Introduction
Lungekreft er den ledende årsak til død kreft rundt om i verden 1. Forskning på forebygging, tidlig oppdagelse og behandling av lungekreft pågår i mange forskningssentre over hele verden 2,3. Det er utviklet flere dyremodeller for lungekreft, og de har vist seg nyttige for å studere mekanismene for lunge karsinogenese og celle opprinnelse, i påvisning av tilstedeværelse av kreft stamceller, og i å undersøke forskjellige nye terapeutiske strategier 4. Tidligere modeller avhengig av kreftfremkallende-indusert startfasen i følsomme stammer av mus 5. Utviklingen av knockout og transgene musemodeller som lungekreft oppstår som et resultat av spesifikt manipuleres genetisk lesjonene betydelig forbedret evne til å kontrollere tumorfremkallelse og etterligner flere aspekter av human lungekreft 4. Imidlertid er en hovedutfordring i bruken av lungekreft dyremodeller er fraværet av en sanntids-metode for ånøyaktig identifisere og overvåke utbruddet og utvikling av svulster i mus lungene og for å dokumentere eventuelle senere endringer i sine størrelser, slik som deres fortsatt vekst eller reduksjon i respons til behandlinger. Dette har tvunget forskere til å ty til flere tid, krefter og ressurskrevende teknikker for å identifisere svulster og å evaluere sine eksperimentelle resultater. Tilstedeværelsen av iboende inter-mus variasjon som respons på tumorfremkallelse krever bruk av et stort antall dyr i hver forsøksgruppe for å redusere data variabilitet. Manglende evne til å vurdere tumorvekst eller respons på behandlingen i sanntid har tvunget forskere å blindt avlive mus ved flere tidspunkter i lengre eksperimentelle protokoller for å garantere at de vil samle de riktige data, noe som resulterer i sløsing med ressurser fra prøvene oppsamlet ved tidspunkter som er enten for tidlig eller for sent.
I den foreliggende undersøkelse, en fremgangsmåte utnytte en liten-dyr mikro-computed tomografi (mikro-CT) skanner for å oppdage og følge opp lungesvulster i introduseres levende mus. Vi brukte vår nylig beskrevet Sftpc-rtTA- og Tre-Fgf9-res-EGFP dobbel-transgen (DT) mus som raskt utvikle lunge adenokarsinom etter induksjon med doksycyklin 6,7. Anvendelse av mikro-CT gjør oss i stand til (blant annet) inkluderer mus med avvikende lunge abnormiteter før induksjon, bekrefte utvikling av tumorknuter i lungen etter induksjon, og observere endringer i tumorknuter i respons til eksperimentelle behandlinger. Endepunktet avliving av mus og histologiske undersøkelser, bekreftet nøyaktigheten av sanntidsvurdering foretatt med mikro-CT. Vi tror at denne teknikken vil bane vei for å gjennomføre bedre planlagt eksperimenter med lungekreft dyremodeller samtidig som de sparer verdifulle ressurser, forkorte observasjon tid og øke nøyaktigheten og forståelsen av resultater.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Dyreforsøk ble godkjent av Institutional Animal Care og bruk komité Keio University.
Merk: I denne studien har vi brukt Sftpc-rtTA- og Tre-Fgf9-res-EGFP DT mus der lunge adenokarsinom raskt utvikler etter induksjon ved å mate chow inneholder doksycyklin 6,7. Men alle vurderingsprosedyrer brukes på andre lungekreft musemodeller.
1. Eksperiment Outline:
- Identifisere status for lungene ved baseline:
- Før svulst induksjon, når DT mus er 8 - 12 uker gammel, utfører den første mikro-CT scan (se avsnitt 2 og 3 nedenfor). Dette tjener som skannelinjen lunge, bekrefter fraværet av spontant utviklede knuter på grunn av en utett transgenet, og dokumentere fravær av enhver eksisterende lungepatologi før tumorfremkallelse.
- Initiere svulst induksjon:
- Bytt DT mus fra vanlig chiktig doksycyklin chow å indusere fibroblast vekstfaktor (FGF) 9 uttrykk i alveolar celler og å initiere svulst utvikling. Gi doksycyklin chow (200 ppm) ad libitum.
