Introduction
Рак легких является ведущей причиной смерти от рака во всем мире 1. Исследования в области профилактики, раннего выявления и лечения рака легких продолжается во многих научно - исследовательских центров по всему миру 2,3. Существует несколько моделей на животных для рака легких были разработаны, и они оказались полезными при изучении механизмов канцерогенеза легких и клетки происхождения, при определении наличия раковых стволовых клеток, а также при исследовании различных новых терапевтических стратегий 4. Более ранние модели полагались на инициации опухоли канцероген-индуцированных у чувствительных штаммов мышей 5. Развитие нокаута и трансгенных мышах , в которых рак легких возникает в результате специально манипулируют генетических поражений значительно улучшили способность контролировать индукции опухолей и мимических несколько аспектов рака легкого человека 4. Тем не менее, основной проблемой в использовании моделей рака легких животных является отсутствие метода в режиме реального времени, чтобыточно идентифицировать и контролировать возникновение и развитие опухолей в легких мышей и документировать любые последующие изменения в их размерах, например, их дальнейшего роста или сокращения в ответ на лечение. Это заставило исследователей прибегать к нескольким времени, усилий и ресурсоемких методов для выявления опухолей и оценивать их результаты эксперимента. Наличие присущего вариации между мыши в ответ на индукцию опухолей требует использования большого количества животных в каждой экспериментальной группе для уменьшения изменчивости данных. Неспособность оценить рост опухоли или ответ на лечение в режиме реального времени вынуждает исследователей слепо усыпить мышей в нескольких временных точках длительных экспериментальных протоколов, чтобы гарантировать, что они будут собирать нужные данные, в результате чего трата ресурсов из образцов собранные в моменты времени, которые либо слишком рано или слишком поздно.
В настоящем исследовании, метод эксплуатировать малых животных микро-сomputed томография (микро-КТ) сканер для обнаружения и последующей опухолей легких у живых мышей вводят. Мы использовали недавно описал Sftpc-rtTA и Tre-FGF9-IRES-EGFP дважды трансгенная (DT) мышей , которые быстро развиваться аденокарциномы легких после индукции с доксициклин 6,7. Использование микро-КТ позволяет (помимо прочего) исключают мышей с аномальным аномалиями легких перед индукцией, подтверждают развитие опухолевых узелков в легких после индукции, и наблюдать изменения в опухолевых узелков в ответ на экспериментальных методов лечения. Конечная точка эвтаназию мышей и гистологической оценки подтвердили точность оценки в реальном масштабе времени, проведенного с микро-КТ. Мы считаем, что эта техника будет проложить путь для проведения более спланированных экспериментов с использованием животных моделей рака легких при сохранении ценных ресурсов, сокращение времени наблюдения и повышения точности и понимания результатов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Эксперименты на животных были одобрены Institutional Animal Care и использование комитета Кейо университета им.
Примечание: В данном исследовании мы использовали Sftpc-rtTA и Тре-Fgf9-IRES-EGFP DT мышей , в которых аденокарциномы легких развивается быстро после индукции путем подачи чау , содержащий доксициклин 6,7. Тем не менее, все процедуры оценки могут быть применены к другим мышиных моделях рака легких.
1. Эксперимент Схема:
- Определение состояния легких при базовой линии:
- До индукции опухоли, когда мыши DT 8 - 12 недель, выполняют первый микро-КТ (см разделы 2 и 3 ниже). Это служит в качестве легкого базового сканирования, подтверждает отсутствие спонтанно развитых узелков, вызванных дырявое трансгена, и документировать отсутствие какой-либо существующей легочной патологии до индукции опухоли.
- Инициировать индукции опухоли:
- Включите мышей DT из регулярного чвл чтобы доксициклина чау , чтобы вызвать фактор роста фибробластов (FGF экспрессию) 9 в альвеолярных клетках и инициировать развитие опухоли. Дайте доксициклин чау (200 частей на миллион) вволю.
- Подтвердите развитие опухолевых узелков в легких мышей:
- Выполните микро-КТ для выявления развитие опухолевых узелков по сравнению с предварительно индукционной сканирования.
