Summary
본 프로토콜은 심장 비대에 압력 과부하를 유도하기 위해 마우스에서 대동맥 밴딩의 새로운 기술을 기술한다. 밴딩에는 내경이 고정 된 고무 링이 사용됩니다. 이 새로운 기술은 향후 실험을 위해 변동을 줄이고 재현 가능한 데이터를 약속합니다.
Abstract
마우스의 대동맥 밴딩은 심장 압력 과부하로 인한 심장 비대 및 심부전 유도에 가장 일반적으로 사용되는 실험 모델 중 하나입니다. 이전에 사용 된 기술은 협착을 만들기 위해 무딘 27G 바늘 위에 묶인 대동맥 궁 주위의 나사산 봉합사를 기반으로합니다. 이 방법은 외과 의사가 수동으로 실을 조이는 것에 달려 있으므로 직경 크기의 차이가 커집니다. Melleby et al.이 설명한 새롭게 정제 된 방법은 수술 후 변동성이 적고 재현성이 높아집니다. 새로운 기술인 O-링 대동맥 밴딩(ORAB)은 실이 있는 봉합사 대신 미끄럼 방지 고무 링을 사용하여 압력 과부하의 변화를 줄이고 심장 비대의 재현 가능한 표현형을 제공합니다. 수술 중 O- 링은 상완 동맥과 왼쪽 경동맥 사이에 위치합니다. 성공적인 수축은 심 초음파로 확인됩니다. 1일 후, 링을 올바르게 배치하면 O-링으로 인한 협착에 대한 횡대동맥의 유속이 증가합니다. 2 주 후, 손상된 심장 기능은 박출률 감소 및 벽 두께 증가로 입증됩니다. 중요하게도, 직경 크기의 변동이 적을 뿐만 아니라, ORAB는 횡대동맥 수축(TAC)에 비해 수술 중 및 수술 후 사망률이 낮다는 것과 관련이 있습니다. 따라서 ORAB는 일반적으로 사용되는 TAC 수술보다 우수한 방법을 나타내며 결과적으로 재현 가능한 결과와 필요한 동물 수를 줄일 수 있습니다.
Introduction
생리적 심장 비대는 발달, 운동 및 임신 중에 관찰 될 수 있지만 병리학 적 심장 비대는 동맥 고혈압, 판막 심장 질환 또는 유전자 돌연변이와 같은 혈역학 적 스트레스 상태에 반응합니다. 처음에 심장은 심장 기능을 유지하기 위해 심근 세포 크기가 증가하고 심실 벽이 두꺼워지는 것을 특징으로하는 리모델링을 거칩니다 1,2. 반면에 병리학 적 심장 리모델링은 부정맥, 갑작스런 사망 및 높은 사망률의 위험 증가와 관련이 있습니다. 마지막으로, 시간이 지남에 따라 심실 확장, 수축 기능의 강력한 감소, 그리고 결국 높은 이환율, 사망률 및사회적 비용과 관련된 심부전(HF)으로의 진행을 초래합니다3. 따라서 새로운 치료 전략을 개발하기 위해서는 분자 배경을 이해하는 것이 시급합니다4.
대동맥 밴딩은 마우스5에서 압력 과부하 유발 좌심실 (LV) 비대 및 심부전을 모방하는 모델입니다. 이 방법을 사용하면 생체 내에서 압력 과부하 유발 심장 리모델링의 병리 메커니즘을 검사 할 수 있습니다. 마우스의 첫 번째 대동맥 밴딩 절차는 Rockman et al.6에 의해보고되었습니다. 압력 과부하는 대동맥 주위의 실 봉합 기반 결찰에 의해 유도됩니다 (상완 두개와 왼쪽 총 경동맥 사이). 0.4mm 직경의 협착을 만들기 위해 봉합사를 27G 바늘과 대동맥 주위에 놓습니다. 결찰 후 바늘을 제거합니다 6,7.
