여기서, 우리는 마우스에서 국소치성 치주염을 유도하는 프로토콜을 제시한다. 우리는 마우스의 치아에 구멍을 뚫고 국소 염증을 유발하기 위해 펄프를 노출시키는 방법을 보여줍니다. 마이크로 CT 및 조직학과 같은 이 염증의 본질을 조사하는 분석 방법도 입증됩니다.
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이 논문에서
요약
초록
국소 유도 염증에 관여하는 메커니즘은 여러 가지 사용 가능한 동물 모델을 사용하여 연구 될 수있다. 이들 중 하나는 정점 치주염 (AP)의 유도입니다. 정점 치주염은 치아 뿌리를 둘러싼 치주 조직에서 염증성 성질의 일반적인 병리학입니다. 이 병리학의 특성과 메커니즘을 더 잘 이해하기 위해서는 마우스에서 절차를 수행하는 것이 유리합니다. 이 치과 펄프가 노출 될 때까지 이 치과 성 염증의 유도는 마우스 치아로 드릴링하여 달성됩니다. 다음으로, 치아 펄프는 시간이 지남에 따라 자연 구강 세균총에 의해 오염되어 정점 치주염을 유발하여 노출됩니다. 이 기간 이후에는 동물을 희생시키고 치아와 턱뼈를 다양한 방법으로 분석할 수 있습니다. 일반적인 분석은 마이크로 CT 화상 진찰 (뼈 재흡수를 평가하기 위하여), 조직학적 염색, 면역 조직 화학 및 RNA 발현을 포함합니다. 이 프로토콜은 균일 한 조건으로 생체 내 실험 환경에서이 염증 과정을 더 잘 이해하기 위해 경구 생물학 분야의 연구에 유용합니다. 절차는 마우스와 고립 된 턱의주의 깊은 취급을 필요로하며, 기술의 시각적 데모가 유용합니다. 유도 된 치주염으로 이어지는 절차의 모든 기술적 측면과 마우스 모델의 특성화가 입증됩니다.
서론
이 방법의 목적은 자연 미생물로 정점을 오염시킴으로써 마우스에서 정점 치주염을 유도한 다음이 병리학 적 과정의 다양한 특성을 연구하는 것입니다.
정점 치주염 (AP)은 치아 뿌리를 둘러싼 치주 조직에서 염증성 성질의 일반적인 병리학입니다. 이 치과 질환은 심한 통증을 유발할 수 있으며 치과 의사가 치료해야합니다. 치료 옵션은 근관 치료 (기본 또는 보조), endodontic 수술, 치아 추출, 또는 임상 및 방사선 연구 결과에 따라 후속, 임상의의 의견. 이 염증 과정의 메커니즘은 수십 년동안 연구되었지만 1,2,3은아직 포괄적으로 이해되지 않습니다. 이 병리학의 심각성을 고려할 때, 따라서 근본적인 본질을 다루는 연구에 대한 명확한 필요성이 있습니다. 따라서 AP 의 연구가 가능한 시스템은 과학적으로 큰 관심사입니다.
AP는 국부 조직과 면역 체계를 수반하는 복잡한 병리학 적 과정이기 때문에 시험관 내 연구는 프로세스의 완전한 이해를 위해 충분하지 않습니다. 이 질병의 임상 샘플의 연구는 또한 윤리적 한계와 다른 사람들과 다....
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프로토콜
여기에 설명된 모든 방법은 히브리 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다 (윤리 없음. MD-17-15093-5).
1. 동물 마취 및 위치
- 아래에 설명된 대로 멸균 솔루션을 준비합니다.
- 5 mL의 케타민 7 mg/mL과 인산염 완충액(PBS)/식염수로 희석된 0.09 mg/mL 의 메데토미딘을 준비합니다.
- PBS/식염수로 희석된 아티파메졸(0.4 mg/mL)의 멸균 용액을 준비하십시오(5 mL의 양을 준비하는 것이 좋습니다).
- 국소 마취를 위해 PBS/식염수로 희석된 메피바카인(7.5 mg/mL)의 멸균 용액을 준비하십시오(메피바카인 의 공급된 유리병 1개만으로도 7.2 mL의 재고에 충분합니다).
- 실험을 위해 6-8주 된 암컷 C57BL/6 마우스를 사용하십시오. 시설과 동물 먹이 광고 리비텀에서 제공하는 표준 물과 음식과 함께 특정 병원균 (SPF) 동물 단위에 동물을 유지합니다.
- 마우스를 계량하고 무게의 각 그램에 대해 10 μL의 부피를 복강 내 (IP)를 주입합니다. 예를 들어, 무게가 20그램인 마우스의 경우,
케타민/메데토미딘 용액 200 μL을 주입합니다. ....