- Оценка ответа на лечение:
- Для того, чтобы проверить способность микро-КТ для обнаружения изменений в опухолевых узелков в ответ на лечение, администрировать FGF рецептора (FGFR) ингибитор AZD4547, а затем выполнить дополнительные сканирования микро-КТ через 5 и 10 недель.
- Оценка конечной точки:
- Эвтаназии все лечение и контрольных мышей и тканей для гистологического процесса оценки (смотри раздел 6 ниже).
2. Подготовка Мыши для Micro-CT Image Acquisition:
- Включите сканер микро-КТ и компьютер.
- ClicK на программное обеспечение под названием "R_m СТ2", а затем нажмите на кнопку "разогреть".
- Удалите слой образца, на котором мышь будет помещен из камеры микро-КТ. Оберните кровать с полиэтиленовой пленкой.
- Установите индукционный поле анестезии путем добавления изофлуран к анестезии испарителем до отмеченного уровня. Установите скорость потока изофлуран на 3 л / мин.
- Открыть кислородный баллон, чтобы начать подачу кислорода в индукционную коробку и установить скорость потока в 1 л / мин.
- Поместите мышь в анестезию индукции коробки и убедитесь, что он глубоко наркозом отсутствием спонтанного движения, а также в ответ на пинч кожи (мягкий щепотка небольшой складки кожи, которая не вызывает повреждения тканей или разрыв кожи).
- Нанести глазную смазку, чтобы предотвратить сухость роговицы во время анестезии.
- Откройте камеру микро-КТ и поместите мышь с спинной стороной вверх на кровати образца. Держите голову мыши и потянуть тело вниз от нижних конечностей в Ordeг, чтобы растянуть и выпрямить тело симметрично.
- Выключите поток анестезии индукции коробки и включите его к трубе, которая подключается к камере микро-КТ.
- Поместите анестезию трубку в нос мыши, чтобы управлять непрерывной анестетик.
- Для того чтобы исправить мышь в нужном положении; обернуть мышь и кровать образца с полиэтиленовой пленкой.
Примечание: Очень важно, чтобы держать мышь под глубоким наркозом и завернутые в слой образца, потому что любое незначительное движение или поворот его тела во время сканирования приведет к туманных образов и трудности в интерпретации. - Закройте микро-КТ камеру.
- Настройте систему микро-КТ до 90 кВ и 160 мкА и время сканирования до 4,5 мин. Установите диапазон изображения до 24 × 19 мм, а размер воксела до 50 × 50 × 50 мкм. Используйте для синхронного режима сердечных сокращений.
- Создайте новую папку в "базу данных", чтобы сохранить новые изображения в этой папке.
- Запустите сканирование.
- После завершения сканирования, переместите мышь в пустую клетку и наблюдать его, пока он не приходит в сознание. Не ставьте его с другими мышами, пока она полностью не оправилась от последствий анестезии.
3. Предварительно индукционные Micro-CT Изображение Визуализация и анализ:
- Для визуализации изображения микро-КТ, скачать бесплатное программное обеспечение ImageJ со следующего веб - сайта: http://imagej.nih.gov/ij/~~HEAD=pobj . Примечание: Каждый микро-КТ файл данных представляет собой стек примерно 500 TIF Files (.tif). Другое программное обеспечение для просмотра изображений также может быть использован.
- Открыть серийные микро-CT файлы изображений и прокрутить все изображения каждой мыши от шеи до живота или наоборот.
- С помощью сканирования наивных мышей дикого типа, определить плотность различных областей и нормальных анатомических структур в грудной клетке , основанной на знании анатомии мыши (см рисунок 1А).
- Удерживайте курсор скомпьютерной мыши и прокрутки вверх, начиная с беловатым брюшной полости и диафрагмы, через грудь и до шеи.
- Определить костные ориентиры грудной клетки в обойме (грудины в передней части, позвонки в спине и ребрах по бокам).
- Определить сердце в передней части грудной клетки и крупных кровеносных сосудов около сердца и средостения.