- Bekrefte utviklingen av tumorknuter i muselunger:
- Utfør en mikro-CT scan for å identifisere utvikling av tumorknuter i forhold til pre-induksjon scan den.
- Vurdere behandlingsrespons:
- For å teste evnen til mikro-CT for å detektere endringer i tumorknuter i respons til behandling, administrere FGF-reseptor (FGFR) inhibitor AZD4547, deretter utføre flere mikro-CT etter 5 og 10 uker.
- Endepunkt evaluering:
- Avlive alle behandlings- og kontroll mus og prosess vev for histologisk evaluering (se punkt 6 nedenfor).
2. Å Mus for Micro-CT Image Acquisition:
- Slå på mikro-CT-skanner og datamaskin.
- Click på programvaren som heter "R_m CT2", klikk deretter på "varme opp".
- Fjern prøven seng som musen blir plassert fra mikro-CT kammeret. Pakk seng med plastfolie.
- Sett anestesi induksjon boksen ved å legge isofluran til anestesi fordamper opp til merket nivå. Sett isofluran strømningshastighet på 3 l / min.
- Åpne oksygen tank for å starte oksygenstrømmen inn i induksjonsboksen og satt strømningshastighet på 1 l / min.
- Plassere musen i anestesi induksjonsfeltet og bekrefter at det er dypt bedøvet ved fravær av spontan bevegelse, og som reaksjon på en hud klype (en svak klype en liten fold av huden, noe som ikke forårsaker vevsskade eller hud break).
- Påfør en okulær smøremiddel for å unngå hornhinne tørrhet under anestesi.
- Åpne mikro-CT kammer og plasser musen med ryggsiden opp på prøven sengen. Hold hodet på musen og trekke kroppen nedover fra underekstremitetene i order for å strekke og rette ut kroppen symmetrisk.
- Slå av anestesi strømmen til induksjon boksen og slå den på mot røret som kobles til mikro-CT kammeret.
- Plasser anestesi rør inn musens nesen for å administrere kontinuerlig bedøvelse.
- For å fikse musen i posisjon; vikle musen og prøven seng med plastfolie.
Merk: Det er viktig å holde musen i henhold dyp anestesi og pakket til prøven sengen fordi noen liten bevegelse eller vri kroppen sin under skanningen vil resultere i disig bilder og vanskeligheter med tolkning. - Lukk mikro-CT kammeret.
- Juster mikro-CT-systemet til 90 kV og 160 uA og skannetiden til 4,5 min. Still inn bildeområdet til 24 × 19 mm og voxel størrelse 50 × 50 × 50 mikrometer. Bruk synkron modus for hjerteslag.
- Lag en ny mappe i "Database" for å lagre nye bilder i den mappen.
- Start skanningen.
- Etter fullføring av skanningen, beveger musen inn i et tomt bur og observere det før det gjenvinner bevisstheten. Ikke legg den med annen mus før den er helt frisk igjen fra virkningene av anestesi.
3. Pre-induksjon Micro-CT bilde visualisering og analyse:
- For å visualisere mikro-CT-bilder, laste ned gratis ImageJ programvaren fra følgende nettside: http://imagej.nih.gov/ij/ . Merk: Hver mikro CT datafil er en bunke med ca 500 TIF filer (TIF). Andre bildevisning programvare kan også brukes.
- Åpne seriemikro CT bildefiler og bla gjennom alle bildene av hver mus fra halsen til magen eller vice versa.
- Bruke skanninger av naive villtype mus, identifisere tettheten av ulike områder og normale anatomiske strukturer i brystet basert på kunnskap om mus anatomi (se figur 1A).
- Hold markøren medmus og blar opp, fra hvitaktig abdominal viscera og membran, gjennom brystet og opp til halsen.
- Identifiser benete landemerker brystet buret (sternum foran, ryggvirvler i ryggen og ribbeina på sidene).
- Identifisere hjertet på forsiden av brystet og de store blodkar i nærheten av hjertet og i mediastinum.
