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Préparation de rAAV9 à surexpriment ou Knockdown gènes dans les coeurs de souris
Préparation de rAAV9 à surexpriment ou Knockdown gènes dans les coeurs de souris
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Genetics
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JoVE Journal Genetics
Preparation of rAAV9 to Overexpress or Knockdown Genes in Mouse Hearts

Préparation de rAAV9 à surexpriment ou Knockdown gènes dans les coeurs de souris

Full Text
13,448 Views
11:11 min
December 17, 2016

DOI: 10.3791/54787-v

Jian Ding1,2, Zhi-Qiang Lin1,2, Jian-Ming Jiang3,4, Christine E. Seidman3,4, Jonathan G. Seidman3,4, William T. Pu1,2, Da-Zhi Wang1,2

1Department of Cardiology,Boston Children's Hospital, 2Department of Pediatrics,Harvard Medical School, 3Department of Genetics,Harvard Medical School, 4Howard Hughes Medical Institute

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This manuscript describes a method for preparing recombinant adeno-associated virus 9 (rAAV9) vectors to manipulate gene expression in mouse hearts. This technique facilitates the study of gene function in vivo without relying on genetically modified animal models.

Key Study Components

Area of Science

  • Cardiology
  • Molecular Genetics

Background

  • rAAV9 is a viral vector used for gene delivery.
  • Manipulating gene expression in vivo is crucial for understanding cardiac functions.
  • This method provides an alternative to traditional genetically modified models.

Purpose of Study

  • To prepare rAAV9 vectors for gene expression manipulation.
  • To enable functional studies of gene function in mouse hearts.
  • To improve accessibility to gene manipulation techniques in cardiac research.

Methods Used

  • Generation of rAAV9 constructs.
  • Culturing of HEK293 cells.
  • Transfection of cells using a combination of plasmids and PEI.
  • Preparation of a PEI to DNA solution for effective transfection.

Main Results

  • The method allows for efficient manipulation of gene expression in mouse hearts.
  • Facilitates in vivo studies of gene function.
  • Demonstrates advantages over traditional genetically modified models.

Conclusions

  • This technique enhances the ability to study cardiac gene functions.
  • It provides a simpler approach to gene manipulation in vivo.
  • Future applications may expand understanding of cardiac biology.

Frequently Asked Questions

What is rAAV9?
rAAV9 is a viral vector used for delivering genes into cells, particularly in cardiac research.
How does this method improve gene manipulation?
It allows for direct manipulation of gene expression in vivo without the need for genetically modified animals.
What are the advantages of using rAAV9?
rAAV9 provides efficient gene delivery and expression in cardiac tissues, facilitating functional studies.
What cell line is used in this method?
HEK293 cells are cultured and transfected to produce rAAV9 vectors.
Can this method be applied to other tissues?
While this study focuses on mouse hearts, similar techniques may be adapted for other tissues.

Dans ce manuscrit, une méthode de préparation de vecteurs recombinants du virus adéno-associé 9 (rAAV9) pour manipuler l’expression génique dans le cœur de souris est décrite.

L’objectif global de cette procédure est de préparer le virus adéno-associé recombinant neuf, ou rAAV9, pour manipuler l’expression des gènes dans les cœurs de souris. La méthode peut répondre à des questions clés dans le domaine de la cardiologie et de la génétique moléculaire, telles que comment étudier la fonction des gènes dans le cœur de souris in vivo. Le principal avantage de cette technique est qu’elle nous permettra de manipuler facilement l’expression et la fonction des gènes in vivo dans le cœur de la souris, permettant l’accès fonctionnel de la fonction des gènes sans avoir à s’appuyer sur les modèles animaux génétiquement modifiés.

Après avoir généré les constructions rAAV9 et cultivé les cellules HEK293 selon le protocole de texte, pour transfecter les cellules le premier jour, combinez 70 microgrammes de plasmide AAV Rep-Cap, 70 microgrammes de plasmide rAAV9 et 200 microgrammes de plasmide Ad helper dans un tube à centrifuger de 50 millilitres. Ajoutez 49 millilitres de DMEM à température ambiante sans FBS dans le tube et mélangez bien. Ensuite, pour faire une solution PEI à ADN quatre pour un, ajoutez 1 360 microlitres de PEI dans le tube et mélangez bien.

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