- Соблюдайте трахеи просвет (как небольшой темный круг на уровне шеи и верхней части грудной клетки), которая разветвляется на правую и левую главные бронхи затем продолжают ветвиться на все более мелкие бронхи. Обратите внимание , что каждый бронх тесно связан с двумя или тремя кровеносных сосудов (Рис . 1А)
- Начните изучение сканы ООН-индуцированных мышей DT и определить наличие каких-либо отклонений.
- Исключение мышей с аномальными предварительно индукционных тени легких (например, узелки, эмфизематозная волдыри и т.д.) от каких - либо дальнейших экспериментов. (Рисунок 1С-Е, G, Н
4. Опухоль Индукционная:
- Для того, чтобы вызвать развитие опухоли у экспериментальных мышей, которые показали нормальные сканирование легких, включите их питание от обычного чау, доксициклина, содержащей чау (200 частей на миллион).
5. Последующее сканирование:
- Через 10 недель, выполняют второй микро-КТ всех мышей , чтобы подтвердить развитие опухолевых узелков в легких (см рисунок 2).
- Разделить мышей на две группы. Администрирование FGFR блокатор AZD4547 (125 мкг / кг / день через желудочный зонд в течение 6 дней / неделю в течение 10 недель) до одной и группе плацебо к другой контрольной группе в течение более 10 недель.
- Последующие изменения в узелковых теней, выполняя третье сканирование 4 - 5 недель спустя.
- В конце 10 недель лечения, выполнить четвертое сканирование.
- Эвтаназии всех мышей с CO 2 ингаляции или с внутрибрюшинной инъекции 0,1 мг / 200 мкл фенобарбитала.
- копределить динамические изменения в опухолевых узелков после индукции и в ответ на лечение, определить аналогичные позиции в последовательных изображений сканирования одного и того же мыши на двух или более различных временных точках а затем проверить для появления / исчезновения каких - либо аномальных теней (рис 3 ).
- Для облегчения идентификации той же плоскости, в той же мыши в разных временных точках, пытаются связать плоскость интерес с анатомическими знаковые структуры внутри грудной клетки мыши.
- Используйте такие достопримечательности, как трахея, ее развилки, правого и левого главных бронхов, аорты, диафрагмы и крупных кровеносных сосудов.
Примечание: кости грудной клетки, в том числе грудных позвонков, ребер и грудины менее полезны в качестве ориентиров позиционирования из-за незначительных общих наклонов в мыши выравнивания тела на кровати образца, что увеличивает вероятность неправильного толкования позиции сканирования. Кроме того, изображение серийный номер в файле сканирования ненадежна для identifyinг то же положение с течением времени из-за изменения длины тела мыши из одной временной точки в другую. Отказ или неточность в определении той же плоскости в различные моменты времени может привести к ложным положительным / отрицательным результатом интерпретации результатов.
- Используйте такие достопримечательности, как трахея, ее развилки, правого и левого главных бронхов, аорты, диафрагмы и крупных кровеносных сосудов.
6. Мышь Эвтаназия и легких Коллекция:
- Эвтаназии мышей с СО 2 ингаляции или с внутрибрюшинном введении 0,1 мг / 200 мкл фенобарбиталом.
- Выставляют брюшной полости путем разрезания в продольном направлении через брюшную стенку. Кровотечение мышь, чтобы уменьшить объем крови в легких путем рассечения брюшной аорты.
- Щелевой диафрагмы с тонкими ножницами; это приведет к потере отрицательного давления из полости грудной клетки, таким образом, разрушаются легкие. Expose легкие и сердце, сокращаясь и удаления частей ребер передней стенки грудной клетки. Очистите фронтальную часть шеи путем разрезания кожи и мягких тканей подвергать tracheа.
- Срежьте сердца и вилочковой железы. Вставьте щипцов позади трахеи, чтобы отделить его от пищевода.
- Трахею иглу с G24 канюлю затем закрепите его на месте путем затягивания нити вокруг вставленной детали.