- Observer luftrør lumen (som en liten mørk sirkel på nivået av nakken og øvre bryst), som bifurcates inn i høyre og venstre hoved bronkiene deretter fortsette å gren i stadig mindre bronkier. Merk at hver bronkie er nært forbundet med to eller tre blodårer (Figur 1a).
- Begynn å undersøke skanninger av un-indusert DT mus og identifisere tilstedeværelsen av noe unormalt.
- Ekskluder mus med unormale pre-induksjons lunge skygger (f.eks, knuter, emphysematous bullae, etc.) fra ytterligere eksperimenter. (Figur 1C-E, G, H
4. Tumor Induksjon:
- For å indusere tumor utvikling i eksperimentell mus som viste normale lunge skanner, bytte sin mat fra vanlig chow doksycyklin holdig chow (200 ppm).
5. Oppfølging skanninger:
- Etter 10 uker, utføre en andre mikro-CT-skanning av alle mus for å bekrefte utviklingen av tumorknuter i lungene (se figur 2).
- Delt mus inn i to grupper. Administrere FGFR blokker AZD4547 (125 ug / kg / dag via et magerør i 6 dager / uke i 10 uker) til en gruppe, og en placebo til den andre kontrollgruppe i 10 flere uker.
- Følg opp endringene i knuteaktig skygger ved å utføre en tredje scan 4 - 5 uker senere.
- Ved slutten av 10 ukers behandling, utføre en fjerde scan.
- Avlive alle mus med CO2-inhalering eller med intraperitoneal injeksjon av 0,1 mg / 200 pl av pentobarbital.
- Tilidentifisere de dynamiske endringer i tumorknuter etter induksjon og i respons på behandling, identifisere tilsvarende stillinger i de serielle skanne bilder av samme mus ved to eller flere forskjellige tidspunkter da kontrollere for utseendet / forsvinningen av eventuelle unormale skygger (figur 3 ).
- For å lette identifiseringen av samme plan i samme musen på forskjellige tidspunkter, prøv å knytte planet av interesse med anatomiske landemerke strukturer i musen brystet.
- Bruk landemerker som luftrøret, sin delinger, høyre og venstre hoved bronkiene, aorta, pessar, og store blodårer.
Merk: Bryst bein, inkludert brystvirvler, ribbeina og brystbeinet er mindre nyttig som landemerker posisjonering på grunn av vanlige mindre tilter i musen kroppen innretting på prøven seng, noe som øker muligheten for feiltolkning av skanningen posisjon. Tilsvarende er bildet serienummeret i søkefilen upålitelig for identifying den samme posisjon over tid på grunn av endringen i musekroppslengde fra en tids-punkt til et annet. Svikt eller unøyaktighet i å identifisere det samme plan ved forskjellige tidspunkter kan resultere i falsk positiv / negativ tolkning av resultater.
- Bruk landemerker som luftrøret, sin delinger, høyre og venstre hoved bronkiene, aorta, pessar, og store blodårer.
6. Mouse Eutanasi og Lung Collection:
- Avlive mus med CO 2 inhalasjon eller med intraperitoneal injeksjon av 0,1 mg / 200 pl av pentobarbital.
- Expose abdominal viscera ved å skjære på langs gjennom bukveggen. Luft mus for å redusere volumet av blod i lungene ved å dissekere den abdominale aorta.
- Slit membranen med fine saks; Dette vil resultere i tap av undertrykket fra brysthulen, og dermed bryte sammen lungene. Expose lungene og hjertet ved å kutte og fjerne deler av ribbene i fremre brystveggen. Rengjør fremre del av nakken ved å kutte hud og bløtvev å eksponere tracheen.
- Skjær bort hjertet og thymus kjertel. Sett tang bak luftrøret for å skille det fra spiserør.
- Cannulate luftrøret med en G24 kanyle deretter feste den på plass ved å stramme en tråd rundt den innsatte delen.
- Blåse opp og fikse lungene ved hjelp iskald 4% paraformaldehyde (PFA) gjennom luftrør kanyle ved hjelp av en 25 cm kolonne. Ta kanylen og stram tråden for å hindre PFA lekkasje deretter kutte øvre luftrøret av sin tilknytning til strupehodet.