바늘 직경이 고정되어 있더라도 실의 조임은 외과 의사에 크게 의존하므로 심장 비대의 유도 표현형에 영향을 미칩니다. 또한 실/봉합사 기반 방법에서는 수술 후 협착 직경의 정도가 다양하여사망률의 높은 변동과 관련이 있습니다8,9. 또한이 방법을 훈련하는 것은 특히 나사를 조이는 데 올바른 수준과 일관성을 찾는 것과 관련하여 어렵습니다. 마지막으로, 훈련 시작시 대동맥의 파괴 또는 기타 조직 손상으로 인한 수술 중 및 수술 후 사망률이 높고 생존 동물의 협착 정도가 크게 변합니다.
최근에, 대동맥 밴딩의 최적화 된 절차가 Melleby et al.10에 의해 기술되었다. 그들은 내경이 0.71mm, 0.66mm 및 0.61mm인 고정 미끄럼 방지 고무 O-링을 사용하여 협착의 변동이 적고 압력 과부하의 재현성이 높은 ORAB(O-링 대동맥 밴딩) 방법을 제시했습니다. 요컨대, O- 링을 잘라내어 오름차순 아치 주위에 놓고 나사산으로 다시 닫습니다. 이러한 O-링을 사용하는 다른 과학자들은 유도된 심장 비대에서 더 적은 변동성을 보고했습니다9. 그들은 또한 수술 중 및 수술 후 사망률뿐만 아니라 유도 된 비대 표현형 9,11의 재현성이 향상되고 변동이 적다는 것을 관찰했습니다. 이 기사에서는 단계별 프로토콜에서이 고유 한 전략의 절차를 설명합니다. 이 보고서에서 공유 된 전문 지식은 다른 과학자들이이 분야에서 기술을 향상시키는 데 도움이 될 것입니다.
6주 후 심부전을 유발하는 심장 비대를 유도하려면 12주 된 C57BL/6N 수컷 마우스를 수술에 권장합니다. 마우스 하위 균주 C57BL/6N과 C57BL/6J 사이의 대동맥 밴딩 2주 후 비교는 C57BL/6N 마우스에서 심각한 심장 기능 장애 및 관련 사망률 증가를 보여주었습니다. 따라서 이들은 심부전 모델에 더 적합합니다12. 12 주 된 수컷과 암컷 마우스는 대동맥의 노출과 특수기구로 O- 링을 배치하기에 최적의 크기를 가지고 있습니다.
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Protocol
동물 실험은 지역 위원회(Ministerium für Energiewende, Landwirtschaft, Umwelt, Natur und Digitalisierung des Landes Schleswig-Holstein, 허가 번호: V242-21249/2020 [38-4/20])의 원칙에 따라 수행되었습니다. 본 연구에 사용된 마우스는 상업적 공급원으로부터 수득하였다( 재료 표 참조). 동물들은 12 시간 빛, 12 시간 야간 사이클을 갖는 표준 조건 하에서 유지되었다; 물과 음식은 자유롭게 제공되었습니다.
1. 동물 관리
- 침구, 둥지 재료, 은신처, 식수 및 음식에 대한 적절한 접근이있는 특수 케이지에 생쥐를 수용하십시오.
- 동물을 지속적으로 전문화 된 수의사 통제 및 치료하에 두십시오.
알림: 외부 공급 업체가 주문한 마우스의 경우 절차를 시작하기 전에 7 일의 순응을 보장하십시오.
2. O-링의 준비
알림: 0.4 주 후에 심장 비대를 유도하기 위해 고정 직경 2mm의 O- 링을 권장합니다. 유도된 심장 표현형의 범위 및 중증도는 O-링 직경의 크기에 의존한다.
- 먼저 대동맥 주위에 배치할 수 있도록 가위나 메스를 사용하여 현미경으로 O-링( 재료 표 참조)을 한 번 절단합니다(그림 1A, B).
- 8-0으로 연결된 바늘로 컷에 가까운 각 링 측면을 뚫습니다. 비 흡수성 봉합사와 실을 당깁니다. 마지막 단계에서 대동맥 주위에 O- 링을 고정하기 위해 한쪽에 2-3cm, 다른쪽에 2cm를 자르고 남겨 둡니다 (그림 1C, D).
- 수술 전에 결찰 보조제 (종 도구, 재료 표 참조)를 사용하여 수축 구멍을 통해 한쪽 링면의 실 끝 (더 오래 유지됨)을 당깁니다 (그림 1E, F). 다음 단계(6단계)에서 배치하기 위해 부착된 O-링이 있는 결찰 보조 장치를 따로 두십시오.