- Надуть и зафиксировать с помощью легкого ледяным 4% параформальдегида (PFA) через трахеи канюли, используя колонку 25 см. Отделить канюлю и затяните нить, чтобы предотвратить утечку PFA затем разрезают верхнюю трахею от его прикрепления к гортани.
- Потянуть трахею от шовного нити и рассекают его от крепления, и по- прежнему вниз , чтобы снять его с легких эн -блоком. Вставьте ее в 15 мл пробирку, содержащую 5 мл 4% PFA. Оставьте легкие в PFA O / N , чтобы обеспечить полное проникновение ткани и фиксации, а затем обработать ткань в стандартный блок парафина 8.
- Вырезать парафиновые блоки на 6 мкм толщиной срезов на микротома и красителем гематоксилином и эозином с использованием стандартных методик. 7. Гистологическое Оценка:
- Включите прибор сканера слайдов и компьютер.
- Нажмите на программное обеспечение "NDP сканирования".
- Выберите режим сканирования "Пакетная слайдов" и "полуавтоматический режим" для сканирования серию слайдов.
Примечание: Манипулятор, который подбирает слайдов во время последовательного сканирования очень чувствительны к любым неровности по краям стеклянных слайдах. - Пропальпируйте края всех стеклах перед их загрузкой в машину. Если есть выпячивание покровного стекла или сушеный гистологическая среда, очистите его с резаком или скальпелем.
- Загрузите слайды в слайд-кассеты. Откройте образец люк и вставьте кассету в положение "один";. Закрой дверь.
- На компьютерном программном обеспечении, дают короткие описательные имена ко всем слайдам в их соответствующем положении в кассете затем нажмите кнопку "OK".
- Выберите режим профиля: "Светлое".
- Нажмите на кнопку "Start Batch", чтобы начать предварительную проверку.
Примечание: После того, как машина закончит сканирование всех слайдов, программное обеспечение будет автоматически обнаруживать участки с тканями на всех слайдах и предложить его в качестве области, представляющей интерес. - В случае необходимости, пересмотреть интересующую область, удерживая левую кнопку мыши и потянув за границу региона.
Примечание: Определение чрезмерно большие участки слайдах как области интереса приведет к гораздо больше времени сканирования. - После того, как удовлетворены с регионами интересов на всех слайдов, нажмите на кнопку "Scan", чтобы начать сканирование всех слайдов.
Примечание: Отсканированные файлы можно наблюдать в цифровом виде в странах с низким и высоким разрешением, и изображения могут быть экспортированы в JPEGфайлы.
Примечание: Хотя использование "слайд-сканера" для цифровой гистологической оценки описано здесь, использование регулярных микроскопов и визуальной гистологической оценки для оценки также возможно.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Идентификация мышей с аномалиями легких проводили на исходном уровне. Перед индукцией опухоли, когда мыши DT было 8 - 12-недельного возраста, легкие всех мышей сканировали с микро-КТ. Удивительно, но примерно 50% мышей показали отклонения, которые заставили нас считать их непригодными для включения в последующем исследовании. Эти нарушения были конкреций , как тени, большие одиночные или множественные маленький эмфизематозная буллы и / или долевой ателектаз (рис 1A, C, DE, GH). Затем FGF9 трансгенов и опухоли индукции был activated.Only мышей , которые показали нормальные сканирование легких (без отклонений) были переведены из обычного чау - чау к доксициклина , чтобы вызвать экспрессию FGF9 в альвеолярных клетках и развития последующей опухоли. Для того, чтобы подтвердить развитие опухолевых узелков в легких мышей после десяти недель от начала индукции опухоли, следить за микро-КТ были выполнены. Они показали дАЗВИТИЕ множественные узелки переменных размеров у всех мышей (рисунок 2, сравнить А к В и D до Е). Сканирование Micro-CT были проведены для оценки ответа на лечение. Они показали , что у мышей , которым вводили ингибитор FGFR AZD4547 в течение 10 недель действительно экспонируемых исчезновение или уменьшение размеров узелков , которые были видны в сканирований предварительной обработки (рисунок 3, сравнить заранее, после индукции и последующей обработки, AC , EG и IK). С другой стороны, у контрольных мышей , которые не получали ингибитор FGFR и были даны плацебо вместо того, чтобы не показали никаких изменений, увеличение размера узелков и появления новых узелков (рисунок 3, МО); подтверждая, что уменьшение размеров наблюдается в группе лечения является подлинным эффект терапевтического вмешательства.
