Nanoinjektions- und Laser-Speckle-Kontrastbildgebungs-Assay zur Untersuchung der Regulierung des zerebralen Blutflusses in vivo

Das Protokoll beschreibt ein Verfahren zur Injektion von Tumorzellen über den perkutanen Punktionsweg in die Cisterna magna, das bei Mäusen eine robuste leptomeningeale Metastasierung induziert und so das Trauma und die extrakranielle Tumorlast reduziert.

Minimalinvasives Cisterna magna-Injektionsmodell für Studien zur leptomeningealen Metastasierung bei Mäusen

Erfahren Sie die Kanülenimplantation in die Cisterna Magna von Mäusen zur direkten Zufuhr von Tracern und Molekülen in das Liquor cerebrospinalis. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung der glymphatischen Dynamik und des Metabolitenabbaus im Gehirn.

Kanüle Implantation in die Cisterna Magna von Nagetieren

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