- 링과 실을 소독하려면 링을 알코올 용액에 30 분 동안 두십시오. 그런 다음 셀룰로오스에 놓아 건조시킵니다. 사용할 때까지 말린 링을 밀폐된 욕조나 케이스에 보관하십시오. 수술 중 결찰 보조 장치를 통해 실을 당긴 후 사용할 때까지 깨끗한 표면에 링을 놓습니다.
그림 1: 결찰을 위한 O-링 준비 수행 . (A) 직경이 고정 된 O- 링을 한쪽면에 가위 또는 메스로 자릅니다. (B) O-링의 이미지. (C) 각 O-링 측면은 8-0으로 피어싱됩니다. 프롤렌 스레드. (D) 두 개의 나사산으로 뚫린 O-링. (E) O- 링의 한 링 측면의 나사산이 결찰 보조기구의 구멍을 통해 당겨집니다. (F) 배치 전 최종 위치 : 한쪽의 나사산은 결찰 보조 장치의 구멍을 통해 배치되고 다른 쪽의 나사산은 느슨하게 유지됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
3. 마우스의 사전 투약 및 수술 분야의 준비
- 수술 중 충분한 진통제를 받으려면 수술을 진행하기 20 분 전에 진통제 부 프레 노르 핀 (0.1mg / kg, 재료 표 참조)을 복강 주사하십시오.
참고 : 본 연구에서는 진통제가 Gesellschaft für Versuchstierkunde / Society of Laboratory Animal Science (GV-SOLAS)의 권고에 따라 사용되었습니다. - 사전 투약 후, 마우스를 유도 챔버에서 100 % O 2의 0.5-1.0 L / min과 혼합 된2 % -4 % 이소 플루 란으로 마취시킨다.
- 진정 된 마우스의 왼쪽 흉부에있는 털을 면도하십시오. 면도 후 마우스를 이소 플루 란으로 채워진 챔버에 다시 넣고 동물에게 삽관하기 전에 충분한 진정 작용을 기다립니다.
알림: 진정제의 적절한 시점은 느린 호흡을 나타내지 만 스냅 호흡을 피합니다. 이소플루란 가스 설정에 따라 적절한 수준의 진정 작용을 달성하는 데 2-3분이 걸립니다. - 동물의 체온 (37 ° C)을 유지하기 위해 수술 전에 가열 패드를 켜십시오. 가열 패드를 직장 프로브( 재료 표 참조)에 연결하여 마우스의 체온을 자동으로 유지합니다.
4. 생쥐의 삽관
- 필요한 기기를 준비합니다(그림 2A). 수술 전에 후두경을 약 1-3 분 동안 알코올에 넣은 다음 밤새 건조시켜 소독하십시오.
- 가열 패드 주위에 고무 밴드를 펴서 마우스를 플레이트의 앞니에 고정합니다. 진정 된 마우스를 앙와위 자세로 가열 패드에 놓습니다.
- 동물의 앞니 위에 고무 밴드를 놓아 접시의 목을 확장합니다.
- 기관 내 삽관을위한 기관 개구부를 잘 볼 수 있도록 광원을 목구멍에 집중시킵니다 (그림 2B).
- 한 손으로 삽관 보조제(수제 후두경, 재료 표 참조)를 놓고 입을 부드럽게 벌립니다(그림 2A[3]).
- 다른 손과 작은 집게로 혀를 부드럽게 움직여 기관의 개구부를 청소하십시오.
- 이 손을 사용하여 기관 내 튜브를 기관에 도입하십시오. 반면에 삽관 보조기구를 여전히 잡고 있습니다. 삽관의 경우 22G 캐뉼러를 사용하십시오( 재료 표 참조)(그림 2A[1]).
- 3방향 스톱콕을 통해 기관내 튜브 위치를 생쥐용 인공호흡기( 재료 표 참조)에 연결하여 올바른 기관내 튜브 위치(기관내)를 확인합니다.
- 제조업체의 지침(일회 호흡량 200μL 및 호흡수 100-150회/분)에 따라 올바른 환기를 모니터링합니다(그림 2C).
- 발가락 꼬집음 반사 검사(반사 반응 없음)로 충분한 마취 깊이를 확인합니다.
