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Test très sensible pour la mesure de l'attachement arénavirus-cell
Test très sensible pour la mesure de l'attachement arénavirus-cell
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JoVE Journal Immunology and Infection
Highly Sensitive Assay for Measurement of Arenavirus-cell Attachment

Test très sensible pour la mesure de l'attachement arénavirus-cell

Full Text
10,141 Views
08:34 min
March 2, 2016

DOI: 10.3791/53682-v

Joseph P. Klaus1, Jason Botten1,2

1Department of Medicine, Division of Immunobiology,University of Vermont, 2Department of Microbiology & Molecular Genetics,University of Vermont

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol outlines a quantitative method for measuring arenavirus particle attachment to host cells using a highly sensitive qRT-PCR-based assay. The technique can also be adapted to study virion endocytosis and genome release into the cytoplasm.

Key Study Components

Area of Science

  • Virology
  • Cell Biology
  • Molecular Biology

Background

  • Arenaviruses are a group of viruses that can cause significant diseases in humans.
  • Understanding the attachment of viral particles to host cells is crucial for developing antiviral strategies.
  • Current methods for detecting viral attachment lack the sensitivity needed for detailed studies.
  • This protocol provides a solution with its ultrasensitive detection capabilities.

Purpose of Study

  • To quantitatively measure the attachment of arenavirus particles to host cells.
  • To enhance the sensitivity of detection methods for viral attachment.
  • To provide a foundation for further studies on viral entry mechanisms.

Methods Used

  • Preparation of complete DMEM with fetal bovine serum and antibiotics.
  • Seeding of Vero E6 cells in a 48-well tissue culture plate.
  • Incubation of cells under controlled conditions to promote attachment.
  • Utilization of qRT-PCR for the detection of viral attachment events.

Main Results

  • The protocol successfully quantifies arenavirus attachment to host cells.
  • High sensitivity allows for the detection of low levels of viral particles.
  • Adaptability of the method for studying endocytosis and genome release.
  • Results contribute to a better understanding of arenavirus biology.

Conclusions

  • This method provides a reliable approach for studying arenavirus attachment.
  • High sensitivity is a significant advantage over existing techniques.
  • Future research can build on this foundation to explore viral entry mechanisms.

Frequently Asked Questions

What is the primary goal of this protocol?
The primary goal is to quantitatively measure arenavirus particle attachment to host cells.
How does this method improve sensitivity?
It utilizes a qRT-PCR-based assay that allows for ultrasensitive detection of viral attachment events.
Can this protocol be adapted for other studies?
Yes, it can be adapted to measure virion endocytosis and genome release into the cytoplasm.
What cell line is used in this protocol?
Vero E6 cells are used for the attachment assays.
What are the incubation conditions for the cells?
Cells are incubated at 37 degrees Celsius with 5% carbon dioxide for 10 to 18 hours.

La première étape du cycle de vie du rénavirus est la fixation des particules virales aux cellules hôtes. Nous rapportons un test quantitatif basé sur la (q)RT-PCR pour la détection ultrasensible et la quantification des événements de fixation de l’arénavirus.

L’objectif global de ce protocole est de mesurer quantitativement l’attachement des particules d’arénavirus aux cellules hôtes. Le principal avantage de cette technique est sa grande sensibilité. Il peut également être adapté pour mesurer l’endocytose du virion, ainsi que la libération du génome dans le cytoplasme après la fusion.

Pour commencer, pour faire du DMEM complet, dans une bouteille de 500 millilitres de DMEM, ajoutez 50 millilitres de sérum bovin fœtal inactivé par la chaleur, et cinq millilitres chacun de 100 fois de pénicilline-streptomycine et 100 fois plus de tampon HEPES. À la fin de la journée, ensemencez 2,5 fois 10 à la 4e cellule Vero E6 par puits, en trois exemplaires pour chaque virus, dans une plaque de culture tissulaire de 48 puits dans un volume final de 500 microlitres de DMEM complet. Incuber la plaque à 37 degrés Celsius dans un incubateur humidifié avec 5 % de dioxyde de carbone pendant 10 à 18 heures.

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Immunologie numéro 109 arénavirus le virus Junin le virus de la chorioméningite lymphocytaire l'attachement virus-cellule liaison virus-cellule l'attachement du virion la fixation des particules virales RT-PCR quantitative faible MOI haute sensibilité l'entrée du virus

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