- Trekk luftrøret fra sutur tråden og dissekere den fra sitt feste, og fortsetter nedover for å fjerne det med lungene en -blokk. Sett den inn i en 15 ml tube inneholder 5 ml 4% PFA. La lungene i PFA O / N for å sikre fullstendig vevspenetrasjon og fiksering, deretter behandle vevet inn i en standard parafin blokk 8.
- Skjær parafinblokker inn i 6 um tykke skiver på en mikrotom og flekken med hematoxylin og eosin ved bruk av standard teknikker. 7. Histologisk Evaluering:
- Slå på lysbilde skanner instrument og datamaskin.
- Klikk på "NDP scan" programvare.
- Velg skannemodus "Batch av lysbilder" og "Semi-Auto Mode" for å skanne en rekke lysbilder.
Merk: robotarm som plukker opp skinnene under sekvensiell skanningen er svært følsomme for eventuelle uregelmessigheter på kantene av glassplater. - Palpate kantene av alle glassplater før du legger dem i maskinen. Hvis det er noen utstikket av dekselet glass eller tørket montering medium, vaske den av med en kutter eller en skalpell.
- Last lysbildene i et lysbilde kassett. Åpne prøven luken og skyv kassetten på plass "en";. Lukk døren.
- På dataprogrammer, gi korte beskrivende navn på alle lysbildene i sin tilsvarende posisjon i kassetten og klikk "OK" -knappen.
- Velg profilen modus: "Lysfelt".
- Klikk på "Start Batch" for å starte foreløpig skanning.
Merk: Når maskinen har skannet alle lysbildene, vil programvaren automatisk oppdage områder med vev på alle lysbildene og foreslå det som en region av interesse. - Hvis det er nødvendig, omdefinere regionen av interesse ved å holde nede venstre museknapp og dra i regionen grensen.
Merk: Definere overdrevent store områder av lysbildene som de regioner av interesse vil resultere i en mye lengre tid skanning. - Når fornøyd med regionene interesser på alle lysbildene, klikk på "Scan" for å begynne å skanne alle lysbilder.
Merk: De skannede filene kan observeres digitalt i lav og høy oppløsning, og bildene kan eksporteres som JPEGfiler.
Merk: Selv om bruken av en "slide scanner" for digital histologisk evaluering er beskrevet her, er også mulig å bruke vanlige mikroskoper og visuell histologisk evaluering for vurdering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Identifisering av mus med lunge abnormiteter ble utført ved baseline. Før svulst induksjon, da DT musene var 8 - 12 ukers alder, ble lungene av alle mus skannet med mikro-CT. Overraskende, ca 50% av mus viste forandringer som tvang oss til å anse dem uegnet for inkludering i senere studie. Disse unormalt var nodule-som skygger, store én eller flere små emphysematous bullae og / eller lobar atelektase (figur 1A, C, DE, GH). Deretter FGF9 transgenet og tumor induksjon var activated.Only mus som viste normale lunge skanner (uten misdannelser) ble byttet fra vanlig chow doksycyklin chow å indusere FGF9 uttrykk i alveolære celler og påfølgende svulst utvikling. For å bekrefte utviklingen av tumorknuter i mus lungene etter ti uker etter initiering av tumorfremkallelse, oppfølging mikro-CT-skanninger ble utført. Disse avslørte development av flere knuter av variable størrelser i alle mus (Figur 2, sammenlign A til B og D til E). Micro-CT ble utført for å vurdere behandlingsrespons. Disse viste at mus som ble administrert av FGFR hemmer AZD4547 i 10 uker faktisk utstilt forsvinning eller reduksjon i størrelsen på knuter som var synlig i pre-behandling skanner (figur 3, sammenligne pre-, post-induksjon og etterbehandling, AC , EG og IK). På den annen side, kontrollmus som ikke var gitt FGFR-inhibitor og ble gitt placebo viste ingen endring i stedet, økning av noduler størrelse og fremkomst av nye knuter (figur 3, MO); bekrefter at den reduksjon i størrelse observert i behandlingsgruppen er en reell effekt av terapeutisk intervensjon.