- 마취 설정을 0.5-1.0 L / min 100 % O 2와 혼합 된2 % 이소 플루 란으로 돌립니다.
- 수술 중 건조를 피하기 위해 눈에 안과 연고를 바르십시오.
- 면봉을 사용하여 시중에서 판매하는 소독액으로 수술 부위를 3 번 소독하십시오 ( 재료 표 참조).
그림 2: 마우스 삽관. (A) 삽관기구 : (1) 22G IV 캐뉼러는 기관 내 튜브 (만다린 제외)로 사용됩니다. (2) 집게; (3) 수제 후두경 (나무 막대기와 테이프로 접착 된 변형 / 평평한 캐뉼러). (B) 위치 가열 패드에 삽관을 수행합니다. (C) 인공 호흡기에 연결된 삽관 된 마우스. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
5. 수술 및 링 위치 결정 준비
알림: 감염을 피하기 위해 멸균 물질과기구를 사용하십시오.
- 가위를 사용하여 xyphoid 과정과 왼쪽 겨드랑이 사이의 선 중간에 0.5-1cm 길이의 피부 절개를하십시오. 집게를 사용하여 밑에있는 갈비뼈에서 근육층을 분리하고 두 개의 견인기 (길이 5mm, 재료 표 참조)를 절개 부위에 삽입하여 흉곽을 노출시킵니다.
- 왼쪽 개흉술을 시작하려면 마이크로 스프링 가위를 사용하여 두 번째와 세 번째 갈비뼈 사이의 늑간근에 작은 절개 (~ 1-2mm)를 수행하십시오. 흉강을 열고 45° 각도의 집게로 절개 부위를 펼칩니다.
- 3 개의 흉부 견인기 (길이 1.0-2.5mm)를 절개 부위에 삽입하여 흉강을 열어 시각화를 개선합니다.
- 대동맥궁을 노출시키려면 45° 각도의 가는 팁 겸자로 흉선과 지방 조직을 들어 올려 아치에서 부드럽게 분리하십시오.
6. O- 링과 횡단 대동맥의 연결
- 한 손에 45° 각도의 집게로 대동맥궁을 노출시킵니다. 다른 한편으로는 한쪽의 나사산을 통해 결찰 보조제와 연결된 O-링을 위치시킵니다(단계 2).
- 대동맥 궁 아래의 결찰 보조 장치를 사용하여 꼬리 쪽에서 상완 두부 동맥과 왼쪽 총 경동맥 사이의 횡 대동맥의 두개골 쪽으로 실을 통과시킵니다 (그림 3A).
- 집게로 결찰 보조기구와 대동맥궁 사이의 두 실을 조심스럽게 잡습니다. 결찰 보조장치를 수축 및 제거하고 양쪽의 나사산을 당겨 아치 주위에 O-링을 부드럽게 배치합니다(그림 3B).
- 성공적으로 위치를 잡은 후 나사산과 수술 매듭으로 O- 링을 고정하십시오. 양쪽의 매듭이 열리지 않도록 추가로 매듭을 만드십시오(그림 3C).
그림 3: O-링 이식 수행. (A) 대동맥궁은 1.0-2.5mm의 3개의 견인기에 의해 노출됩니다. 한쪽 고리면의 긴 실이 모두 대동맥 아래를 통과합니다. (B) O- 링은 링을 부드럽게 밀고 나사산을 당겨 배치됩니다. (C) is O-링이 올바른 위치에 있고 하나의 두개골이 양쪽에 꼬리 실로 매듭이 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
7. 봉합 및 수술 후 회복
- 절개 부위에서 3 개의 가슴 견인기 (길이 2.5mm)를 제거하십시오.
- 필요한 경우 따뜻한 0.9 % 등장 성 염 용액으로 채워 흉부에서 잔류 공기를 제거하십시오.
- 봉합을 위해 흉부 절개를 노출하려면 두 개의 견인기 (길이 5mm)를 다시 가져 와서 피부를 옆으로 잡으십시오.
- 2 개 또는 3 개의 6-0 비 흡수성 봉합사 ( 재료 표 참조)로 흉부를 닫고 인공 호흡기의 유출을 2 초 동안 꼬집어 폐를 다시 팽창시킵니다.