(рис 1B, F, I). Мыши после 10 - 12 недель индукции с доксициклина: наблюдались множественные аденокарциномы узелки с переменными размерами и позициями во всех животных (рис 2С, F). Мыши после 10 - 12 недель индукции доксициклина с последующим 10 - 12 недель с FGFR блокатора: Узелки были намного меньше по количеству и меньше (рис 3D, H, L) по сравнению с наблюдаемым после индукции. Мыши после 10 - 12 недель индукции доксициклина с последующим 10 - 12 недель плацебо: Несколько больших узелки видны (рис 3P) похоже на эти видели в момент времени после индукции.
Рисунок 1. Микро-КТ Идентифицирует Предварительно индукционный легочные заболевания. У всех мышей были изучены с помощью микро-КТ до начала индукции доксициклина. Когда были обнаружены аномалии легких мышей умерщвляли для гистологического подтверждения. Типичные изображения микро-КТ для (А) нормального легкого (C) легкие с ателектазированных области; (DE) легкие с эмфизематозного волдыри и (GH) легких с аномальным шаровидным тени. Гистологическая оценка подтвердила достоверность результатов микро-КТ: (B) нормально гистологии легких; (F) множество Эмфизематозный областей; и I) множественные узелки опухоли. Шкала бар: 200 мкм.53904fig1large.jpg "целевых =" _blank "> Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 2. Micro-CT Определяет развитие опухолевых конкреций после индукции. Мыши , которые показали чистую предварительно индукцию сканирования подавали доксициклин чау в течение 10 недель , после чего повторно оценивали с микро-КТ, после чего они были подвергнуты эвтаназии для гистологической оценки. Представитель микро-КТ сканировать изображения из двух разных мышей показывают появление множественных узелковых теней 10 недель после начала доксициклин чау. (A, D) Pre-индукционная чистый легких, (B, E) в тот же позиции сканирования изображения , показывающие развитие множественные узелки (красные стрелки). Маленькие желтые стрелки указывают на анатомических ориентиров , используемых для идентификации и ту же позицию в разные моменты времени. (C, F) узелки видели в микро-КТ были грonfirmed в секциях гистологических легких. Шкала бар:. 200 мкм Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 3. Micro-CT находящий изменения в опухолевых конкреций в ответ на лечение. Мыши , которые показали чистые предварительно индукционные сканирование подавали доксициклин чау в течение 10 недель, а затем была выполнена после индукции микро-КТ. Затем они вводили FGFR ингибитор AZD4547 в течение более 10 недель и повторно оценивали с микро-КТ (после лечения). Контрольным мышам вводили плацебо вместо ингибитора FGFR, чтобы уточнить фактический эффект терапевтического вмешательства. И, наконец, мышей умерщвляли для гистологической оценки.
Представитель микро-КТ сканирования изображений из четырех различных мышей. (A, E, I, M) (В, F, J, N) , сканы из тех же самых мышей после того, как они индуцировали доксициклина Chow в течение 10 недель. все показали множественные узелки (красные стрелки, красная овальная огибает область , которая была полностью затененное узелков). (C, G, K) сканы из тех же мышей после дополнительных 10 недель лечения с ингибитором FGFR показывает полное исчезновение или заметное снижение размеров узелков. (O) Сканирование с помощью контрольной мыши , чтобы представлять контрольную группу , которая была вводили плацебо вместо FGFR ингибитора , показывающий увеличение размера и количества опухолевых узлов. Маленькие желтые стрелки указывают на анатомических ориентиров , используемых для идентификации и ту же позицию в различные моменты времени. (D, H, L) Гистологические срезы подтвердили значительное уменьшение размера узелков и числа (сравните рисунок 2 C и F). (Р) Показывает Пресесть множественных опухолевых узлов, когда плацебо вводили. Шкала бар:. 200 мкм Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Микро-КТ на основе метода, описанного здесь, для идентификации в реальном времени аномалий легких и мониторинга развития опухолевых узелков и реакции на лечение в моделях рака легких животных позволит ученым, которые проводят связанных с раком эксперименты легких планировать более точные и эффективные эксперименты, экономя время и ресурсы. Ранее мы использовали МРТ для той же цели 6. Четкость сканирования и пороговое значение для обнаружения узелков легких с МРТ были хуже тех , с микро-КТ , описанных в данном исследовании 6.