(figur 1B, F, I). Mus etter 10 - 12 uker med induksjon med doksycyklin: Det ble observert flere adenokarsinom knuter med variable størrelser og posisjoner i alle dyr (figur 2C, F). Mus etter 10 - 12 uker doksycyklin induksjon etterfulgt av 10 - 12 uker med en FGFR blocker: Knuter var mye færre og mindre (figur 3D, H, L) sammenlignet med de som ble observert etter induksjon. Mus etter 10 - 12 uker doksycyklin induksjon etterfulgt av 10 - 12 uker med placebo: Flere store knuter er synlig (figur 3P) i likhet med disse sees på post-induksjon tidspunkt.
Figur 1. Micro-CT Identifiserer Pre-induksjon Lung unormalt. Alle mus ble undersøkt med mikro-CT før oppstart av doksycyklin induksjon. Når lunge unormalt ble oppdaget, ble musene avlivet for histologisk bekreftelse. Representative mikro-CT scan bilder for (A) en normal lunge, (c) lungene med et atelectatic område, (DE) lungene med emphysematous bullae og (GH) lungene med en unormal knuteaktig skygge. Histologisk evaluering bekreftet nøyaktigheten av mikro-CT-resultater: (B) normal lunge histologi, (F) flere emphysematous områder; og jeg) flere tumornoduler. Skala: 200 mikrometer.53904fig1large.jpg "target =" _ blank "> Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2. Micro-CT Identifiserer Utvikling av tumornoduler etter induksjon. Mus som viste en ren pre-induksjon scan ble matet doksycyklin chow i 10 uker og deretter re-evaluert med mikro-CT, etter at de ble avlivet for histologisk evaluering. Representative mikro-CT-skanne bilder fra to forskjellige mus viser utseendet på flere knuteaktig skygger 10 uker etter starten av doksycyklin chow. (A, D) Pre-induksjon ren lunge, (B, E) Same-posisjon skanne bilder som viser utviklingen av flere knuter (røde piler). Små gule piler peker til de anatomiske landemerker som brukes til å identifisere samme posisjon på ulike tidspunkter. (C, F) knuter sett i mikro-CT scan var confirmed i lunge histologiske snitt. Skala:. 200 mikrometer Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3. Micro-CT Identifiserer endringer i tumorknuter i respons på behandling. Mus som viste rene pre-induksjon skanner ble matet doksycyklin chow i 10 uker, og deretter en post-induksjon mikro-CT ble utført. Deretter ble de administrert FGFR hemmer AZD4547 i 10 uker og re-evaluert med mikro-CT (etterbehandling). Kontrollmus ble gitt placebo i stedet for FGFR-inhibitor for å klargjøre den faktiske effekten av terapeutiske inngrep. Til slutt ble musene avlivet for histologisk evaluering.
Representative mikro-CT-skanne bilder fra fire forskjellige mus. (A, E, I, M) (B, F, J, N) Skanner fra samme mus etter at de ble indusert med doksycyklin chow i 10 uker.; alle viste flere knuter (røde piler, omkranser rød oval et område som hadde vært helt skygget av knuter). (C, G, K) Skanner fra samme mus etter ytterligere 10 ukers behandling med FGFR inhibitor viser fullstendig bortfall eller markert reduksjon i størrelsen av knuter. (O) skanning fra en kontroll mus for å representere den kontrollgruppe som ble gitt placebo i stedet for FGFR-inhibitor som viser økning i tumorknuter 'størrelse og antall. Små gule piler peker på de anatomiske landemerker som benyttes for å identifisere den samme stilling ved forskjellige tidspunkter. (D, H, L) Histologiske snitt bekreftet markert reduksjon i klumpstørrelsen og nummer (sammenlign figur 2 C og F). (P) viser preseNCE av flere tumornoduler da placebo ble administrert. Skala:. 200 mikrometer Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Mikro-CT-basert metode beskrevet her for sanntids identifisering av lunge misdannelser og overvåking av utviklingen av tumorknuter og respons på behandlingen i lungekreftdyremodeller vil gjøre forskerne som gjennomfører lungekreftrelaterte eksperimenter for å planlegge mer nøyaktig og effektiv eksperimenter samtidig som du sparer tid og ressurser. Vi har tidligere brukt MR for samme formål 6. Klarhet i skanningen, og terskelen for påvisning av lunge knuter med MR var dårligere enn de med mikro-CT-skanner som beskrevet i denne studien seks.