- 2개의 견인기를 제거하고 3-5개의 4-0-흡수성 봉합사로 피부를 닫습니다.
- 이소플루란을 끄고 모니터합니다. 동물이자가 호흡을 시작하면 수염이 움직이고 발가락 핀치 반사가 유발되어 마우스를 발관 할 수 있습니다. 관리 장치의 열 램프 아래 마우스를 왼쪽에 놓고 완전히 깨어날 때까지 관찰하십시오.
- 충분한 의식을 회복 할 때까지 동물을 방치하지 마십시오.
알림: 수술을받은 동물은 더 나은 회복을 위해 자체 치료 장치 (케이지)를 받아야합니다. - 필요한 경우 7일 동안 식수에서 트라마돌(1mg/mL)으로, 수술 후 3일 동안 복강 주사로 부프레노르핀(0.1mg/kg, 하루 3회)으로 통증 관리를 수행합니다.
참고: 수술 후 진통제에 대한 지역 동물 윤리 위원회의 권장 사항을 따르십시오. - 매일 물병의 무게를 측정하여 약물을 확인하고 동물의 행동을 관찰하십시오.
8. 링의 성공적인 수축 및 올바른 위치 확인
- 수술 후 하루, 협착에 대한 최대 유속을 측정하여 초음파를 사용하여 협착을 확인합니다.
- 측정을 위해 초음파 시스템과 30MHz 주파수의 변환기 프로브가있는 심 초음파를 사용하십시오 ( 재료 표 참조).
- 전술 한 바와 같이, 100 % O 2의 0.5-1.0 L / min으로 1.5 % -2 % 이소 플루 란에서 마스크를 사용하여 마취를 유지하십시오.
- 마취 된 동물을 앙와위 자세로 가열 패드에 놓습니다. 가열 패드를 직장 프로브와 연결하여 체온을 37 ° C± 1 ° C로 유지하고 4 개의 마우스 발 센서를 사용하여 ECG로 심박수를 모니터링합니다 ( 재료 표 참조).
- 더 나은 시각화를 위해 탈모 크림을 사용하십시오.
- 성공적으로 수행된 ORAB는 초음파(~2,400mm/s)로 측정한 협착에 비해 유속이 증가합니다(그림 4C). 이 측정을 위해 변환기 헤드를 오른쪽 흉부에 파라스터미로 배치하여 2차원(2D) 이미징("B-모드")으로 대동맥궁의 위치를 파악합니다.
- 컬러 도플러를 사용하여 대동맥의 혈류를 시각화하고 협착증에 대한 펄스파 도플러 혈류 속도로 측정합니다.
알림: 가짜 수술 마우스(수축 없는 대조 수술)는 ~600-900mm/s의 혈류 속도를 보여줍니다. 또한 성공적인 ORAB는 마우스의 오른쪽 경동맥 (~ 150mm / s) (RC, 그림 4A)과 왼쪽 경동맥 (~ 300mm / s) LC, 그림 4B) 사이의 속도 흐름 비율을 증가시킵니다.
- 컬러 도플러를 사용하여 대동맥의 혈류를 시각화하고 협착증에 대한 펄스파 도플러 혈류 속도로 측정합니다.
- 2차원(2D) 이미징(B-모드)으로 오른쪽 및 왼쪽 동맥 경동맥을 시각화합니다. 트랜스듀서 헤드를 목의 왼쪽과 오른쪽에 45° 각도로 수평으로 놓고 펄스파 도플러를 사용하여 혈류 속도를 결정합니다.
참고: 가짜 수술 마우스에서 두 동맥의 속도 흐름은 비슷합니다.
그림 4: 경동맥의 맥파 도플러 속도 측정을 사용한 횡대동맥 결찰 확인. (A) 우측 경동맥의 대표적인 맥파 도플러 속도 신호. (B) 협착은 왼쪽보다 오른쪽 경동맥에서 더 높은 유속을 초래합니다. (C) 수축에 의해 유도 된 협착은 하행 대동맥의 유속이 2,400mm / s 이상을 초래합니다. 가짜 마우스는 600-900 mm / s의 유속을 보여줍니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
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Representative Results
일반적으로 대동맥 밴딩은 인간 대동맥 협착증을 모방하고 마우스에서 심장 비대를 유도합니다. 성공적인 절차는 심장 비대 및 심장 기능 감소 5,6에 의해 반영된 심장 조직 리모델링을 특징으로합니다.