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결과
실험 단계의 흐름도는 그림1에 표시됩니다. 프로토콜에서 언급 한 바와 같이, 마우스는 마취되고, 한쪽에 그들의 첫 번째 하악 대구치 펄프 노출까지 드릴, 반대 측 치아는 대조군으로 남아있는 동안. 다음으로, 치아는 42 일 동안 구강 식물에 의해 오염되어 모니터링되고 진통제를 받습니다. 42 일 후에 마우스는 안락사되고 치아와 인접한 턱은 분석을 위해 취합니다.
도 2는 첫 번째 우측 몰 펄프 노출 후 마우스 하악의 임상 이미지를 보여 준다. 도 2A에서 전체 하악골은 도시되고, 도 2B의 인셋은 처리된 제1 우측 어금니의 확대를 나타낸다. 왼쪽 첫 번째 대구치가 대조군으로 .......
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토론
방법은 마우스에 있는 정점 치주염의 유도를 위해 여기에서 소개됩니다. 이 방법의 목표는이 염증 과정의 메커니즘과 결과를 연구하기위한 정점 치주염 상태를 이용하는 것입니다. 정점 치주염은 뿌리가 완전히 발달되는 나이인 6-8주령생에서24세로유도되었다. 이 모델에서 치주염을 일으키기 위해 마우스 하악골의 치아 펄프는 치과 용 버를 사용하여 노출됩니다. 쥐의 경구 식물군 (SPF 조건에서)의 박테리아가 치아의 펄프와 근관을 침범하여 펄프 괴사를 일으키고 정점 조직에 LPS를 분비하여 정점 염증을 유발합니다.
이 절차를 수행할 때는 다음 중요한 단계에 주의하십시오. 펄프 노출 시 동물의 정확한 위치는 절차의 성공에 매우 중요합니다. 중요한 단계는 펄프의 적절한 노출입니다. 운하 노출이 부족하면 치과 교량 형성이 발생할 수 있으며, 이로 인해 시술의 실패와 AP를 생성할 수 없게 될 수 있습니다. 펄프 노출 하는 동안, 부.......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없다
감사의 글
우리는 동물 포지셔닝에 대한 그의 도움에 대한 박사 오드 헤이먼, 마이크로 CT 분석에 대한 도움을 라파엘 리버, 그리고 교수 안디아라 드 로시 달데건 은 실험을 미리 형성에 대한 조언을 인정하고 싶습니다. 우리는 또한 비판적 독서와 편집에 대한 박사 시드니 코헨을 인정하고 싶습니다.
이 작품은 이자도르 I. 카바코프 연구 기금에서 MK와 IA에 대한 보조금과 이스라엘 과학기술부의 이츠학 나본 펠로우십을 통해 지원되었습니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 아티파메졸 염산염 | Eurovet 동물 건강 | CAS 104075-48-1 | |
| ATR | 덴스플라이 | 테크니카 | |
| 차단 기계 | 라이카 | EG1150H | |
| 부프레노르핀 | 베트마켓 | 163451 | |
| 임상 현미경/쌍안 | 올림푸스 | Sz61 | |
| 치과 버 | Komet 치과 | ZR8801L 315 008 | |
| 치과 주걱 | 프리미어 | 1003737 | |
| EDTA | JT 베이커 | 8993 | |
| 엔텔란 | 수은 | 1.07961 | |
| 에오신 Y 용액, 알코올 | 시그마 | HT110116 | |
| 헤마톡실린 용액, Mayer의 | SIGMA MHS | 16 | |
| 케타민 염산염 | Vetoquinol | CAS 1867-669 | |
| Medetomidine hydrochloride (cepetor) | CP-pharma GmbH | CAS 86347-15-1 | |
| Mepivacaine HCl 3 % | Teva | CAS 96-88-8 | |
| 마이크로 브러시 - 조정 가능한 정밀 애플리케이터 | PARKELL | S379 | |
| micro-ct 스캐너 | scanco | uCT 40 | |
| 파라 핀 | Leica | 39602004 | |
| PBS | SIGMA | D8537 | |
| PFA | EMS | 15710 | |
| 클로람페니콜 눈 연고 (5%) | Rekah 제약 | CAS 56-75-7 | |
| 핀셋 | WAM | Ref-CT | |
| 자일라진 | Eurovet 동물 건강 | CAS 7361-61-7 | |
| 크실렌 | 가돗 | CAS 1330-20-7 |
참고문헌
- Azuma, M. M., Samuel, R. O., Gomes-Filho, J. E., Dezan-Junior, E., Cintra, L. T. The role of IL-6 on apical periodontitis: a systematic review. International Endodontics Journal. 47 (7), 615-621 (2014).
- Marton, I. J., Kiss, C. Overlapping pr....
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