Tidligere studier som brukte lignende lunge adenokarsinom mus modeller (med ulike genetiske bakgrunn og svulst induksjon metoder) åpenbart hadde flere ulemper som kunne ha vært unngått eller forbedrede de hadde brukt mikro-CT scanning 9,10. De hadde ingen mulighet for å identifisere eventuelle pre-induksjons lunge unormalt eller knuter, og dermed risikere konfunderendesine resultater ved inkludering av uegnede dyr. De hadde heller ingen måte å bekrefte utviklingen av svulster etter induksjon eller etter spre kreftceller i villtype mus (for å indusere sekundære svulster), slik at de måtte vente i 4-8 måneder da blindt avlive mus for histologisk identifisering av svulster. Når disse modeller ble brukt for å vurdere det terapeutiske potensialet av et medikament, hadde forskere til å allokere flere grupper som skal avlives i en kronologisk rekkefølge for å påvise effekten av behandling på tumorknuter med histologi og for å være i stand til å identifisere tidspunktet for maksimal effekt 11.
En begrensning ved vår metode er imidlertid forekomsten av disige skygger som tilsløre påvisning av knuter i lungene når noen fremmede stoffer injiseres intratrakealt 7 (data ikke vist). Noen mus så ut til å utvikle en langvarig inflammatorisk reaksjon på det injiserte substans og skyggen av denne Reactipå og medfølgende interstitielt ødem maskert eksisterende knuter. I slike tilfeller kan MRI prøves som et alternativ.
Nylig har andre avbildningsmodaliteter blitt introdusert for å vurdere forskjellige patologier i små dyr; som bioluminesens bilde 12 og positronemisjonstomografi (PET) scan 13. Så vidt vi vet, har disse bildesystemer ikke blitt brukt ennå til å vurdere lungesvulster i mus modeller, slik at sammenligning av deteksjon effektivitet og klarhet i bildet med små dyr MR og mikro-CT-bilder er ennå ikke mulig. Tilgjengeligheten og kostnadene for disse maskinene er en begrensende faktor til deres utstrakte bruk.
Vi oppdaget lunge abnormaliteter hos omtrent 50% av musene ved pre-induksjons screening og følgelig disse musene, ble utelukket fra ytterligere eksperimenter. Denne høye forekomst av unormalt kan være et resultat av en "lekk" FGF9 transgenet i noen dyr som resulterer i utviklingen av tumoren noduls selv før de blir indusert 14. Faktisk er omtrent halvparten av de ekskluderte dyrene når undersøkt histologisk viste tilstedeværelse av flere små knuter. Disse kan også være forårsaket av en avvikende effekt av den innsatte transgenet på de nærliggende gener i musegenomet 14. Utviklingen av disse slags forandringer er på ingen måte bestemt til Sftpc-rtTA- og Tre-Fgf9-res-EGFP dobbelttransgene mus og dermed andre lungekreft modeller kanskje lider av lignende situasjoner. Denne høye forekomsten av abnormitet høydepunkter enda-mer viktigheten av pre-inkludering screening av mus bruker mikro-CT. Naive villtype mus viste aldri noen unormale skygger på mikro-CT (figur 1A).