수술 후 1 일 직후, 횡 대동맥의 O- 링 수축의 효과는 심 초음파13에 의해 생체 내에서 결정될 수 있습니다. 대동맥 협착증의 성공적인 유도는 펄스 파 도플러 초음파로 측정 된 대동맥의 협착에 대한 혈류 속도 증가로 나타납니다 (그림 4C). 또한 위에서 설명한 대로 ORAB의 기능적 마커로서 좌우 경동맥 사이의 혈류 속도 비율을 결정합니다(그림 4A,B).
0.4mm O- 링을 배치 한 지 2 주 후, 심장 비대의 성공적인 유도는 심 초음파로 결정할 수 있습니다. 2차원(2D) 시간 모션 모드(M 모드)는 심장 주기에 따라 변화하는 시각화된 심장 구조를 표시합니다. 수술 2 주 후, 이완기에서 좌심실 (LV) 후벽 (LVPW) 및 심실 중격 (IVS) 직경의 증가가 관찰 될 수 있습니다 (그림 5B). 또한, 심장 기능의 점진적인 악화는 감소 된 좌심실 박출률 (LVEF)을 측정하여 문서화 할 수 있습니다.
그림 5: 심초음파를 통한 수술 후 2주 후 유도된 심장 비대 확인 . (A) 수술 2주 후 가짜 수술 마우스의 대표적인 M-모드 이미지. (B) 이완기에서 좌심실 후벽(LVPW) 및 심실 중격(IVS) 직경이 증가한 수술 2주 후 ORAB 수술 마우스의 M 모드 영상. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
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Discussion
스레드 / 봉합사 기반 대동맥 밴딩은 마우스에서 압력 과부하 심장 비대를 유도하기 위해 수년 동안 사용되어 왔습니다. 생체 내에서 심장 리모델링 및 질병 진행의 병리 메커니즘을 조사하는 확립 된 방법입니다. 한계는 협착 정도의 상대적으로 높은 차이와 결과적으로 리모델링입니다. Melleby et al.10 에 의해 처음 기술된 최근 도입된 ORAB 기술은 고무 O-링을 사용하여 기존 방법을 최적화합니다.
이 기술의 가장 중요한 이점은 O- 링의 고정 직경으로, 협착 정도의 변동성이 적고 결과적으로 수술 후 심장 비대의 표현형이 더 재현 가능합니다. 또 다른 장점은이 방법에서 더 빠른 학습과 더 쉬운 배치입니다. 실/봉합 기반 과정을 통해 대동맥 주변에서 적절한 정도의 결찰을 찾는 데는 일반적으로 시간과 경험이 필요합니다. 대조적으로, 이것은 고정 직경 또는 O-링 때문에 O-링 접근 방식과 동일한 정도로 필요하지 않습니다.
개복 흉부 수술은 ORAB 기술에서 중요한 지점으로, 동물에게는 고통 스럽지만 O- 링 결찰에는 필요합니다. 더 나은 회복을 달성하고 무기폐의 발생을 피하기 위해서는 폐 손상을 예방하고 인공 호흡기를 통한 환기를 모니터링하는 것이 중요합니다. 실/봉합사 기반 방법의 경우 최소 침습 기술의 기회가 있습니다. 이 절차에서 조직은 대동맥 7,13 주위에 실을 놓기 위해서만 한 쌍의 집게로 퍼집니다. 그러나이 절차의 단점은 결찰로 인한 대동맥 손상 가능성입니다.
최근 Nakao et al.9 은 ORAB 접근법과 유사한 기술을보고했습니다. 소위 O- 링 유도 횡단 대동맥 수축 (OTAC)은 삽관없이 미니 입체 절제술로 수행됩니다. 본 연구와 유사하게, 결과는 높은 재현성을 보여준다. 그러나 생쥐의 흉골 절개술은 견인기로 조직을 퍼뜨리는 것보다 동물에게 더 고통스러울 수 있습니다.