Предыдущие исследования , которые использовали аналогичные модели аденокарциномы легких мышей (с различными генетическими фонами и методами индукции опухоли) , очевидно , имел ряд недостатков , которые можно было бы избежать или улучшенные , если бы они использовали микро-КТ 9,10. У них не было никаких средств для выявления каких-либо предварительных индукционные аномалии легких или узелки, тем самым рискуя не оправдавих результаты путем включения непригодных животных. Они также не имели средств, чтобы подтвердить развитие опухолей после индукции или после размножения раковых клеток в организм мышей дикого типа (чтобы вызвать вторичные опухоли), поэтому им пришлось ждать в течение 4-8 месяцев, после чего слепо усыпить мышей для гистологического идентификации опухоли. Когда эти модели были использованы для оценки терапевтического потенциала препарата, исследователи должны были выделить несколько групп, чтобы быть умерщвлены в хронологической последовательности, чтобы обнаружить эффект лечения на опухолевые узелки с гистологии и быть в состоянии определить момент времени максимального эффекта 11.
Одним из ограничений нашего метода, однако, является появление туманной теней, мешающих обнаружение узелков в легких , когда некоторые посторонние вещества вводили внутритрахеально 7 (данные не показаны). Некоторые мыши, казалось, развивать длительную воспалительную реакцию на впрыскиваемого вещества и тени этого Reactiна и сопутствующая интерстициальный отек в масках существующих узелки. В таких случаях МРТ можно попробовать в качестве альтернативы.
В последнее время другие методы визуализации были введены для оценки различных патологий у мелких животных; как биолюминесценции изображений 12 и позитронно - эмиссионной томографии (ПЭТ) 13. Насколько нам известно, эти системы формирования изображений до сих пор не используется для оценки опухолей легких у мышей моделей таким образом сравнение эффективности обнаружения и четкость изображения с мелких животных МРТ и изображений микро-КТ пока не представляется возможным. Наличие и стоимость этих машин являются фактором, ограничивающим их широкое применение.
Мы обнаружили аномалии легких примерно у 50% мышей при предварительной индукции скрининга и, соответственно, эти мыши были исключены из дальнейших экспериментов. Эта высокая частота аномалий может быть результатом "дырявое" FGF9 трансгена у некоторых животных, что приводит к развитию опухоли узелкаS еще до того, они индуцируются 14. Действительно, примерно половина из исключенных животных при гистологическое исследование показало наличие множественных мелких узелков. Они также могут быть вызваны аномальным действием введенного трансгена на соседних генов в геноме мыши 14. Развитие этих рода аномалий не являются ни в коем случае специфичные для Sftpc-rtTA и Tre-FGF9-IRES-EGFP дважды трансгенных мышей и , таким образом , другие модели рака легких может страдать от подобных ситуаций. Это высокий уровень ненормальности подчеркивает даже более-важность предварительного включения скрининга мышей с использованием микро-КТ. Наивные мышей дикого типа никогда не показывал никаких аномальных тени на микро-КТ (рис 1А).