Som konklusjon, har vi beskrevet en fremgangsmåte som utnytter et lite dyr mikro-CT-maskin for nøyaktig deteksjon og overvåkning av utviklingen av tumorknuter i lungene til en adenocarcinoma musemodell. Avbruker den til å overvåke endringer i knuter over tid, kan mer nøyaktige data samles inn, og en kostnads- og tidseffektiv tidsforløp kan tilpasses.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av en Grant-in-Aid fra JSP KAKENHI for AEH (Grant Number 25461196) og TB (Grant tall 23390218 og 15H04833) og National Institutes of Health stipend HL111190 (DMO). Forfatterne ønsker å takke Miyuki Yamamoto for sin innsats i å hjelpe med dyr genotyping og utarbeidelse av histologiske snitt. Vi er takknemlige for forskningssamarbeid Resources, School of Medicine, Keio-universitetet for teknisk support og reagenser.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| micro-X-ray–computed tomography | Rigaku | R_mCT2 | |
| NanoZoomer RS Digital Pathology System | Hamamatsu | RS C10730 | |
| NDP.view2 Viewing software | Hamamatsu | U12388-01 | http://www.hamamatsu.com/jp/en/U12388-01.html |
| Isoflurane Vaporizer - Funnel-Fill | VETEQUIP | 911103 | |
| Induction chamber, 2 L W9.5 × D23 × H9.5 | VETEQUIP | 941444 | |
| Isoflurane | Mylan | ES2303-01 | |
| AZD 4547 | LC Labratories | A-1088 | |
| Pentobarbital | Kyoritsu | SOM02-YA1312 | |
| G24 cannula | Terumo | SP-FS2419 | |
| Paraformaldehyde | Wako | 163-20145 | |
| Microtome | Leica | RM2265 | |
| Doxycycline | SLC Japan/PMI Nutrition International | 5TP7 | |
| ImageJ software | National Institute of health | http://imagej.nih.gov/ij/ | |
| Puralube vet ointment (Occular lubricant) | Dechra | NDC 17033-211-38 |
References
- Ferlay, J., et al. Cancer incidence and mortality worldwide: sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012. Int. J. Cancer. 136, 359-386 (2015).
- Mak, I. W., Evaniew, N., Ghert, M. Lost in translation: animal models and clinical trials in cancer treatment. Am. J. Transl. Res. 15, 114-118 (2014).
- Chen, Z., Fillmore, C. M., Hammerman, P. S., Kim, C. F., Wong, K. K. Non-small-cell lung cancers: a heterogeneous set of diseases. Nat. Rev. Cancer. 14, 535-546 (2014).
- Kwon, M. C., Berns, A. Mouse models for lung cancer. Mol. Oncol. 7, 165-177 (2013).
- Malkinson, A. M. The genetic basis of susceptibility to lung tumors in mice. Toxicology. 54, 241-271 (1989).
- Yin, Y., Betsuyaku, T., Garbow, J. R., Miao, J., Govindan, R., Ornitz, D. M. Rapid induction of lung adenocarcinoma by fibroblast growth factor 9 signaling through FGF receptor 3. Cancer Res. 73, 5730-5741 (2013).
- Arai, D., et al. Characterization of the cell of origin and propagation potential of the fibroblast growth factor 9-induced mouse model of lung adenocarcinoma. J. Pathol. 235, 593-605 (2015).
- Paraffin processing of tissue. , Available from: http://protocolsonline.com/histology/sample-preparation/paraffin-processing-of-tissue/ (2012).
- Curtis, S. J., et al. Primary tumor genotype is an important determinant in identification of lung cancer propagating cells. Cell Stem Cell. 7, 127-133 (2010).
- Lau, A. N., et al. Tumor-propagating cells and Yap/Taz activity contribute to lung tumor progression and metastasis. EMBO J. 33, 468-481 (2014).
- Santos, A. M., Jung, J., Aziz, N., Kissil, J. L., Puré, E. Targeting fibroblast activation protein inhibits tumor stromagenesis and growth in mice. J Clin Invest. 119, 3613-3625 (2009).
- Zinn, K. R., et al. Noninvasive Bioluminescence Imaging in Small Animals. ILAR J. 49, 103-115 (2008).
- Yao, R., Lecomte, R., Crawford, E. S. Small-Animal PET: What Is It, and Why Do We Need It. J Nucl Med Technol. 40, 157-165 (2012).
- Haruyama, N., Cho, A., Kulkarni, A. B. Overview: Engineering transgenic constructs and mice. Curr Protoc Cell Biol. , Chapter 19, Unit 19.10 (2009).