독특한 ORAB 기술은 실/봉합사 기반 기술을 개선한 것입니다. O- 링의 고정 된 직경으로 협착 및 후속 심장 비대의 변동성이 낮아져보다 재현 가능한 결과를 얻을 수 있습니다. 또한, 절차 훈련에는 더 적은 수의 마우스가 필요합니다. 이 방법의 낮은 사망률은 스레드 / 봉합사 TAC 모델보다 잠재적으로 우수한 대안임을 시사합니다.
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Disclosures
저자는 공개 할 것이 없습니다.
Acknowledgments
이 작업은 Bundesministerium für Bildung und Forschung (BMBF)의 지원을 받아 L.L., N.F. 및 O.J.M. (IVOLADMT-HF; FKZ 01KC2006A).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1 x long Fixators, 6 cm | 18200-01 | ||
| 2 x Blunt Retractors, 5 mm wide | 18200-11 | ||
| 2 x Short Fixators, 3 cm | 18200-02 | ||
| 2 x fine tip 45° angled forceps | FST (fine sience tools) | 11160-10 | |
| 3 x Blunt Retractors, 2.5 mm wide | 18200-10 | ||
| 3 x Retractor Wires | 18200-05 | ||
| 4-0 absorbable suture (Vicryl) | ETHICON | SABBKLT0 | Used to suture skin |
| 6-0 suture (Prolene), needle size:13 mm | ETHICON | JDP879 | Used to suture chest muscle |
| 8-0 suture (Prolene), needle size: 6.5 mm | ETHICON | RHBECH | Used to fast the Ring |
| Anesthetizing Box, Small | Havard apparatus | 50-0108 | |
| C57BL/6N mice | Charles River | ||
| Fluosorber Activated Charcoal Filter Canister | Havard apparatus | 34-0415 | Used to induce and maintain anesthesia |
| Handmade laryngsopcope | Intubationshelp | ||
| Harvard Apparatus Anesthetic Vaporizer | Havard apparatus | Used to induce and maintain anesthesia | |
| Heating pad + rectal probe (LSI Letica Scientific Instruments:Temperature control unit HB 101/2 ) | Panlab/ Havard apparatus | Used to control and maintain body temperature | |
| i.v. cannula blue 22-gauge (Vasofix Braunüle 0.9 x 25 mm) | B/Braunsharing Expertise | 4268091B | intubation |
| isofluran | Baxter | Anesthesia | |
| Kodan (betadine solution) | Schülke | 20003960-A | Desinfection |
| ligation aid | FST (fine sience tools) | 18062-12 | Used to perform liagtion with O-ring |
| Microscope Lighting: Schott VisiLED Set MC1500/S80-55 (+ controller) | SCHOTT | Ligth | |
| Microscope camera (Leica IC80 HD) | Leica | Used for visualiation operating field | |
| MiniVac Complete Anesthesia Systems for small rodents | Havard apparatus | 75-0233 | Used to induce and maintain anesthesia |
| Mouse Ventilator MiniVent Type 845 | Havard Apparatus | 73-0044 | Used to ventilation during surgery |
| Needle holder | FST (fine sience tools) | TE-10804 | |
| O-ring, non-slip rubber (0.0018 mm x 0.020 mm) | Apple Rubber Products | Liagtion of the aortic arch | |
| Scissors | FST (fine sience tools) | 14040-09 | Used to cut the skin and threads |
| Small Animal Retraction System (Kit for Animals up to 200 g) | FST (fine sience tools) | 18200-20 | |
| Small Base Plate, 20 x 30 cm | 18200-03 | ||
| Table intgerated with heating pad + rectal probe + ECG and transducer tripod | FujiFilm Visual Sonics Imaging System | Echocardiography | |
| Temgesic (Buprenorphin) | Indivior UK Limited | 997.00.00 | Pain pre-medication |
| three-way stop cock (blue) | |||
| Tramal (Tamadol) | Grünental | Pain post-medication | |
| transducer probe MS400 (Visual Sonics) | FujiFilm Visual Sonics Imaging System | Echocardiography | |
| Ultrasound system with cardioligy package | FujiFilm Visual Sonics Imaging System | Echocardiography | |
| Vannas Spring Scissors - 2.5 mm Cutting Edge | FST (fine sience tools) | 15000-08 | Used to cut intercostal chest muscle |
| vet ointment | Bepanten | Used to prevent eyes from drying out |
References
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