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DOI: 10.3791/54787-v
Jian Ding1,2, Zhi-Qiang Lin1,2, Jian-Ming Jiang3,4, Christine E. Seidman3,4, Jonathan G. Seidman3,4, William T. Pu1,2, Da-Zhi Wang1,2
1Department of Cardiology,Boston Children's Hospital, 2Department of Pediatrics,Harvard Medical School, 3Department of Genetics,Harvard Medical School, 4Howard Hughes Medical Institute
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This manuscript describes a method for preparing recombinant adeno-associated virus 9 (rAAV9) vectors to manipulate gene expression in mouse hearts. This technique facilitates the study of gene function in vivo without relying on genetically modified animal models.
Dans ce manuscrit, une méthode de préparation de vecteurs recombinants du virus adéno-associé 9 (rAAV9) pour manipuler l’expression génique dans le cœur de souris est décrite.
L’objectif global de cette procédure est de préparer le virus adéno-associé recombinant neuf, ou rAAV9, pour manipuler l’expression des gènes dans les cœurs de souris. La méthode peut répondre à des questions clés dans le domaine de la cardiologie et de la génétique moléculaire, telles que comment étudier la fonction des gènes dans le cœur de souris in vivo. Le principal avantage de cette technique est qu’elle nous permettra de manipuler facilement l’expression et la fonction des gènes in vivo dans le cœur de la souris, permettant l’accès fonctionnel de la fonction des gènes sans avoir à s’appuyer sur les modèles animaux génétiquement modifiés.
Après avoir généré les constructions rAAV9 et cultivé les cellules HEK293 selon le protocole de texte, pour transfecter les cellules le premier jour, combinez 70 microgrammes de plasmide AAV Rep-Cap, 70 microgrammes de plasmide rAAV9 et 200 microgrammes de plasmide Ad helper dans un tube à centrifuger de 50 millilitres. Ajoutez 49 millilitres de DMEM à température ambiante sans FBS dans le tube et mélangez bien. Ensuite, pour faire une solution PEI à ADN quatre pour un, ajoutez 1 360 microlitres de PEI dans le tube et mélangez bien.
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