В заключение, мы описали метод, который использует небольшое животное микро-КТ машины для точного обнаружения и мониторинга развития опухолевых узелков в легких модели аденокарциномы мыши. Отиспользуя его для мониторинга изменений в узелки с течением времени, более точные данные могут быть собраны, а затраты времени и эффективное время курс может быть адаптирован.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Эта работа была поддержана грантом-в-помощь от JSPS KAKENHI для AEH (грант номер 25461196) и ТБ (грант Числа 23390218 и 15H04833) и Национальных институтов здравоохранения гранта HL111190 (ДМО). Авторы хотели бы выразить благодарность Миюки Ямамото за ее усилия в оказании помощи с животным генотипирования и подготовки гистологических срезов. Мы благодарны Collaborative Research Resources, Школа Медицины, Университет Кейо для получения технической поддержки и реагентов.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| micro-X-ray–computed tomography | Rigaku | R_mCT2 | |
| NanoZoomer RS Digital Pathology System | Hamamatsu | RS C10730 | |
| NDP.view2 Viewing software | Hamamatsu | U12388-01 | http://www.hamamatsu.com/jp/en/U12388-01.html |
| Isoflurane Vaporizer - Funnel-Fill | VETEQUIP | 911103 | |
| Induction chamber, 2 L W9.5 × D23 × H9.5 | VETEQUIP | 941444 | |
| Isoflurane | Mylan | ES2303-01 | |
| AZD 4547 | LC Labratories | A-1088 | |
| Pentobarbital | Kyoritsu | SOM02-YA1312 | |
| G24 cannula | Terumo | SP-FS2419 | |
| Paraformaldehyde | Wako | 163-20145 | |
| Microtome | Leica | RM2265 | |
| Doxycycline | SLC Japan/PMI Nutrition International | 5TP7 | |
| ImageJ software | National Institute of health | http://imagej.nih.gov/ij/ | |
| Puralube vet ointment (Occular lubricant) | Dechra | NDC 17033-211-38 |
References
- Ferlay, J., et al. Cancer incidence and mortality worldwide: sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012. Int. J. Cancer. 136, 359-386 (2015).
- Mak, I. W., Evaniew, N., Ghert, M. Lost in translation: animal models and clinical trials in cancer treatment. Am. J. Transl. Res. 15, 114-118 (2014).
- Chen, Z., Fillmore, C. M., Hammerman, P. S., Kim, C. F., Wong, K. K. Non-small-cell lung cancers: a heterogeneous set of diseases. Nat. Rev. Cancer. 14, 535-546 (2014).
- Kwon, M. C., Berns, A. Mouse models for lung cancer. Mol. Oncol. 7, 165-177 (2013).
- Malkinson, A. M. The genetic basis of susceptibility to lung tumors in mice. Toxicology. 54, 241-271 (1989).
- Yin, Y., Betsuyaku, T., Garbow, J. R., Miao, J., Govindan, R., Ornitz, D. M. Rapid induction of lung adenocarcinoma by fibroblast growth factor 9 signaling through FGF receptor 3. Cancer Res. 73, 5730-5741 (2013).
- Arai, D., et al. Characterization of the cell of origin and propagation potential of the fibroblast growth factor 9-induced mouse model of lung adenocarcinoma. J. Pathol. 235, 593-605 (2015).
- Paraffin processing of tissue. , Available from: http://protocolsonline.com/histology/sample-preparation/paraffin-processing-of-tissue/ (2012).
- Curtis, S. J., et al. Primary tumor genotype is an important determinant in identification of lung cancer propagating cells. Cell Stem Cell. 7, 127-133 (2010).
- Lau, A. N., et al. Tumor-propagating cells and Yap/Taz activity contribute to lung tumor progression and metastasis. EMBO J. 33, 468-481 (2014).
- Santos, A. M., Jung, J., Aziz, N., Kissil, J. L., Puré, E. Targeting fibroblast activation protein inhibits tumor stromagenesis and growth in mice. J Clin Invest. 119, 3613-3625 (2009).
- Zinn, K. R., et al. Noninvasive Bioluminescence Imaging in Small Animals. ILAR J. 49, 103-115 (2008).
- Yao, R., Lecomte, R., Crawford, E. S. Small-Animal PET: What Is It, and Why Do We Need It. J Nucl Med Technol. 40, 157-165 (2012).
- Haruyama, N., Cho, A., Kulkarni, A. B. Overview: Engineering transgenic constructs and mice. Curr Protoc Cell Biol. , Chapter 19, Unit 19.10 (2009).
